不同炮制方法对延胡索中延胡索乙素含量的影响

肖辉

（湖南中医药大学第一附属医院药学部，湖南 长沙 410007）

不同炮制方法对延胡索中延胡索乙素含量的影响

肖辉

（湖南中医药大学第一附属医院药学部，湖南 长沙 410007）

目的 比较醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法对延胡索有效成分含量的影响，为优化延胡索炮制方法提供参考。方法 采用醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法对延胡索生品进行炮制，通过高效液相色谱法测定延胡索乙素含量。结果 延胡索乙素含量在0．10～1．35 g范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为84．05%，RSD为1．94%（n＝6）；醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品含量有所上升，差异有统计学意义（t＝3．265～6．342，P＜0．05）。结论 高效液相色谱法检测延胡索乙素具有线性关系良好、精密度稳定、可重复检测的优点，醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法能增加延胡索有效成分含量。

延胡索；延胡索乙素；炮制；高效液相色谱法

延胡索（Corydalis Rhizoma）为多年生罂粟科草本植物，具有活血、理气、止痛的功效，广泛应用于跌打损伤、胸闷痹痛、血瘀痛经等症。其主要有效成分为生物碱，包括延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素，大多以结合态的生物碱盐形式存在[1]。延胡索多以炮制后入药，醋煮、醋烘、醋炙、酒炙均为2010年版《中国药典(一部)》收载的炮制延胡索饮片经典方法[2]。国内学者有关这几种炮制方法的文献报道不多[3－4]。故笔者采用高效液相色谱（HPLC）法，以延胡索主要有效成分延胡索乙素含量为参考指标，探讨醋煮、醋烘、醋炙、酒炙炮制方法对延胡索有效成分含量的影响，旨在为优化延胡索炮制工艺提供参考，现报道如下。

1 仪器与试药

烘箱购自湖北黄石医疗器械厂（HDG78－1型）；色谱系统为美国康诺（CoMetro）高效液相色谱仪（高压梯度系统、能用于编程紫外检测器、数字全系统控制工作站等）；超声波清洗器购自昆山市超声仪器有限公司；电子天平选用美国梅特勒天平公司（ME203E型）。延胡索产地浙江东阳，购自浙江凯润制药有限公司（批号为140305）；参照品由中国食品药品生物制品检定所提供（批号为141210）；色谱醇为甲醇；陈醋购于北京陈醋厂，黄酒购自浙江绍兴黄酒集团；试验用水为自制双蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：美国安杰伦公司 Agilent TC－C18柱（250 mm×4．5 mm，55μm）；流动相：乙腈－0．1%磷酸溶液（28∶72）；流速：1m L／min；色谱柱温：35℃；波长：280 nm。根据延胡索乙素峰计算出理论板数大于3 000，且延胡索乙素峰色谱与相邻组分色谱峰分离度大于1．5。提示本次系统试验设备条件无干扰。色谱图见图1。

图1 延胡索乙素对照品高效液相色谱图

2．2 溶液制备

样品制备：参照曹柳等[5]的文献资料，采用醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等方法对延胡索进行炮制。醋煮延胡索，取适量延胡索，加20%陈醋，加适量水没过药面，武火煮沸，文火煎煮，至醋液被完全吸收，干燥留置备用；醋烘延胡索，取适量延胡索，加20%陈醋完全浸润药物4 h，取出置入烘箱内，于120℃温度下烘烤 45 min；醋炙延胡索，取适量延胡索，加20%陈醋完全浸润4 h，文火炒干备用；酒炙延胡索，取适量延胡索，加黄酒完全浸润4 h，文火炒干备用。

对照品溶液制备：称取延胡乙索对照品2．25mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至10 mL，取2mL，置另一10m L容量瓶中，加甲醇定容至10m L，配制延胡乙索质量浓度为0．045 g／L的混合对照品溶液。

