眼镜蛇肌肉注射盐酸左氧氟沙星血药浓度变化规律的初步研究

王秋华， 李睿君， 苏接瑜， 廖黎黎， 张馨文， 曾 芸

(1.广西大学动物科学技术学院 ， 广西南宁530005 ; 2.南宁市馨宇蛇类养殖基地 ， 广西南宁530225)

眼镜蛇肌肉注射盐酸左氧氟沙星血药浓度变化规律的初步研究

王秋华1， 李睿君1， 苏接瑜1， 廖黎黎1， 张馨文2， 曾 芸1

(1.广西大学动物科学技术学院 ， 广西南宁530005 ; 2.南宁市馨宇蛇类养殖基地 ， 广西南宁530225)

为了给临床防治蛇病合理应用左氧氟沙星提供理论依据，本试验采用微生物法测定眼镜蛇肌肉注射盐酸左氧氟沙星后的血药浓度变化。 结果显示： 眼镜蛇肌肉注射盐酸左氧氟沙星后0.25 h可以检测到药物， 平均血药浓度为0.78 μg/mL， 0.5 h为0.88 μg/mL， 1 h为0.81 μg/mL， 2 h之后血药浓度逐渐下降， 24 h未能检测到血液中含有药物； 药物代谢动力学主要参数为： 达峰时间Tmax为0.417±0.118， 峰浓度Cmax为0.902±0.049 μg/mL， 半衰期t1/2λ为13.812±1.864 h。试验表明：眼镜蛇肌肉注射盐酸左氧氟沙星吸收快， 消除缓慢。建议蛇临床应用盐酸左氧氟沙星的方法为肌肉注射， 给药剂量10 mg/kg， 给药间隔时间48 h。

盐酸左氧氟沙星 ； 眼镜蛇 ； 血药浓度

蛇类在我国有着长期的应用历史，其在食用，药用，生态平衡保护中有着广泛的作用。随着经济社会的发展，我国对蛇类产品需求日益增加，而野生蛇类资源有限，因此人工养殖蛇类是解决目前对蛇类产品需求紧张的重要途径。人工养殖实行高密度养殖模式导致蛇抗病能力降低，发病率增高，有报道认为，75%蛇病是由细菌感染引起的[1]，临床抗菌药不合理应用造成细菌耐药性增加，导致蛇病越来越复杂，因此合理使用抗菌药物是解决人工养殖蛇类细菌性疾病的有效措施。本研究在日常接诊蛇病例工作基础上，研究左氧氟沙星在眼镜蛇体内血药浓度变化规律，为临床治疗蛇病合理应用该药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要药品及仪器 盐酸左氧氟沙星粉由广西兽药制剂工程研究中心提供，含量90.7%；营养琼脂培养基，购自北京陆桥生物技术有限责任公司；超净工作台(苏净安泰，AIRTECHA)；恒温培养箱(天津市泰斯特仪器有限公司，WP25)。

1.2 菌种及实验动物 彭氏变形杆菌由广西大学动科院基础兽医实验室提供，是实验室临床分离保存的蛇源性细菌；眼镜蛇购自广西南宁市馨宇蛇类养殖基地。

1.3 5%盐酸左氧氟沙星溶液配制 精确称取左氧氟沙星粉，加入注射用水，加热溶解，冷却至室温，用氢氧化钠调节pH值在5.0～6.0之间，定容，用0.65 μm滤膜精滤，100 ℃热压30 min，无菌分装备用。

1.4 药敏纸片制备 用无菌小镊子取灭菌的空白滤纸片浸入相应浓度的药液或血液样品0.5 min，取出沿管壁轻轻去掉多余的液体，60 ℃烘干，备用。

1.5 含菌培养基制作 在超净工作台中，取经无菌检查合格的普通营养琼脂，用灭菌棉签沾取一定量的彭氏变形杆菌悬液(1.5×109CFU/mL)，均匀涂布于营养琼脂上，静置，待培养基表面无泛光液体即可使用。

1.6 标准曲线的制作 精密称取左氧氟沙星标准品适量，用0.1 mol/L盐酸溶解后定容制成5 120 μg/mL的标准贮备液，再用0.1 mol/L盐酸稀释至浓度为0.125、0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8 μg/mL的标准溶液。取灭菌空白滤纸片浸入上述各浓度标准溶液制备对应浓度药敏纸片，将药敏纸片平贴在含菌培养基上，每个浓度做3个重复，静置10分钟，于37 ℃恒温倒置培养18～24 h，用游标卡尺测量药敏纸片的抑菌圈直径。以抑菌圈直径平方为横坐标，药物浓度的对数值为纵坐标做标准曲线图。

