松乳菇多糖(LDG-A)对S180荷瘤小鼠生理生化指标的影响

刘 露，宋 波，赵大群，许 婷，丁 祥，侯怡铃

(西华师范大学a.生命科学学院;b.西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川 南充 637009)



松乳菇多糖(LDG-A)对S180荷瘤小鼠生理生化指标的影响

刘 露，宋 波，赵大群，许 婷，丁 祥，侯怡铃

(西华师范大学a.生命科学学院;b.西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川 南充 637009)

本研究主要观察松乳菇多糖 (LDG-A) 对S180荷瘤小鼠生理生化指标的影响, 以进一步了解松乳菇多糖 (LDG-A) 是否有毒副作用。实验选取S180荷瘤小鼠眼球动脉血用于生化指标测定，并对这些指标进行生物学功能分析。结果表明各实验组小鼠生理生化指标均有不同程度变化。生物学功能分析结果提示松乳菇多糖LDG-A对小鼠的肝脏无毒副作用，且能缓解S180荷瘤小鼠的肝脏损害，同时松乳菇多糖LDG-A不影响小鼠的脂肪代谢途径。以上研究结果为多糖类抗肿瘤药物的筛选提供了科学依据。

松乳菇；多糖；S180荷瘤小鼠；生理生化指标

图1 松乳菇多糖(LDG-A)的结构

多糖(polysaccharide)又称多聚糖，是由10个以上的单糖聚合而成的生物大分子物质。近年来，食用菌多糖因具有抑制肿瘤[1-3]作用而备受关注。而食用菌多糖的高级结构、有无侧链以及连接方式均与药理作用有关，所以在我们的前期研究中，从松乳菇[4](Lactariusdeliciosus(L．exFr．)Gray)中纯化得到了水溶性的松乳菇多糖(LDG-A)单体，运用光谱学技术解析了其结构 (图1)，结果显示其为一种结构新颖的多糖(LDG-A)。该多糖是由两个单糖组成的杂多糖，即α-L-甘露糖和α- D-木糖以3∶1的比例组成，平均分子量约为110 kD，具有(1-6)α-L-甘露糖的骨架，2-O上连接一个→3)-α-D-木糖的侧链，且松乳菇多糖(LDG-A)能够显著抑制移植性肿瘤S180的生长[5]，在28 mg/kg的剂量下，抑瘤率高达68.51 %。本文拟探究松乳菇多糖(LDG-A) 对S180荷瘤小鼠[6]生理生化指标的影响，探寻其有无毒性作用，以期寻找为多糖类抗肿瘤药物的筛选提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 动 物

昆明系小鼠30只,体重(30±3)g,均购于四川南充川北医学院动物实验中心。

1.1.2 药 品

松乳菇多糖(LDG-A)来自本实验室，按照参考文献的方法制备。各种生化试剂购自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 仪器设备

AY-220 电子天平(日本岛津制作所)、UV-9100 紫外可见分光光度计(北京瑞利)、Force1418高速离心机(Labnet)、OLYMPUS光学显微镜(JAPAN)、XF9080 动物血液细胞分析仪(南京普朗医用设备有限公司)、L-3280 生化半自动分析仪(上海科学实验仪器系统有限公司)。

1.2 方 法

1.2.1 试验动物分组

30只昆明系小鼠随机分为实验组和空白对照组，实验组为皮下接种移植性肿瘤S180，分为对照组和腹腔注射松乳菇多糖(LDG-A)组，剂量为 28 mg/kg；空白对照组为正常小鼠。实验周期为7 d，实验期间动物自由采食、自由饮水。

1.2.2 血样的采集

腹腔注射7天后, 分别采血, 采血前空腹12 h。尾静脉采血用于血液常规指标测定, 眼球动脉采血用于生化指标测定[7]。

1.2.3 生理生化指标测定

采用 L-3280 半自动生化分析仪按照试剂盒说明书进行。参考值为空白对照组的正常小鼠，并由测试系统输入为默认标准参考值。

1.2.4 数据统计方法

所有数据均以平均值±标准差表示,应用 SPSS 13.0 软件进行方差分析,P<0.05 为差异显著,P<0.01 为差异极显著。

2 结果与分析

2.1 松乳菇多糖LDG-A对肝脏的影响

肌酐[8](creatinine，Cre) 是人体肌肉的代谢产物，主要通过肾小球排出体外，当肾损伤后将导致肌酐在体内蓄积损害机体健康。而血清肌酐浓度会受到肾小球的滤过能力(肾小球滤过率) 的影响。滤过能力下降，则肌酐浓度升高。通常肾小球滤过率下降到机体1/3时，血肌酐会明显上升。实验结果如表1显示，皮下接种肿瘤S180后小鼠的肌酐值增加明显，但腹腔注射LDG-A之后，小鼠的肌酐值相对于对照组下降极显著(P<0.01)。提示松乳菇多糖LDG-A可以降低S180肿瘤导致的机体肌酐的聚集，减少肿瘤诱导的机体损害。

