高效液相色谱法测定骨刺片中柚皮苷含量

汪秀月

（安徽省阜阳市食品药品检验检测中心，安徽 阜阳 236015）

高效液相色谱法测定骨刺片中柚皮苷含量

汪秀月

（安徽省阜阳市食品药品检验检测中心，安徽 阜阳 236015）

目的 建立测定骨刺片中柚皮苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为Waters Fire C18柱（250mm×4．6mm，5 m），流动相为乙腈－水（20∶80），检测波长为283 nm，流速为1．0 m L／min，柱温为30℃。结果 柚皮苷进样量在0．280 32～2．803 2 g范围内与峰面积线性关系良好（r＝1．000 0，n＝5），平均加样回收率为99．15%，RSD为1．65%（n＝9）。结论 该方法简便快速，重复性好，灵敏度高，结果准确，可用于骨刺片中柚皮苷含量的测定。

骨刺片；高效液相色谱法；柚皮苷

骨刺片是由昆布、骨碎补、党参、桂枝、威灵仙、牡蛎（煅）、杜仲叶、鸡血藤、附片、川乌(制)、草乌(制)、延胡索（制）、白芍等15味中药组方的中药成方制剂，具有散风邪、祛寒湿、舒筋活血、通络止痛的功效，临床用于治疗颈椎、胸椎、腰椎、跟骨等骨关节增生性疾病，对风湿、类风湿关节炎有一定疗效[1]。其收载于卫生部药品标准，原标准只对马钱子进行薄层鉴别，未对骨碎补进行质量控制[2]。为了有效控制骨刺片的质量，参考文献[3－8]并反复试验，本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法对方中骨碎补的主要成分柚皮苷进行了定量研究，该方法结果准确，可作为该制剂中骨碎补的质量控制方法。

1 仪器与试药

Waters e2695型高效液相色谱仪，Waters 2998型二极管阵列检测器，Empowers色谱工作站（Waters公司）；HS3120型超声波处理仪；Mettler AB265S（0．01 mg）电子天平；Sartorius BS124S（0．1 mg）电子天平。柚皮苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号为 110722－200613）；甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸水；骨刺片（南京同仁堂药业有限责任公司，批号为111007，120711，120607）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Waters Fire C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相：乙腈－水（20∶80）；检测波长：283 nm；流速：1．0mL／min；进样量：20μL；柱温：30℃。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于4 000，阴性无干扰。色谱图见图1。

2．2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的柚皮苷对照品17．52mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液5mL，置25m L容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品20片，精密称定，研细混匀，取约0．5 g，精密称定，置25mL容量瓶中，加甲醇约20 m L，超声处理30 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0．45μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。按处方及制法，制成缺骨碎补的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品溶液（质量浓度为0．140 16 g／L）2，5，10，15，20μL，进样测定，以柚皮苷进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝1 651 178．08X－73 162．74，r＝1．000 0（n＝5）。结果表明，柚皮苷进样量在0．280 32～2．803 2μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，按拟订色谱条件连续进样5次，记录峰面积。结果的 RSD为0．4%（n＝5），表明仪器的精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，按拟订色谱条件每间隔2 h进样1次，连续进样5次。结果峰面积的RSD为1．1%（n＝5），表明供试品溶液在10 h内稳定。

重复性试验：精密称取同一批样品，按2．2项下方法制备供试品溶液6份，分别进样测定含量。结果每片样品中含柚皮苷0．354mg，RSD为1．1%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取同一批骨刺片（批号为111007）研细混匀后，取约0．3 g，精密称定，取6份，分别精密加入上述对照品贮备液2．0 m L，按2．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 柚皮苷加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取上述3批骨刺片样品，按拟订方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算柚皮苷的含量。结果批号为111007，120711，120607的样品中，柚皮苷的含量分别为每片0．354，0．375，0．328mg。

3 讨论

本研究中参考2010年版《中国药典（一部）》[1]“三七伤药片”中骨碎补所含柚皮苷的测定方法，在设计样品提取过程时，同时比较了加热回流和超声提取对测定结果的影响，未发现较大差异，且回流提取时间短，效果理想。同时比较了使用甲醇、80%甲醇和50%甲醇处理样品的情况，结果使用甲醇提取效果较好，故在本研究中使用甲醇作为提取溶剂，改良使用25mL容量瓶，直接定容减少了锥形瓶称量定容造成的误差。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：451．

[2]WS3－B－3290－98．卫生部药品标准·中药成方制剂(第十七册)[S]．

[3]曹 玲，冯有龙，王亚超，等．骨刺片质量标准研究 [J]．中国药品标准，2011，12（3）：191－195．

[4]范 兴，杨成梓，曾伟生，等．HPLC法测定烫骨碎补中柚皮苷的含量[J]．海峡药学，2013，25（11）：74－76．

[5]李 丽．RP－HPLC法测定橘红痰咳液中柚皮苷的含量[J]．黑龙江科技信息，2014（6）：81．

[6]姚泽炳，周 瑾．高效液相法测定橘红片中柚皮苷和橙皮苷的含量[J]．中国药事，2012，26（11）：1 243－1 245．

[7]李 劲．高效液相色谱法测定骨刺宁胶囊中柚皮苷的含量[J]．中国医药指南，2012，35（10）：448－449．

[8]文才华，涂文升．高效液相色谱法测定平消片中柚皮苷的含量[J]．临床合理用药，2012，4(2A）：60－61．

Content Determ ination of Naringin in Guci Tab lets by HPLC

Wang Xiuyue
（Fuyang Institute for Food and Drug Control，Fuyang，Anhui，China 236015）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of naringin in Guci Tablets．M ethods The chromatographic column was Waters Fire C18column（250 mm×4．6 mm，5μm），the mobile phase was acetonitrile－water（20∶80），the detection wavelength was 283 nm，the flow rate was 1．0 mL／min，the column temperature was 30℃．Results The linear relation was good when the injection volume of naringin was in the range of 0．280 32－2．803 2μg（r＝1．000 0，n＝5）．The average recovery rate was 99．15%，and RSD was 1．65%（n＝9）．Conclusion This method is simple，rapid，has good repeatability，high sensitivity and is reliable，which can be used for the content determination of naringin in Guci Tablets．

Guci Tablets；HPLC；naringin

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)04－0077－02

2015－02－27；

2015－07－01)