1.7 血液药物浓度测定 取6条健康眼镜蛇，给药前1 d抽取血样作为空白对照。按4 mg/kg体重剂量，肌肉注射5%盐酸左氧氟沙星溶液，分别于给药后 0.25、0.5、1、1.5、2、3、5、7、9、12、24 h尾静脉采血 0.1 mL，按1.4和1.6方法制作血液含药纸片并测定。

1.8 数据处理 采用非房室模型统计矩理论并借助Windows Microsoft (R) Excel版本2007计算药动学参数，同时以血药浓度平均值和时间绘制药时曲线。

2 结果

2.1 血液药物浓度检测结果 药物在0.125～8 μg/mL浓度范围内，抑菌圈直径平方和浓度对数呈现良好的线性关系，线性方程为y=0.008 9x-1.773 1(R2=0.987)。眼镜蛇单剂量肌肉注射盐酸左氧氟沙星后，血药浓度在0.5 h达到峰值 0.88±0.067 μg/mL。达到峰浓度后，其在体内的分布、消除分两相，在0.5～3 h消除较快，3～12 h消除较缓慢，给药后24 h在血液中检测不出药物。各时间点采集血液药物浓度结果见表1，药时曲线见图1。

表1 眼镜蛇肌肉注射盐酸左氧氟沙星溶液后血药浓度 (μg/mL，n=6)

注： ND 为not detectable，即检测不到药物

图1 盐酸左氧氟沙星药时曲线图

2.2 主要药代动力学参数计算结果 眼镜蛇肌肉注射盐酸左氧氟沙星溶液后，药动学主要参数见表2。

表2 盐酸左氧氟沙星主要药代动力学参数 (n=6)

3 讨论

3.1 抗生素测定方法种类很多，微生物检定法作为国际通用、经典的抗生素测定方法，具有方便、经济、容易操作的优点，有研究报道，抗生素微生物检定法在药代动力学分析及抗生素残留检测中可以取得较好效果[2-3]。本研究选用该方法的最主要原因是眼镜蛇很难采血，一次采血量最多只有 0.2 mL。

3.2 本试验中盐酸左氧氟沙星在给药后吸收迅速而良好，Tmax为0.417±0.118 h，Cmax为0.902±0.049 μg/mL。有文献报道，狗口服4 mg/kg甲磺酸左氧氟沙星后，其Tmax为2.60 h，Cmax为1.73 mg/mL[4]；单峰驼肌肉注射4 mg/kg左氧氟沙星后，其Tmax为1.51±0.61 h，Cmax为1.90±0.73 μg/mL[5]；泌乳山羊肌肉注射4 mg/kg左氧氟沙星后，其Tmax为1.78±0.32 h，Cmax为3.16±0.46 μg/mL[6]。本研究中盐酸左氧氟沙星在眼镜蛇体内达峰时间快，血药浓度较低，消除缓慢，消除半衰期为13.812±1.864 h，MRT为18.652±2.770 h，而在其他动物的消除比较快，都在10 h以内[7-11]。由此可见，左氧氟沙星在不同动物体内的代谢过程存在种属差异。

3.3 氟喹诺酮类药物是一种剂量依赖性杀菌药，理想的杀菌浓度为0.1～10 μg/mL，一般认为Cmax/MIC≥10～12或AUC0～24 h/MIC≥100～125，其抗菌效果最好[12]，而且Cmax/MIC的值越高，细菌产生耐药性的几率越小[13]。V.K. Dumka建议左氧氟沙星治疗牛的呼吸道、胃肠道、尿道和其他感染的用法为每12h给药1次，剂量为3 mg/kg体重[8]。根据计算Cmax/MIC和AUC/MIC，预测有效的抑菌剂量，A.Goudah建议当MIC≤0.12 μg/mL，左氧氟沙星在治疗单驼峰的细菌感染的临床推荐剂量为 5 mg/kg 体重[5]。本试验中眼镜蛇肌肉注射盐酸左氧氟沙星溶液的剂量是根据成人一次口服200 mg，按50 kg体重计算为4 mg/kg，如果按盐酸左氧氟沙星对本课题组分离蛇源彭氏变形杆菌的MIC为0.16 μg/mL来计算，则血药峰浓度需达到1.6～1.92 μg/mL，给药剂量应为10 mg/kg体重左右。因此，在本试验中，将5%盐酸左氧氟沙星溶于蛇临床的推荐剂量为10 mg/kg体重，肌肉注射，间隔 48 h 给药1次。

[1] 闫振贵,王春璈.蛇病防治研究进展[J]. 动物科学与动物医学，2000,17(2):49-51.

