宫颈癌组织中COX2、P21、MMP-9的蛋白表达及临床意义

(四川省广元市中心医院， 四川 广元 628000)

·临床医学·

宫颈癌组织中COX2、P21、MMP-9的蛋白表达及临床意义

侯宇

(四川省广元市中心医院， 四川 广元 628000)

目的探讨宫颈癌组织中环氧化酶-2(COX-2)、P21、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及意义。方法回顾性分析行外科手术治疗的48例确诊宫颈癌患者临床资料(观察组)，将同期因其他原因入院行子宫切除术的50例患者纳入对照组。免疫组化法分析两组受试者宫颈组织中COX2、P21、MMP-9的表达情况。结果观察组宫颈组织中MMP-9及COX-2阳性率均显著高于对照组(P<0.05)；其中临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者MMP-9、COX-2阳性率显著低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)。观察组腺癌患者及对照组患者宫颈组织中P21表达均为阴性，阳性率为0.0%；观察组鳞癌患者阴性率为30.6%，阳性率为69.4%，显著高于同组的腺癌患者及对照组患者(P<0.05)。结论宫颈癌患者宫颈病变组织中COX-2、MMP-9和P21均为高表达，且COX-2、MMP-9表达水平同临床分期关系密切，P21表达水平同病理类型关系密切。

宫颈癌；环氧化酶-2;P21；基质金属蛋白酶-9

宫颈癌(cervical cancer)是一种妇科常见恶性肿瘤，对女性健康安全威胁极大。随着临床研究的深入，越来越多学者发现病灶组织中环氧化酶-2(COX-2)、P21、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况同患者病情发展程度关系密切[1]。本研究以此为方向，通过比较48例确诊宫颈癌患者及50例非宫颈癌因素行子宫切除术患者宫颈组织内COX2、P21、MMP-9表达情况差异，分析上述指标在宫颈癌临床诊断及病情评估中的价值，为诊疗工作的顺利开展提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1临床资料回顾性分析2013年2月～2015年7月于我院行外科手术治疗的48例确诊宫颈癌患者及因其他原因入院行子宫切除术的50例宫颈组织正常患者临床资料，分别将其纳入观察组(n=48)和对照组(n=50)。排除标准：①相关治疗禁忌症的患者；②年龄不足35岁或超过80岁的患者；③孕期或哺乳期妇女；④合并严重器质性病变、自身免疫性疾病、严重脏器功能障碍、凝血功能障碍、精神疾病、意识障碍或其他原发性恶性肿瘤者；⑤中途更改术式、转院、死亡或随访期失联的患者；⑥临床资料不全者；⑦入组前接受化疗、放疗等其他治疗措施者。此次入组受试者均经病理检查确诊，对照组符合《妇科学(第14版)》[2]中相关疾病诊断标准，患者年龄为38～69岁，平均(54.8±7.2)岁。观察组受试者则符合《常见妇科恶性肿瘤诊治指南(第4版)》[3]中宫颈癌相关诊断标准，患者年龄为36～67岁，平均(54.5±7.4)岁；肿瘤最大直径(4.8±1.0)cm：国际妇产科联盟(FIGO)临床分期情况：Ⅰ期18例，Ⅱ期16例，Ⅲ期10例，Ⅳ期4例；分化程度：高分化22例，中分化16例，低分化10例；病理分型：腺癌12例，鳞癌36例。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法两组受试者均参考《妇科肿瘤手术学》[4]中相关要求及操作规范完成手术治疗，手术采集的宫颈组织样本则参考《病理学(第8版)》[5]中相关要求完成病理检查。经10%甲醛固定后石蜡包埋病理组织，做5μm连续切片；参考免疫组化(SP)试剂盒(由上海研卉生物科技有限公司提供)使用说明书行常规SP染色，鼠抗人MMP-9单克隆抗体及鼠抗人COX-2单克隆抗体均由上海酶联生物研究所提供，P21蛋白抗体由英国Abcam公司提供。

1.3 SP结果评估标准[1]MMP-9、COX-2均以光学显微镜下可见细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，每张切片在400倍光镜下观察10个视野，每视野计数100个肿瘤细胞，共计数1000个肿瘤细胞；阳性表达率(PI)=(阳性细胞数/1000)×100%；阴性(-)：PI≤10%；阳性(+)：PI>10%。P21以光学显微镜下可见细胞核或细胞质内出现棕黄色均匀颗粒为阳性细胞，每张切片在400倍光镜下观察10个视野，每视野计数100个肿瘤细胞，共计数1000个肿瘤细胞；阴性(-)：PI<6%；弱阳性(+)：PI为6%～25%；中阳性(++)：PI为26%～50%；强阳性(++)：PI>50%。

1.4统计学方法将文中相关数据输入至统计学软件SPSS19.0中进行分析，计数资料采用(%)表示，行χ2检验，以P<0.05提示有统计学意义。

2 结 果

2.1两组宫颈组织中MMP-9表达比较观察组患者宫颈组织中MMP-9阳性率显著高于对照组，差异有显著性(P<0.05)；观察组48例患者中，临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者MMP-9阳性率显著低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差异有显著性(P<0.05)；见表1。

