穿心莲内酯自乳化制剂工艺研究

李园园

摘要： 目的：筛选穿心莲内酯自乳化释药系统的最佳处方。方法：通过筛选得出该自乳化系统的油相、表面活性剂和助表面活性剂，确定最佳处方组成比例。结果：穿心莲内酯最佳自乳化给药系统由中链甘油三酸酯、膏状大豆卵磷脂和无水乙醇组成，最佳质量比为3：2：1。结论：穿心莲内酯自乳化制剂制备工艺简单，质量稳定，能显著提高药物的溶解度。

Abstract： Objective： to select the best prescription of andrographolide self-emulsifying drug delivery system. Methods： the oil phase， surfactant and co-surfactant are selected to determine the optimum formulation. Results： the best andrographolide self-emulsifying drug delivery system consists of medium chain triglycerides， paste soy lecithin and ethanol； the optimum ratio is 3：2：1. Conclusion： andrographolide self-emulsifying preparation process is simple， has a stable quality， and can significantly improve the solubility of the drug.

关键词： 穿心莲内酯；自乳化；处方设计

Key words： andrographolide；self-emulsifying；performulation

中图分类号：R286 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2016）36-0122-02

0 引言

穿心莲内酯为天然植物穿心莲（Andrographis paniculata （Burm.f.）Nees）的主要有效成分，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物，近现代研究表明以穿心莲内酯为代表的二萜内酯类成分具有广谱的抗肿瘤活性[1]，但均难溶于水，口服生物利用度较低，从而阻碍了其临床的广泛应用。

自乳化释药系统（self-emulsifying drug delivery system， SEDDS）由油相、表面活性剂和助表面活性剂组成，在环境温度（通常指37℃）和温和搅拌的条件下，可自发形成乳滴为o/w型的5μm左右的乳剂[2]。SEDDS制剂可提高难溶性药物和脂溶性药物的溶解度，增加药物的吸收速度和程度，提高药物的生物利用度，目前已有学者采用SEDDS系统提高了水难溶性药物水飞蓟素、紫杉醇等的生物利用度[3-4]。SEDDS在体内的乳化情况主要取决于两个因素：乳滴粒径及Zeta电位。乳滴粒径越小，越有利于药物的释放与吸收；Zeta电位越大，乳滴间斥力就越大，乳剂就越稳定[5]。本研究通过筛选、优化穿心莲内酯自乳化制剂工艺，制备出穿心莲内酯自乳化制剂，大大提高了穿心莲内酯在水中的溶解度。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪（Waters 2690），检测器（Waters 2487） 色谱柱（C18柱，迪马一代，250×4.6mm），N2000型色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；FA1004分析天平（上海精科天平），Zetasizer Nano （马尔文仪器有限公司，型号：Nano-zs90）；恒温水浴箱（Fisher Scientific）；2003型恒温磁力加热搅拌器；KQ-300VDE型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药 穿心莲内酯（成都天台山制药有限公司）；大豆卵磷脂（上海太伟药业有限公司）；Tween 80（南京威尔化工有限公司，分析纯）；Pluronic F-68（BASF CO.USA）；丙二醇（天津市德恩化学试剂有限公司）；甘油（药用规格）；大豆油（中粮艾地盟粮油工业有限公司）；花生油（莱阳鲁花浓香花生油有限公司）；中链甘油三酸酯（铁岭北亚药用油有限公司）；油酸乙酯（中国医药（集团）上海化学试剂公司）；乙酸乙酯（天津市巴斯夫化工有限公司）；橄榄油；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：（Diamonsil C18，250×4.6mm）；柱温：25℃；流动相∶甲醇∶水（60∶40）；检测波长：226nm；流速：0.8mL / min。

2.2 标准曲线 精密称取穿心莲内酯4.9mg，置10mL容量瓶中，加甲醇适量，超声20 min使之溶解，并稀释至刻度，得0.49 mg·ml-1的标准溶液。分别进样0.5，1，3，5，7μL测定峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，质量（单位：μg）为横坐标进行回归分析，得线性方程A=2×105x+83252，r=0.9997，结果表明穿心莲内酯在0.245μg-3.430μg与峰面积呈良好的系（见图1）。

2.3 精密度和回收率试验 精密吸取穿心莲内酯（0.45 mg·ml-1）对照品溶液1μL，重复进样6次，测定穿心莲内酯色谱峰面积，其RSD为0.96%（n=6），表明仪器精密度良好。

制备3份空白自乳化体系，分别精密加入穿心莲内酯对照品2.0mg、2.5mg、3.0mg，超声溶解，然后吸取100μL，在温和磁力搅拌、37℃水浴条件下，加入到10mL蒸馏水中，直到溶液形成乳白色均一乳剂。每份样品均加9倍量甲醇稀释后，超声混匀，分别进样10μL，测定穿心莲内酯峰面积，外标法计算含量。计算得平均回收率为101.39%。