供试品溶液制备：称取醋煮、醋烘、醋炙、酒炙炮制延胡索及生品延胡索各0．5 g，分别置三角瓶中，加水25m L，超声提取25min，取上清液。称重补足减失质量，重复上述步骤1次，共提取2次，合并2次滤液，过0．45μm滤膜，取滤液即得供试品溶液。用2%氢氧化钠溶液制备硅胶G薄层板，将供试品溶液点于硅胶薄层板上，展开剂使用甲苯－丙酮，展距7 cm。取出薄层板，晾干后置于密闭碘缸约5min，取出挥尽薄层板上吸附碘，置365 nm紫外光灯下检视，得不同炮制方法延胡索色谱图，见图2。

图2 不同炮制方法延胡索薄层色谱图

2．3 方法学考察

线性关系考察：分别吸取延胡索乙素对照品溶液0．1，0．2，0．3，0．4，0．6，0．8，1．0 m L，置10 m L容量瓶中，加甲醇溶液定容至 10 m L，得 2．0，4．0，6．0，8．0，12．0，16．0，20．0mg／L系列对照品溶液。吸取上述溶液分别进样10μL，以峰面积（Y）为纵坐标、进样量为横坐标（X）进行线性回归，得回归方程 Y＝2．385×10－8X－0．002 4，r＝0．999 8(n＝7)。结果表明，延胡索乙素含量在0．10～1．35μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液，在相同色谱条件下连续进样6次，分别测定延胡索乙素峰面积，代入回归方程。结果延胡索乙素峰面积的 RSD为0．54%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品，精密称定，按2．2项下供试品溶液制备方法，制备6份供试品溶液，测定延胡索乙素峰面积，计算延胡索乙素含量。结果延胡索乙素含量的 RSD为0．23%（n＝6），表明该方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，8，12，24 h时进样。结果延胡索乙素峰面积的 RSD为1．28%（n＝7），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：称取6份已知含量样品各0．20 g，分别加入适宜延胡索乙素对照品溶液，按2．2项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，各进样20μL，测定，计算回收率。结果见表1。

表1 延胡索乙素加样回收试验结果(n＝6)

2．4 样品含量测定

分别取醋煮、醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品与延胡索生品供试品溶液各20μL，在相同的色谱条件下测定延胡索乙素峰面积，并计算延胡索乙素含量。结果表明，与延胡索生品比较，除醋煮炮制法含量有所降低外，醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品延胡索乙素含量有所上升，见表2。

表2 不同炮制方法延胡索乙素含量测定结果（s）

表2 不同炮制方法延胡索乙素含量测定结果（s）

注：与延胡索生品比较，t＝3．265～6．342，aP＜0．05。

样品延胡索生品醋煮延胡索醋烘延胡索醋炙延胡索酒炙延胡索含量（mg／g）0．040 1±0．000 3 0．039 8±0．000 4 0．048 6±0．000 5a0．049 8±0．000 7a0．048 5±0．000 6a与延胡索增减率（%）－0．748 1±0．003 2 21．197 0±3．123 0 24．189 5±3．456 2 20．947 6±2．456 2

3 讨论

炮制延胡索为临床常用中药，有活血、行气、止痛的功效[3]。延胡索主要化学成分为异喹啉型生物碱，以结合态与游离态两种形式存在，游离态生物碱难溶于水，醋酒炮制能使生物碱与醋、酒结合，提高煎出率，从而增加疗效。同时在延胡索总生物碱中，延胡索乙素镇痛效力最强，故关于延胡索炮制的研究多集中于延胡索乙素的研究。

延胡索乙素测定方法有紫外法和薄层法等。徐皓等[6]研究显示，HPLC法专属性最好，灵敏度最高，且简便易行。马月光等[7]则通过对不同pH条件下延胡索乙素保留时间进行研究，结果pH为6．24时保留时间最长，pH在6．09时分离度最好。本研究中参照上述文献进行试验，结果表明，拟订的HPLC法线性关系试验、精密度试验、重复性试验均表现出良好的相关性、稳定性与可重复性，与李荣等[8]的报道基本一致。

