逍遥散含药血清对未孕大鼠离体子宫平滑肌的作用研究

海青山++杨榆青++郑梅

摘要：目的观察逍遥含药血清对正常大鼠离体子宫平滑肌运动的影响，并探讨其作用机制。方法运用Powerlab生物信号系统记录大鼠离体子宫肌标本的活动，观察不同浓度组逍遥散含药血清对子宫平滑肌收缩时间、最大张力、子宫活动力的影响。结果：逍遥散含药血清对正常大鼠离体子宫肌有明显的兴奋作用，可增强其收缩时间、最大张力和子宫活动力（与空白血清组比较，P<0.01），且兴奋作用强度与含药血清的浓度有相关性（高浓度和低浓度血清组比较P<0.05）。逍遥散含药血清的这一作用可被异搏定和阿托品阻断（与血清组比较P<0.01）。结论逍遥散含药血清在体外可增强正常家兔子宫平滑肌的收缩，该作用可能是通过L型钙通道和M受体发挥作用。

关键词：逍遥散；含药血清；子宫肌标本

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）11-0077-03

逍遥散源于宋代《太平惠民和剂局方》，其方药组成为：柴胡、芍药、白术、茯苓、当归、生姜、薄荷、甘草，具有疏肝解郁、养血健脾的作用。临床上逍遥散广泛用于治疗肝郁血虚脾弱所致的各科疾病，尤其是各种妇科疾病[1-3]。现代药理研究发现逍遥散具有抗抑郁症及肠易激综合症、抗癌、防治肝纤维化、调节神经内分泌等多方面作用[4-6]。本实验用血清药理学的方法研究逍遥散含药血清对离体子宫肌的作用，并对其作用机制进行探讨。

1制备逍遥散含药血清

1.1材料

1.1.1药品逍遥散原方不变，药物剂量参考《方剂学》教材第六版：柴胡、当归、芍药、白术、茯苓各9 g，甘草4.5 g，烧生姜一块，薄荷少许。所用生药经鉴定，均为正品。

1.1.2动物SPF级未孕SD大鼠（昆明医学院实验动物中心，动物合格证号：SCXK（滇）2011-2014），体重180±30 g，本院动物房饲养，普通饲料，自主饮食。

1.1.3仪器离心机、恒温水浴锅（DZKW-C；北京光明医疗仪器厂）。

1.2方法

1.2.1逍遥散水煎剂制备和浓缩上述八味药用六倍于生药量的水浸泡30 min，分别按20、15、15 min煎煮3次，用六层纱布过滤，并浓缩成每1 mL含5.2 g 、2.6 g生药量的药液，置于4℃冰箱中贮存备用。

1.2.2分组给药SPF级未孕SD大鼠60只，随机分为空白血清组，0.9%生理盐水；含药血清高浓度组，5.2 g/mL逍遥散水煎剂；含药血清低浓度组，2.6 g/mL逍遥散水煎剂。经灌胃途径给药，1.5 mL/100 g/次，每天2次，连续3 d。

1.3.3逍遥散含药血清制备于第3日末次给药后腹腔注射25%乌拉坦（4 mL/kg），并于给药后60 min腹子宫采血，静置30 min后，以3000转∕分速度离心10 min，取上清液，分装，-20℃保存待用，用前56℃30 min灭活。

2逍遥散含药血清对大鼠离体子宫肌的作用

2.1材料

2.1.1试剂垂体后叶素（上海第一生化药业有限公司，批号：060403）、己烯雌酚（合肥久联制药有限公司，批号：060301）、消炎痛（山西太原药业有限公司，批号：071202）、酚妥拉明（诺华制药，批号：060156）、阿托品（天津药业集团新郑股份有限公司，批号：060413）、苯海拉明（天津药业集团新郑股份有限公司，批号：0702051）、异搏定（江苏四环生物股份有限公司，批号：0707131）、洛氏液（NaCl 9g，KCl 0.42g，CaCl2 0.24g，NaHCO3 0.2g，Glucose.l 0g，蒸馏水1000mL）。

2.1.2仪器Powerlab/8s生物信号采集处理系统（澳大利亚埃德公司）、张力换能器（澳大利亚埃德公司，型号：ML784）、循环灌流恒温平滑肌槽、离心机、冰箱、电子天平、哺乳动物手术器械等。

2.1.3动物SPF级未孕SD大鼠8只（昆明医学院实验动物中心，动物合格证号：SCXK（滇）2011-2014），体重180±30g，本院动物房饲养，普通饲料，自主饮食。

2.2方法

2.2.1大鼠子宫平滑肌标本的制备将未孕雌性大鼠于实验前两天，每天皮下注射己烯雌酚0.1mg/kg，促使动物处于动情期或动情前期，以提高动物对药物的敏感性。第3天，末次促情1h后，用颈椎脱臼法迅速处死大鼠，剖腹取出子宫，立即将其浸入到盛有洛氏液的平皿中，漂洗，分离周围的脂肪组织，制成长约1.0cm的子宫平滑肌条，放入洛氏液中待用。

2.2.2离体实验将子宫肌标本悬挂于含（37.5士0.5℃，pH=7.4）洛氏营养液的恒温平滑肌槽中，一端固定于浴槽底部，另一端与张力换能器连接。向恒温平滑肌槽中通入含有95%O2和5%CO2的混合气体，给予标本1 g的基础张力，平衡30 min（每10min换液一次），先观察标本的收缩情况，并用微机程控的Powerlab/8 s生物信号系统记录收缩曲线，再依次加入所取的空白血清和含药血清，观察其对标本的影响，记录收缩曲线。每进行一次试验后，用洛氏液冲洗标本3次，使标本张力恢复至基线再进行下一次试验。实验中所用药物浓度均以最终浴槽浓度计算。