2.4 SEDDS的制备 取处方量的油相，乳化剂和助乳化剂，超声混匀；加入处方量的药物，37℃水浴加热溶解，得粘稠液，37℃放置12h。

2.5 处方筛选

2.5.1 穿心莲内酯在不同油中溶解度测定 分别取乙酸乙酯、好理油、蓖麻油、大豆油、花生油、油酸乙酯、橄榄油、中链甘油三酸酯约2mL置EP管中依次加入过量的穿心莲内酯超声30min溶解使成过饱和溶液，37℃恒温水浴平衡；离心，分别取中链甘油三酸酯、油酸乙酯和乙酸乙酯上清液过0.45μm滤膜，甲醇稀释10倍；取不溶于甲醇的大豆油、花生油、橄榄油以及好理油的上清液适量，加适量甲醇萃取12h，离心，吸取甲醇层进样测定其含量，计算溶解度见表1。

穿心莲内酯可溶于乙酸乙酯、大豆油、好理油和中链甘油三酸酯，在花生油、油酸乙酯和橄榄油中极微溶解，但乙酸乙酯毒性较大，故选择大豆油、好理油和中链甘油三酸酯作为油相进行处方筛选。

2.5.2 处方配伍筛选 以大豆油、好理油和中链甘油三酸酯为油相，Tween-80、泊洛沙姆和大豆卵磷脂为乳化剂，丙二醇、无水乙醇和甘油为助乳化剂，将油、乳化剂和助乳化剂以不同的比例混合，观察现象，考察混溶情况，结果见表2。结果表明，合适的油相组成分别为：①大豆油、大豆卵磷脂和甘油；②中链甘油三酸酯、泊洛沙姆和无水乙醇；③中链甘油三酸酯、大豆卵磷脂和无水乙醇。

分别取上述三种自乳化系统，在预实验的基础上按油∶乳化剂∶助乳化剂=3∶2∶1依2.4项下的方法制备空白自乳化体系，分别取该系统2mL，加入过量的穿心莲内酯使成过饱和溶液，超声30min，37℃恒温过夜，HPLC测含量；然后取合适的量加入一定体积的37℃的水中，边加边搅拌，使成乳液，测平均粒径和Zeta电位，结果见表3。

结果表明②③自乳化系统可明显增加穿心莲内酯的溶解度，且成乳后平均粒径较小，由Zeta电位看出乳剂较稳定；但②加入穿心莲内酯恒温过夜后出现分层现象，不稳定，所以最佳油相组成为：中链甘油三酸酯、大豆卵磷脂和无水乙醇，比例为：中链甘油三酸酯∶大豆卵磷脂∶无水乙醇=3∶2∶1。

3 讨论

①本实验在处方设计前初步考察了药物在多种油相中的溶解情况，从中筛选出对穿心莲内酯溶解度较大的油相，然后通过油相、乳化剂与助乳化剂三者之间的互溶情况筛选出合适的油相、乳化剂和助乳化剂组成。结果表明最佳组成和比例为：中链甘油三酸酯∶大豆卵磷脂∶无水乙醇=3∶2∶1，其中大豆卵磷脂为两性离子型表面活性剂，与文献报道的[6]：SEDDS一般采用非离子SA有差别。

②SEDDS在体内的乳化情况主要取决于两个因素[7]：乳滴粒径及Zeta电位。乳滴粒径越小，比表面积越大，越利于药物的释放与吸收。Zeta电位越大，乳滴间斥力就越大，乳剂越稳定。本实验筛选出的处方在体外条件下乳化后平均粒径在500nm左右，即为亚微乳。Zeta电位在-30mV左右，属于稳定的范畴。

参考文献：

[1]Yang S，Evens AM，Prachand S，et al. Mito-chondrial-mediated apoptosis in lymphoma cells by the diterpenoid lactone andrographolide，the active component of Andrographis paniculata [J].Clin Cancer Res，2010，16（19）： 4755-4768.

[2]王娇，李葆林，何晓明，等.新型自乳化给药系统研究进展[J].中国现代应用药学，2016，33（1）：119-121.

[3]Seo YG， Kim DW， Cho KH， et al. Preparation and pharmaceutical evaluation of new tacrolimus-loaded solid self-emulsifying drug delivery system [J]. Arch Pharm Res， 2015， 38（2）： 223-228.

[4]赵艳雪，冯彩霞，刘勋涛，等.水飞蓟宾自乳化制剂对CCl4 所致肝损伤的保护作用[J].中国现代应用药学，2016，33（8）：1006-1009.

[5]Bolko K， Zvonar A， Ga？觢perlin M. Mixed lipid phase SMEDDS as an innovative approach to enhance resveratrol solubility [J]. Drug development and industrial pharmacy， 2013， 18（9）：1-8.

[6]Weerapol Y， Limmatvapirat S， Kumpugdee-Vollrath M， et al. Spontaneous emulsification of nifedipine-loaded self-nanoemulsifying drug delivery system [J]. AAPS PharmSciTech， 2015， 16（2）：435-443.

[7]Bahloul B， Lassoued MA， Seguin J， et al. Self-emulsifying drug delivery system developed by the HLB-RSM approach： Characterization by transmission electron microscopy and pharmacokinetic study [J]. Int J Pharm， 2015， 487（1-2）：56-63.