双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分的含量*

王乐婷 郭秀琴 李 珂

(泰山医学院药学院，山东 泰安 271016)



双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分的含量*

王乐婷 郭秀琴 李 珂

(泰山医学院药学院，山东 泰安 271016)

目的 建立复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑和甲氧苄啶含量测定的双波长分光光度法。方法 采用双波长分光光度法测定。磺胺甲噁唑的测定波长为257 nm，参比波长为305 nm，以0.4%氢氧化钠溶液作为SMZ的空白溶剂；甲氧苄啶的测定波长为239 nm，参比波长为293 nm，以盐酸—氯化钾溶液作为TMP的空白溶剂。结果 磺胺甲噁唑浓度在2～10 μg·ml-1之间，甲氧苄啶浓度在0.2～1.0 μg·ml-1之间，符合比尔定律，浓度与吸收度差值呈良好的线性关系。两被测成分的平均回收率和RSD分别为磺胺甲噁唑97.84%和0.25%，甲氧苄啶为：97.91%和0.2%。 结论 该方法简便、准确，可作为该片剂质量控制的方法之一。

双波长分光光度法；磺胺甲噁唑；复方磺胺甲噁唑片；甲氧苄啶

复方磺胺甲噁唑为磺胺类抗菌药，是磺胺甲噁唑(SMZ)与甲氧苄啶(TMP)的复方制剂，本品对非产酶金黄色葡萄球菌、克雷伯菌属等肠杆菌科细菌、流感嗜血杆菌等均具有良好的抗菌作用。该品作用机制为：SMZ干扰合成叶酸第一步，TMP作用于叶酸合成代谢的第二步，选择性抑制还原酶的作用，使细菌的叶酸代谢受到双重阻断。该品的协同抗菌作用较单药增强，对其呈现耐药菌株减少。了解药品中磺胺甲噁唑和甲氧苄啶含量，能使我们安全合理地用药以及为生产过程的质量控制提供依据。依据药品中两组分的测定波长不同，本研究采用双波长分光光度法[1-2]测定复方磺胺甲噁唑片中两组分的含量，具有操作简便、仪器设备简便、测定结果准确等优点。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

岛津UV-2550型紫外可见分光光度仪(日本岛津公司)；电子分析天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)；KQ-500E型医用超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

1.2 药品与试剂

复方磺胺甲噁唑片(山东省新华制药厂，批号1303042，1305118，1401065)；磺胺甲噁唑对照品；甲氧苄啶对照品；无水乙醇(天津市凯通化学试剂有限公司)；0.4%氢氧化钠溶液(天津市大陆化学试剂厂)；0.1 mol/L盐酸溶液(淄博化学试剂厂)；氯化钾；淀粉；硬脂酸镁。

2 试验方法与结果

2.1 测定波长的确定

2.1.1 磺胺甲噁唑 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于磺胺甲噁唑50 mg与甲氧苄啶10 mg)，置于100 ml容量瓶中，加乙醇适量，振摇15 min使磺胺甲噁唑与甲氧苄啶溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取在105℃干燥至恒重的磺胺甲噁唑对照品50 mg与甲氧苄啶对照品10 mg，分别置于100 ml容量瓶中，各加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液(1)与(2)。精密量取供试品溶液与对照品溶液(1)(2)各两组各2 ml,分别置于100 ml容量瓶中，分别加0.4%氢氧化钠溶液和乙醇稀释至刻度,摇匀。在200～400 nm波长范围内扫描，得紫外光谱图1和图2。

结果显示：以氢氧化钠溶液为溶剂时，SMZ在257 nm处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在305 nm[3]波长附近有一个等吸收点，故选定257 nm为SMZ的测定波长，305 nm为参比波长；以乙醇为溶剂时，SMZ在259 nm处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在295nm波长附近有一个等吸收点，故选259 nm为SMZ的测定波长，295 nm为参比波长。

2.1.2 甲氧苄啶

精密量取上述供试品溶液与对照品溶液(1)各两组各3 ml，对照品溶液(2)两组各4 ml，分别置于100 ml容量瓶中，一组加盐酸—氯化钾溶液(取0.1 mol/L盐酸溶液75 ml与氯化钾6.9 g，加水至1000 ml，摇匀)稀释至刻度，另一组加乙醇稀释至刻度，摇匀。在200～400 nm波长范围内扫描，得紫外光谱图3和图4。