[2] 杨建鸣,张福华. 一种适用于微生物法测定抗生素血药浓度的新标准曲线[J]. 中国药学杂志, 1992, 9: 013.

[3] 李延华,王伟军,张兰威,等.微生物法检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的对比研究[J].中国抗生素杂志,2009,34(1):63-S1.

[4] 任乔林,张宇. 甲碘酸左氧氟沙星的药代动力学研究[J]. 中国抗生素杂志, 1999, 24(3): 205-207.

[5] Goudah A. Pharmacokinetics of levofloxacin in male camels (Camelus dromedarius)[J]. Journal of veterinary pharmacology and therapeutics, 2009, 32(3): 296-299.

[6] Goudah A,Abo‐El‐Sooud K. Pharmacokinetics, urinary excretion and milk penetration of levofloxacin in lactating goats[J]. Journal of veterinary pharmacology and therapeutics, 2009, 32(1): 101-104.

[7] Giraud E,Baucheron S,Cloeckaert A. Resistance to fluoroquinolones in Salmonella: emerging mechanisms and resistance prevention strategies[J]. Microbes and Infection, 2006, 8(7): 1937-1944.

[8] Dumka V,Srivastava A. Disposition kinetics, urinary excretion and dosage regimen of levofloxacin formulation following single intravenous administration in crossbred calves[J]. Veterinary research communications, 2007, 31(7): 873-879.

[9] Destache C J,Pakiz C B,Larsen C,etal.Cerebrospinal fluid penetration and pharmacokinetics of levofloxacin in an experimental rabbit meningitis model[J]. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 2001, 47(5): 611-615.

[10] Albarellos G A,Ambros L,Landoni M. Pharmacokinetics of levofloxacin after single intravenous and repeat oral administration to cats[J]. Journal of veterinary pharmacology and therapeutics, 2005, 28(4): 363-369.

[11] Aboubakr M,Soliman A. Comparative Pharmacokinetics of Levofloxacin in Healthy and Renal Damaged Muscovy Ducks following Intravenous and Oral Administration[J]. Veterinary medicine international, 2014(1):390875.

[12] Hopkins K L,Davies R H,Threlfall E J. Mechanisms of quinolone resistance in Escherichia coli and Salmonella: recent developments[J]. International journal of antimicrobial agents, 2005, 25(5): 358-373.

[13] Gazew H,Abdouslam N,Hawkey P. Incidence of class 1 integrons in squatemary ammonium compound-polluted enviroment[J]. Antimicrob Agents Chemother, 2005, 49(5): 1802-1807.

Stuy on Plasma Concentration ofLevofloxacin Hydrochloride in Cobrawith Intramuscular Injection

WANG Qiu-hua1, LI Rui-jun1, SU Jie-yu1, LIAO Li-li1, ZHANG Xin-wen2, ZENG Yun1

(College of Animal Science and Technology , Guangxi University , Nanning 530005 , China)

In the study,microbiological assay was conducted to detect plasma concentration of levofloxacin hydrochloride in cobra with intramuscular injection. The results showed that after administration,levofloxacin was detected and the average plasma concentration was 0.78 μg/mL at 0.25 hour, 0.88 μg/mL at 0.5 hour,and 0.81 μg/mL at 1 hour. Plasma concentration was decreased at 2 hour and could not be detected at 24 hour;TheTmaxwas 0.417±0.118, Cmaxwas 0.902±0.049 μg/mL,and t1/2λwas 13.812±1.864 h。 The experimental results indicated that drug absorption of levofloxacin hydrochloride was quikly and elimination was slowly in cobra.Data suggest that clinical application of levofloxacin hydrochloride in snakes is at a dosage of 10 mg/kg every 48 hours by intramuscular injection.

levofloxacin hydrochloride; cobra ; plasma concentration

ZENG Yun

2015-10-21

南宁科技局项目(20142085)

王秋华(1981-)，女，实验师，硕士,主要从事兽医药理与毒理学研究工作，E-mail:345526457@qq.com

曾芸，E-mail:yzeng323@163.com

.S859.79

A

0529-6005(2016)11-0110-03