白芍抗氧化成分的测定*

刘程程，廖莉玲

(1 贵阳护理职业学院，贵州 贵阳 550081；2 贵州师范大学化学与材料科学学院，贵州 贵阳 550001)



分析测试

白芍抗氧化成分的测定*

刘程程1，廖莉玲2

(1 贵阳护理职业学院，贵州 贵阳 550081；2 贵州师范大学化学与材料科学学院，贵州 贵阳 550001)

测定白芍的主要抗氧化成分(总黄酮、多酚、多糖及维生素 A、E、C)的含量，为其开发利用提供参考。采用紫外分光光度法和高效液相色谱测定白芍中乙醇提取液中总黄酮、多酚、多糖 及白芍干样中维生素A，维生素C，维生素E的含量。白芍中黄酮含量为7.15 mg/g；多酚含量为15.63 mg/g；多糖含量为80.41 mg/g；维生素C含量为0.51 mg/100 g；未检测出维生素A与维生素E的含量。

白芍；黄酮；多酚；多糖；维生素

芍药属于毛茛科芍药属多年生草本植物，《神农本草经》和《名医别录》中对芍药的均有记载，认为其具有治腹痛、除血痹等功效[1-2]。已有研究表明，白芍提取物具有抗氧化清除自由基的活性[3-4]，为进一步研究白芍的抗氧化活性与其化学组成的相关性，本论文对白芍的主要抗氧化成分的含量进行了测定，为白芍的开发利用提供科学的依据。

1 材料与仪器

1.1 药材

白芍产自贵州施秉牛大场GAP药材基地。

1.2 仪器及试剂

DK-98-1电子恒温水浴锅，天津泰斯特仪器有限公司；FZ102微型植物粉碎机，天津市泰斯勒公司；UV2300紫外分光光度计，上海天美科学仪器有限公司；QC10260C超声波清洗器，天津市旗美科技有限公司；DG23B-DC(F)/DG23C-DC(F)美的微波炉，美的集团；LC-20A岛津高效液相色谱仪，日本；A200S电子天平，德国。

芦丁标准品、没食子酸标准品、维生素A标准品、维生素E标准品均由中国药品生物制品检定所提供，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方 法

2.1 样品预处理

购买药材，晾干后，放入微型植物粉碎机中粉碎，过筛，即得到相应的粉末。放入干燥器中备用。

2.2 含量的测定

2.2.1 黄酮、多酚、多糖含量的制定[5]

黄酮：用分光光度法，以芦丁为标准品测定所选植物的总黄酮含量[6]；多酚：用分光光度法，以没食子酸为标准品测定所选植物的总多酚含量[7]；多糖：苯酚-硫酸法[8]；含量按下式计算：

式中：X——样品中总黄酮含量，mg/gc——校准曲线中黄酮的浓度，mg/mLV1——稀释体积，mLV2——样品溶液的体积，mLV3——取样体积，mLM——样品质量，g

2.2.2 维生素A、E含量的制定

维生素A与E：液相色谱法[9]

Xi=Ei×Ai/AE

式中：Xi——试样中待测组分i的含量Ei——试样中标准组分i的含量Ai——试样中待测组分i的峰值AE——试样中标准组分i的峰值

2.2.3 维生素C含量的制定

维生素C：2,4-二硝基苯肼法[10]

式中：X——样品中抗坏血酸含量，mg/100gC——样品氧化液中抗坏血酸的浓度，mg/LV——称取的匀浆用1%草酸溶液定容的体积，mLF——样品氧化处理过程中的稀释倍数 m——称取匀浆中含原试样的质量，g

2.3 标准曲线的制定

2.3.1 总黄酮标准曲线的制定

配制芦丁标准品0.2 mg/mL，分别准确吸取芦丁溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL置于6个25 mL容量瓶中，先加6 mL 95%乙醇溶液；再加1 mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6 min；然后加入1 mL 10%硝酸铝溶液，摇匀，静置6 min；最后加10 mL 4.3% NaOH溶液，加水稀释至刻度，摇匀，静置15 min，在波长500 nm处测定吸光度，重复3次取平均值，作图得到芦丁的标准曲线(图1)。用样液代替芦丁溶液，相同条件下显色测吸光度，按线性回归方程计算试样中的总黄酮含量。

图1 芦丁标准曲线

2.3.2 多酚标准曲线的制定

图2 没食子酸标准曲线

总酚含量的测定：配制没食子酸标准品0.05 mg/mL，分别准确吸取没食子酸溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL置于5个25 mL棕色容量瓶中，先加1 mL磷钼钨酸试剂；然后加15 mL 5%碳酸钠溶液，摇匀，加水稀释至刻度，静置2 h，在波长760 nm处测定吸光度，重复3次取平均值，作图得到没食子酸的标准曲线(图2)。用样液代替没食子酸溶液，相同条件下显色测吸光度，按线性回归方程计算试样中的总多酚含量。