图1 SMZ在氢氧化钠溶液中的紫外吸收光谱图

图2 SMZ在乙醇中的紫外吸收光谱图

图3 TMP在盐酸—氯化钾溶液中的紫外吸收光谱图

图4 TMP在乙醇溶液中紫外吸收光谱图

结果显示：以盐酸-氯化钾溶液为溶剂时，TMP在239 nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在293 nm[4]波长附近有一等吸收点，且辅料无干扰，故选定239 nm为TMP的测定波长，293 nm为参比波长；以乙醇为溶剂时，TMP在240 nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在294 nm波长附近有一等吸收点,故选240 nm为TMP的测定波长，294 nm为参比波长。

2.2 线性关系考察

2.2.1 磺胺甲噁唑 精密称取SMZ对照品20 mg，加乙醇溶解并稀释至100 ml，作为对照品溶液，分别吸取1，2，3，4，5 ml分别加0.4%氢氧化钠溶液稀释至100 ml，摇匀，以0.4%氢氧化钠溶液为空白，于波长257，305 nm处测定吸光度。令△A1=△A257-△A305(△A1=△A259-△A295)，以浓度(C)为横坐标，△A为纵坐标，计算回归方程为A=0.049C+0.0805(μg/ml)，结果显示SMZ在2～10 μg/ml浓度范围内吸光度有良好的线性关系，相关系数[6]r=0.9992。

同法，再取一组对照品溶液1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml分别加乙醇稀释至100 ml，摇匀，以乙醇为空白，于波长259 nm、295 nm处测定吸光度。计算回归方程为A=0.036C+0.0615(μg/ml)，结果显示SMZ在2～10 μg/ml浓度范围内吸光度有良好的线性关系，相关系数r=0.9951。

2.2.2 甲氧苄啶 精密称取TMP对照品2 mg，加乙醇溶解并稀释至100 ml，作为对照品溶液，分别吸取1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml加盐酸—氯化钾溶液稀释至100 ml，摇匀，以盐酸—氯化钾溶液为空白，于波长237 nm、293 nm处测定吸光度。令△A2=△A237-△A293(△A2=△A240-△A294)，以浓度为横坐标，△A为纵坐标，计算回归方程为A=0.4875C+0.0251(μg/ml)，结果显示SMZ在0.2～1.0 μg/ml浓度范围内吸光度有良好的线性关系，r=0.9964。

同法，再取一组对照品溶液1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml分别加乙醇稀释至100 ml，摇匀，以乙醇为空白，于波长240 nm、294 nm处测定吸光度。计算回归方程为A=0.246C+0.0752(μg/ml)，结果显示SMZ在0.2～1.0 μg/ml浓度范围内吸光度有良好的线性关系，r=0.9974。

2.3 重复性实验

取对照品溶液(1)2 ml，用0.4%氢氧化钠溶液稀释100 ml，摇匀，以0.4%氢氧化钠溶液为空白，于257 nm、305 nm处测定吸光度，重复测定6次[8]，取对照品溶液(2)4 ml，用盐酸—氯化钾溶液稀释至100 ml，摇匀，以盐酸—氯化钾溶液为空白，于237 nm、293 nm处测定吸光度，重复测定6次[9]，计算出样品中药品含量，结果表明此实验重复性良好。

2.4 稳定性试验

取对照品溶液(1)、(2),分别加0.4%氢氧化钠溶液、盐酸—氯化钾溶液稀释至测定浓度,室温放置0 h、2 h、4 h、8 h、12 h，测定吸光度[10]。经试验，SMZ、TMP两种成分的吸光度至少在12 h内几乎稳定不变。

2.5 回收率实验

精密称取105 ℃干燥至恒重的磺胺甲噁唑、甲氧苄啶对照品适量,按处方量加入附加剂,模拟制成供试品。精密量取模拟品适量,加入80%、100%、120%量的对照品，分别用0.4%氢氧化钠溶液、盐酸—氯化钾溶液配成不同浓度的标准样品,测定吸光度A，计算差值△A，分别代入回归方程，计算得[9]表1。