在不同炮制方法对延胡索有效成分影响的研究中，徐捷[9]报道，醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法均可提高延胡索乙素的有效成分，但其研究中缺少对不同炮制品溶液剂量的介绍，且无比较研究，结论稍显牵强。本研究中严格设计了剂量，且在随后的比较研究中，发现与延胡索生品比较，除醋煮炮制法延胡索乙素含量有所降低外，醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品延胡索乙素含量有所上升。醋煮延胡索有效成分下降的原因可能与延胡索中生物碱游离态含量有关，醋煮时间过长，可能还会破坏生物碱结构，从而使延胡索角质化[10]。这与马月光等[7]的文献报道相左，提示醋煮能否增加延胡索有效成分有待进一步研究。

本研究结果表明，HPLC法在检测延胡索乙素峰面积与含量时，具有精密度高、可重复检测的优点，醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法能增加延胡索有效成分含量。

[1]郑 弘，许红玮．延胡索不同炮制方法的薄层色谱鉴别对比研究[J]．中医学报，2013，28（5）：695－696．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：130－131．

[3]刘传统，祁 红．HPLC法测定益气养阴合剂中厚朴酚和厚朴酚和延胡索乙素的含量[J]．云南中医中药杂志，2015，36（1）：59－61．

[4]杨 帆．改良高效液相色谱法测定元胡止痛滴丸和胶囊中延胡索乙素含量[J]．中国药业，2014，23（13）：24－25．

[5]曹 柳，窦志英，王 萍，等．不同炮制方法对延胡索中有效成分含量的影响[J]．中国中医药信息杂志，2009，16（6）：42－44．

[6]徐 皓，昝丽霞，赵 桦．微量元素对延胡索有效成分含量的影响[J]．中国实验方剂学杂志，2012，18（5）：90－92．

[7]马月光，岳显可，曹 岗，等．不同产地延胡索饮片炮制前后有效成分含量的测定[J]．中药材，2013，36（11）：1 754－1 758．

[8]李 荣，蔡青青，牛彦兵，等．生、熟延胡索饮片药理作用的对比研究[J]．中国实验方剂学杂志，2014，20（19）：133－137．

[9]徐 捷．不同炮制方法对延胡索有效成分影响研究[J]．河北医药，2013，35（3）：454－455．

[10]鲁春梅，张春森，姜立勇．延胡索化学成分及药理作用研究进展[J]．中国现代药物应用，2011，5（15）：126－127．

In fluence of Different Processing M ethods on Tetrahyd ropalm atine in Corydalis Rhizom a

Xiao Hui
（Department of Medicine，The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan，China 410007）

Ob jective To compare the influence of vinegar boiling，vinegar baking，vinegar stir－frying，wine stir－frying on the active ingredients of corydalis rhizoma．M ethods Corydalis rhizoma was processed by vinegar boiling，vinegar baking，vinegar stir－frying；wine stir－frying；HPLC method was used to determine the content of tetrahydropalmatine．Resu lts The content of tetrahydropalmatine showed good linear relationship wasa the peak area in the range of 0．10－1．35μg；the average recovery rate was 84．05%，RSD was 1．94%(n＝6)；the main content of tetrahydropalmatine improved after vinegar boiling，vinegar baking，vinegar stir－frying，and wine stir－frying，and there were statistically difference in the 4 methods（t＝3．265－6．342，P＜0．05）．Conclusion HPLC method for detection of tetrahydropalmatine has a good linear relationship，stable precision，repeatable testing；the processing methods of vinegar baking，vinegar stir－frying and wine stir－frying can increase the effective composition content in corydalis rhizoma．

corydalis rhizoma；tetrahydropalmatine；processing；HPLC

R283；R284．1；R282．71

A

1006－4931(2016)04－0029－03

肖辉（1973－），女，湖南涟源人，主管中药师，研究方向为中药学，（电子信箱）582638192＠qq．com。

2015－04－09；

2015－09－30)