2.3.3 多糖标准曲线的制定

多糖含量的测定：配制葡萄糖标准品1 mg/mL，精密量取葡萄糖溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL分别置于6个50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，各精密吸取1.0 mL置塞试管中，加入1.0 mL 8%苯酚溶液，置水浴中加热15 min，取出冷至室温，在波长490 nm处测定吸光度，重复3次取平均值，作图得到葡萄糖的标准曲线(图3)。用样液代替葡萄糖溶液，相同条件下显色测吸光度，按线性回归方程计算试样中的多糖含量。

图3 葡萄糖标准曲线

2.3.4 维生素C标准曲线的制定

取50 mL标准溶按2,4-二硝基苯肼法处理。以抗坏血酸浓度(μg/mL)为横坐，吸光值为纵坐标标绘制标准曲线(图4)。用样液代替抗坏血酸溶液，相同条件下显色测吸光度，按线性回归方程计算试样中的维生素C含量。

图4 维生素C的标准曲线

从黄酮，多酚，多糖以及维生素C的标准曲线可以看出，相关系数R2均在0.999以上，具有良好的线性关系。

2.4 液相图谱

2.4.1 维生素A与E

液相色谱法[10]。工作条件见表1。

表1 液相色谱柱的工作条件

2.4.2 维生素A、E的液相谱图

图5 维生素A、E对照品色谱图

3 结果与讨论

3.1 白芍中抗氧化成分含量

白芍主要抗氧化成分测定结果见表2。

表2 白芍中抗氧化主要成分含量

3.2 讨 论

实验选取白芍为研究对象，运用紫外分光光度法和高效液相色谱法对白芍乙醇提取液的主要抗氧化成分(总黄酮、多酚、多糖、维生素A、维生素C、维生素E)的含量进行测定。白芍中黄酮含量为7.15 mg/g；多酚含量为15.63 mg/g；多糖含量为80.41 mg/g；维生素C含量为0.51 mg/100 g；未检测出维生素A与维生素E的含量。其中黄酮、多酚是植物中主要的抗氧化活性成分，而多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、降血糖等多种生理功效。维生素C作为一种电子供体，参与体内氧化还原反应，具有多种生理功能，如抗氧化、促进铁的吸收等[11]。可以推断白芍提取物的抗氧化活性与其含有一定量的黄酮、多酚、多糖、维生素C有关，白芍抗氧化活性部位及有效成分有待于进一步研究。

[1] 张建军,李伟,王丽丽,等.赤芍和白芍品种、功效及临床应用述评[J].中国中药杂志,2013,38(20):3595-3601.

[2] 王忠良.赤芍与白芍的药理作用比较[J].中国继续医学教育,2016,8(3):199-200.

[3] 徐晓燕,吴兆喜,张星,等.不同极性白芍提取物的抗氧化活性研究[J].食品与药品, 2011,13(9):322-325.

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[5] 刘程程,韦万丽,廖莉玲.6种黔产清热类中草药主要抗氧化成分的含量[J].贵州农业科学, 2012,40(2):41-43.

[6] 沈小燕,解成喜.天山堇菜中总黄酮的提取和测定[J].分析试验室,2008,27(S2):235.

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[8] 丰朝霞,张鸿.分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量[J].时珍国医国药,2000,11(2):109.

[9] 刘忠敏.现代分析仪器分析方法通则及计量检定规程[M].北京:科学技术文献出版社, 1997:377.

[10]张蕊. 2004食品卫生检验新技术标准规程[M].北京:光明日报出版,2004:464.

[11]廖莉玲,刘程程,韦万丽,等.7种黔产补益类中草药主要抗氧化成分的测定量[J].时珍国医国药,2012,23(10):2498-2500.

Determination of Contents of Main Antioxidant Compositions in Radix Paeoniae Alba*

LIUCheng-cheng,LIAOLi-ling

(1 Guiyang Nursing Vocational College, Guizhou Guiyang 550081; 2 School of Chemistry and Material Science, Guizhou Normal University, Guizhou Guiyang 550001, China)

The contents of the main antioxidant composition such as total flavone, polyphenol，polysaccharide and Vitamin A, C, E in Radix Paeoniae Alba were determined for its exploitation and utilization. UV and HPLC methods were used to determine the contents of the total flavone, polyphenol, polysaccharide in ethanol and Vitamin A, C, E of Radix Paeoniae Alba. The content of the total flavone was up to 7.15 mg/g, the content of polyphenol was up to 15.63 mg/g, the content of polysaccharide was up to 80.41 mg/g, the content of Vitamin C was up to 0.51 mg/100 g, Vitamin A and Vitamin E was not detected.

Radix Paeoniae Alba; the total flavone; polyphenol; polysaccharide; Vitamin

贵州省优秀科技教育人才省长专项资舍项目(黔省专合字201021号)。

刘程程(1984-)讲师，硕士，从事分析化学研究。

廖莉玲，教授，硕士，从事天然产物方面的研究。

R284.2

A

1001-9677(2016)023-0081-03