表1 回收率实验结果

2.6 样品含量测定

取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于磺胺甲噁唑50 mg与甲氧苄啶10 mg)，置于100 ml容量瓶中，加乙醇适量，振摇15 min使磺胺甲噁唑与甲氧苄啶溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。SMZ的测定：取供试液1.5 ml加0.4%氢氧化钠溶液稀释至100 ml，摇匀，在257 nm、305 nm处测定吸光度，代入回归方程，计算即得。TMP的测定：取供试液2 ml，加盐酸—氯化钾溶液稀释至100 ml，摇匀，在237 nm、293 nm处测定吸光度，代入回归方程，计算即得[11]，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨 论

3.1 最佳溶剂的选择

磺胺甲噁唑和甲氧苄啶难溶于水，能溶于乙醇、碱性水溶液或酸性水溶液，所以由紫外吸收图谱和工作曲线综合比较得出：SMZ在0.4%氢氧化钠溶液中波形变化更明显，△A值更大，SMZ在此溶液中更敏感；TMP在盐酸—氯化钾溶液中的波形变化更明显，△A值更大，TMP在此溶液中更敏感。因此，选0.4%氢氧化钠溶液作为SMZ的最佳溶剂，盐酸—氯化钾溶液作为TMP的最佳溶剂。

3.2 紫外吸收波长的选择

根据实验中扫描紫外吸收光谱图可知，在磺胺甲噁唑波长的选择中，以氢氧化钠溶液为溶剂时，SMZ在257 nm处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在305 nm[4]波长附近有一个等吸收点，且无辅料干扰，故选定257 nm为SMZ的测定波长，305 nm为参比波长；以乙醇为溶剂时，SMZ在259 nm处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在295 nm波长附近有一个等吸收点，故选259 nm为SMZ的测定波长，295 nm为参比波长；在甲氧苄啶的波长选择中，以盐酸—氯化钾溶液为溶剂时，TMP在239 nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在293 nm[5]波长附近有一等吸收点，且辅料无干扰，故选定239 nm为TMP的测定波长，293 nm为参比波长；以乙醇为溶剂时，TMP在240 nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在294nm波长附近有一等吸收点,故选240 nm为TMP的测定波长，294 nm为参比波长。

[1] 中国药典(2000版)二部[M].北京:化学工业出版社,2000:518.

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Determination of the two groups in Compound Sulfamethoxazole Tablets content by dual wavelength spectrophotometric method

WANG Le-ting GUO Xiu-qin LI Ke

(Taishan Medical College, Taian 271016, China)

Objective: A dual wavelength determination of sulfamethoxazole and trimethoprim in compound sulfamethoxazole tablets by spectrophotometry. Methods: Determined by dual wavelength spectrophotometry. Wavelength determination of sulfamethoxazole was 257nm,the reference wavelength was 305nm. Taking 0.4% sodium hydroxide solution as SMZ blank solvent. Wavelength determination of trimethoprim was 239nm,the reference wavelength was 293 nm. Hydrochloric acid potassium chloride solution as the TMP blank solvent. Results: The results showed that both the standard curve of sulfamethoxazole concentration ranging from 2 to 10 μg·ml-1and trimethoprim concentration ranging from 0.2 to 1.0 μg·ml-1was in correspondence with Beer's law.The absorptivity difference and the concentration showed a good linear relationship.The average recoveries and RSD were 97.84%、0.25%for sul-famethoxazole,and were 97.91%、0.2%for trimethoprim. Conclusion: The method is simple and accurate,which can be used as one of methods for quanlity control of the tables.

dual wavelength spectrophotometry；sulfamethoxazole tables；sulfamethoxazole compound；trimethoprim

王乐婷(1995—)，女，山东青岛人，泰山医学院药学院2013级本科学生。

李珂(1978—)，女，副教授，主要从事药物分析的教学及科研工作。

R917

A

1004-7115(2016)12-1336-04

10.3969/j.issn.1004-7115.2016.12.007

2016-09-17)