血清中的胆红素[9]包括直接胆红素和间接胆红素，直接胆红素会在肝内经过葡萄糖醛酸化，间接胆红素不会在肝内经过葡萄糖醛酸化。结果显示(表1)，松乳菇多糖LDG-A能减小总胆红素的量，但值得注意的是直接胆红素增加显著，提示间接胆红素大量的转变成的直接胆红素，可能与小鼠体内糖代谢变化相关。

尿素[10]为含氨的化学物质，产生于蛋白质和氨基酸的分解代谢过程，尿素在肝脏中产生后融入血液，最后通过肾脏由尿排出。注射S180肿瘤之后的小鼠的尿素值相对于参考值增加极显著(P<0.01)，提示肝脏损害，腹腔注射松乳菇多糖LDG-A后，尿素值下降显著，提示肝脏损害情况有所好转。

表1 LDG-A对小鼠肝脏影响的数据结果

注：*为与参考值比较P<0.05，#为与对照组比较P<0.05，**为与参考值比较P<0.01，##为与对照组比较P<0.01。

2.2 松乳菇多糖LDG-A对酶学指标的影响

肝功能的酶学指标[11-12]主要包括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转移酶(γ-GT)。目前国内外应用最广泛的反映肝细胞损害的指标是ALT和AST，各种肝病均可引起ALT的升高；肝细胞合成分泌碱性磷酸酶ALP，胆管内压增高使肝脏合成增多，胆道排泄障碍也可使血液中ALP增高。血液中的γ-GT主要在肝细胞线粒体产生。

实验结果如表2显示，接种S180肿瘤后的小鼠，丙氨酸氨基转移酶，天冬氨酸氨基转移酶，碱性磷酸酶和谷氨酰转移酶均显著增加，提示S180荷瘤小鼠肝脏有所损害，但腹腔注射28 mg/kg松乳菇多糖LDG-A的小鼠，各项酶学指标均显著下降，提示肝脏损害有所缓解。

表2 LDG-A对小鼠酶学指标的数据结果

注：*为与参考值比较P<0.05，#为与对照组比较P<0.05，**为与参考值比较P<0.01，##为与对照组比较P<0.01。

2.3 松乳菇多糖LDG-A对蛋白质代谢的影响

总蛋白[13]TotalProtein(简称TP)由白蛋白和球蛋白组成，一般正常小鼠的总蛋白在60～80 g/L之间，若超出这个范围，说明小鼠肝脏有一定的受损。总蛋白偏高导致腹泻、呕吐、休克、高热、大量出汗，严重的还会导致多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症等。实验结果如表3显示，荷瘤小鼠对照组的总蛋白含量与参考值相比具有极显著差异(P<0.01)，注射LDG-A后，荷瘤小鼠实验组的总蛋白含量与参考值相比无明显差异，提示总蛋白含量回归正常值。

白蛋白[14](又称清蛋白，albumin,Alb)是血浆中含量最多的蛋白质；白蛋白具有较强的亲水作用，这使血浆中的白蛋白对球蛋白起到一种胶体保护的稳定作用。荷瘤小鼠对照组的白蛋白含量与参考值相比增加极显著(P<0.01)，注射LDG-A的实验组小鼠的白蛋白值相对于对照组下降极显著(P<0.01)。提示白蛋白代谢出现较大变化，具体分子机制还有待于进一步研究。

球蛋白[15](Globulin)是一种在机体中常见的具有免疫作用血清蛋白。荷瘤小鼠对照组的球蛋白含量相对于参考值无明显变化，LDG-A组的球蛋白与对照组相比增加显著(P<0.05)。提示腹腔注射松乳菇多糖LDG-A后，小鼠的免疫系统受到调控。这可能与松乳菇多糖LDG-A显示出较强的抗肿瘤活性相关。