3结果

3.1不同浓度逍遥散含药血清对未孕大鼠子宫平滑肌收缩的影响在离体子宫肌自发收缩的基础上，分别加入空白血清组、高浓度逍遥散含药血清组（含生药5.2 g/mL）、低浓度逍遥散含药血清组（含生药2.6 g/mL）及垂体后叶素，观察大鼠离体子宫肌收缩时间（s/10 min）、张力（g）、活动力（g·s/10 min 活动力=张力×收缩时间）的变化（结果见表1）。

3.2阻断剂加逍遥散含药血清对大鼠离体子宫平滑肌活动的作用以高浓度逍遥散含药血清组作用为对照，分别加入阿托品、苯海拉明、酚妥拉明和异搏定，每组加入阻断剂后5min待收缩活动平稳后，再加入0.5ml的高浓度逍遥散含药血清。观察上述阻断剂对未孕大鼠离体子宫平滑肌收缩时间（s/10 min）、收缩张力（g）、活动力（g·s/10min 活动力=收缩幅度×收缩时间）的作用（结果见表2）。

结果表明：异搏定（L型Ca2+通道拮抗剂）、阿托品（M型受体阻断剂）均可部分阻断逍遥散含药血清的兴奋作用，减少子宫平滑肌的收缩时间、张力和子宫活动力，与含药血清组相比，差异有显著性意义（P<0.05或P<0.01）。苯海拉明（Hl型受体阻断剂）、酚妥拉明（α受体阻断剂）均未能阻断逍遥散含药血清的兴奋作用。

4讨论

逍遥散为疏肝解郁的代表方，肝藏血，主舒泄，喜条达，妇科疾病多从肝论治。逍遥散在临床广泛应用于月经不调、痛经、功血等妇科疾病的治疗。据此推断该方对子宫平滑肌的运动具有调节作用，通过中药复方含药血清对离体器官的作用，能更好地反映药物在体内环境中产生药理效应的真实过程[7]。

实验结果表明，逍遥散含药血清的确可以兴奋未孕大鼠子宫肌的运动，在子宫最大收缩张力和收缩时间方面都表现明显，在解除子宫收缩无力、子宫收缩迟缓等方面有作用。排出血清中原有的物质干扰，这种作用仍然存在，说明该作用是逍遥散本身或者代谢产物或者刺激机体产生的内源物质导致的[8]。而且，具有浓度依赖性，在给药浓度增高时，作用也加强。

在高浓度逍遥散含药血清导致离体子宫平滑肌收缩加强的基础上，分别以阿托品、苯海拉明、酚妥拉明和异搏定等阻断剂干扰。子宫肌属于内脏平滑肌，其收缩呈现一定的节律性，子宫收缩时需要细胞外Ca2+通过钙通道内流，与肌钙蛋白结合，促使粗细肌丝滑行，引起收缩。应用异搏定（L型Ca2+通道拮抗剂）可部分阻断逍遥散含药血清的兴奋作用，减少子宫平滑肌的张力证明逍遥散可以通过兴奋L型Ca2+通道起作用。子宫肌存在乙酰胆碱受体，乙酰胆碱通过子宫肌受体发挥兴奋作用。阿托品是M型受体阻断剂，对逍遥散含药血清兴奋离体子宫肌有抑制作用，说明逍遥散含药血清中含有类似乙酰胆碱的刺激物，逍遥散可能刺激机体产生乙酰胆碱等内源性物质增多而兴奋子宫。

苯海拉明和酚妥拉明未能阻断逍遥散含药血清的兴奋作用说明组胺和去甲肾上腺素可能没有参与逍遥散对子宫的调节作用。

5结论

上述研究结果表明，子宫是逍遥散作用的靶器官之一。逍遥散含药血清对未孕大鼠离体子宫平滑肌具有兴奋作用，可增加子宫平滑肌收缩的最大张力、收缩时间及子宫活动力。逍遥散含药血清对离体子宫平滑肌的兴奋作用存在量效关系。逍遥散含药血清对未孕大鼠离题子宫平滑肌的兴奋作用，可能是通过兴奋L型Ca2+通道增加Ca2+内流，进而增加细胞内Ca2+浓度发挥作用。也可能与刺激机体产生乙酰胆碱，兴奋M型受体发挥作用，与H受体和α受体无关。逍遥散促进子宫活动，可能是其治疗产后子宫收缩不良性等疾病的基础，具体作用途径和机制有待于进一步研究。参考文献：

[1]陈煜华.逍遥散加减治疗妇科疾病[J].湖北中医杂志，2005，27（11）：44.

[2]李永琼.逍遥散加味治疗子宫肌瘤78例[J].四川中医，2003，21（12）：57.

[3]曹秀云，程爱萍.逍遥散临床应用现状[J].中国民间疗法，2005，13（11）：60-61.

[4]吴丽丽，徐志伟，严灿，等.逍遥散和丹栀逍遥散抗抑郁作用的实验研究[J].中医研究，2003，16（3）：14-15.

[5]王迪，张虹，付士波，王珈.逍遥散对乳腺癌细胞抑制作用实验研究[J].中医药学刊，2006，4（24）：643-644.

[6]黄莉，金若敏.逍遥散药理研究概况[J].上海中医药杂志，2003，09（9）：61-64.

[7]杨彦芳，王玉芹 中药复方血清药理学方法规范化探讨[J].中国中西医结合杂志，2000，20（5）：380.

[8]刘建勋，韩笑，孙宇扬.含药血清药理作用与体内给药的量效、时效关系研究[J].中国中药杂志，2006，10（31）：859.