表3 LDG-A对小鼠蛋白质代谢数据结果

注：*为与参考值比较P<0.05，#为与对照组比较P<0.05，**为与参考值比较P< 0.01，##为与对照组比较P<0.01。

2.4 松乳菇多糖LDG-A对血脂血糖的影响

肝脏是维持血糖平衡的重要器官。当肝脏受损后，参与代谢的多种酶活性降低，肝糖原合成减少，肝及周围组织摄取和氧化糖的能力下降，导致血液中的葡萄糖升高。我们的实验结果如表4显示，荷瘤小鼠对照组的葡萄糖含量相对于参考值增加极显著(P<0.01)，而注射LDG-A后的实验组葡萄糖含量相对于对照组下降极显著(P<0.01)。该结果与前述直接胆红素增加相关。

总胆固醇(total cholesterol,TCHO)，是血液中所有脂蛋白所含胆固醇之和。总胆固醇主要由肝脏合成和储存，包括游离胆固醇和胆固醇脂。胆固醇还能合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质。荷瘤小鼠对照组的总胆固醇含量与参考值相比增加不明显，而注射LDG-A之后的实验组的总胆固醇也在正常值范围之内。

甘油三酯(Triglyceride,TG)是三分子长链脂肪酸和甘油形成的可提供能量的脂肪分子。甘油三酯是机体内含量最多的脂类，甘油三酯也可在肝脏和脂肪等组织合成。荷瘤小鼠对照组与注射LDG-A的实验组无明显变化。综上结果提示松乳菇多糖LDG-A并不影响小鼠的脂肪代谢途径。

表4 LDG-A对小鼠血脂血糖的数据结果

注：*为与参考值比较P<0.05，#为与对照组比较P<0.05，**为与参考值比较P<0.01，##为与对照组比较P<0.01。

3 讨 论

目前治疗恶性肿瘤的方式主要是手术，放疗和化疗。放射治疗[16]指通过射线消除病灶的一种局部治疗方法，会损害白细胞导致全身功能紊乱和失调；化学药物治疗是一种全身治疗的手段，到组织免疫功能下降。近年来，从天然产物中寻找抗肿瘤的活性成分成为主要的研究热点。真菌多糖对肿瘤细胞有直接的细胞毒活性[17-18]，在体外可以杀死癌细胞，而对正常细胞无杀伤作用，这是真菌多糖与其他细胞毒性抗肿瘤药物相比具有优势的地方之一。肝脏是人体最大腺体，是构成网状内皮系统的重要组成部分，也是免疫的重要器官，它虽然不直接产生抗体，但有大量巨噬细胞能在免疫调节发挥重要作用。本实验通过对荷瘤小鼠注射LDG-A后测定生理生化指标，表明松乳菇多糖LDG-A对小鼠的肝脏无毒副作用，且能缓解S180荷瘤小鼠的肝脏损害，同时松乳菇多糖LDG-A不影响小鼠的脂肪代谢途径。

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Effect of Polysaccharides (LDG-A) from Lactarius deliciosus (L.ex Fr.) Gray on Physiological and Biochemical Indexes of Mice Bearing S180 Tumor

LIU Lu,SONG Bo,ZHAO Daqun,XU Ting,DING Xiang,HOU Yiling

(a.College of Life Science,b. Key Laboratory of Southwest China Wildlife Resources Conservation (China West Normal University)，Ministry of Education，Nanchong Sichuan 637009,China)

This study was mainly to observe the effect of LDG-A on the physiological and biochemical indexes of mice bearing S180 tumor,so as to further study whether the polysaccharide (LDG-A) is toxic and has side effects.The ocular artery blood of mice bearing S180 tumor was selected for biochemical indicators analysis,and the biological function of these indexes was analyzed.The results showed that the physiological and biochemical indexes in all the experimental groups were changed in different degrees.The biological function analysis suggested that the polysaccharide of LDG-A was not toxic to the livers of the mice and could alleviate the liver damage of mice bearing S180 tumor, and at the same time,the fat metabolism of the mice was not affected.The above results provide a scientific basis for the screening of antitumor drugs.

Lactariusdeliciosus(L.exFr.) Gray;polysaccharide;S180 tumor bearing mice;physiological and biochemical index

1673-5072(2016)04-0380-05

2016-05-20

刘 露(1992—)，女，四川平武人，硕士研究生，主要从事微生物学研究。

侯怡铃(1983—)，女，四川南充人，博士，教授，硕士生导师，主要从事生物化学与分子生物学研究。 E-mail：starthlh@126.com

Q539；Q594

A

10.16246/j.issn.1673-5072.2016.04.004