表1两组宫颈组织中MMP-9表达比较(例,%)

组别n临床分期(-)(+)观察组48Ⅰ～Ⅱ(n=34)22(64.7)12(35.3)abⅢ～Ⅳ(n=14)5(35.7)9(64.3)a对照组50-47(94.0)3(6.0)

与对照组比较，a：P<0.05；与观察组Ⅲ～Ⅳ期比较，b：P<0.05

2.2两组宫颈组织中COX-2表达比较观察组患者宫颈组织中COX-2阳性率显著高于对照组，差异有显著性(P<0.05)；观察组48例患者中，临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者COX-2阳性率显著低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差异有显著性(P<0.05)；见表2。

表2两组宫颈组织中COX-2表达比较(例,%)

组别n临床分期(-)(+)观察组48Ⅰ～Ⅱ(n=34)21(61.8)a13(38.2)abⅢ～Ⅳ(n=14)3(21.4)a11(78.6)a对照组50-50(100.0)b0(0.0)

与对照组比较，a：P<0.05；与观察组III～IV期比较，b：P<0.05

2.3两组宫颈组织中P21表达比较观察组腺癌患者及对照组患者宫颈组织中P21表达均为阴性，阳性率为0.0%；观察组鳞癌患者阴性率为30.6%，阳性率为69.4%，显著高于同组的腺癌患者及对照组患者，差异有显著性(P<0.05)；见表3。

表3两组宫颈组织中P21表达比较(例,%)

组别n病理分型(-)(+)(++)观察组48腺癌(n=12)12(100.0)0(0.0)0(0.0)鳞癌(n=36)11(30.6)12(33.3)ac13(36.1)ac对照组50-50(100.0)0(0.0)0(0.0)

与对照组比较，a：P<0.05；与观察组腺癌比较，c：P<0.05

3 讨 论

宫颈癌(cervical cancer)是一种以30～35岁女性为高发群体的妇科常见恶性肿瘤，具有恶性程度高、5年死亡风险大等特点[6]，现已成为威胁女性健康安全的常见肿瘤受到社会及医学界的广泛关注。相关研究表明，宫颈癌近年来在我国有年轻化发展趋势[7]，但受宫颈细胞学筛查及人们健康意识的不断提高，其早期检出率得到明显提升，因及早诊断与治疗而获得理想预后的患者人数也不断增多。

P21基因是一种位于p53基因下游的细胞周期素依赖性激酶抑制因子[8]，能通过同P53相互作用或抑制CDK2/4复合物达到调控细胞周期的目的[9]。相关研究证实，P21同多种肿瘤的分化、增殖、浸润程度及转移情况等均有密切关系，非小细胞肺癌、胃癌、宫颈癌等癌灶组织内均可见P21表达异常情况[10]。李锐等[11]发现，P21的表达同原位癌、鳞癌发生及淋巴结转移情况相关，同组织学分级情况无关，宫颈鳞癌患者的癌灶组织P21表达阳性率可达到65.7%，同本研究的69.4%类似。提示宫颈癌鳞癌患者常可见癌灶内P21过度表达情况，临床可将该指标作为鉴别鳞癌及腺癌的辅助依据，为诊疗工作的顺利开展提供条件。

COX是催化花生四烯酸转化为前列腺素的关键酶,COX-2作为其两种同工酶之一，鲜少存在于正常生理状态的组织中。此前有研究指出，COX-2具有抑制细胞凋亡、刺激癌细胞增殖、分化及促进癌灶内心血管生成的作用[12]，能直接参与肿瘤的生成及发展过程，在宫颈癌、非小细胞肺癌、甲状腺乳头状癌等多种恶性肿瘤中均存在过度表达情况[13]，需引起临床重视。MMP-9是基质金属蛋白酶类的重要组成部分之一,同多种肿瘤的浸润、转移关系密切[14]。本研究将COX-2和MMP-9在宫颈癌癌灶组织内的表达情况作为重点研究对象展开分析，发现正常宫颈组织内并未检测出COX-2阳性细胞，MMP-9阳性率也仅为6.0%；而分期为I～II期的宫颈癌患者COX-2阳性率为38.2%，MMP-9阳性率为38.2%，均显著高于对照组患者，但明显低于临床分期为III～IV期的受试者，同多数学者报道结论基本一致[15]，证实COX-2及MMP-9均在宫颈癌病灶组织内呈高表达，且阳性率随病情发展程度的加深而逐渐提高，猜测造成此结果的原因同临床分期较高的患者淋巴结转移风险较高相关。提示临床可将COX-2及MMP-9作为评估预后及病情发展程度的有效指标用于诊疗工作中，为针对性治疗干预措施的顺利开展提供条件。

本研究发现，宫颈癌患者的癌变组织中均可见P21基因、COX-2、MMP-9过度表达情况，猜测其可能在宫颈癌细胞增殖、浸润及转移中起到协同作用，但由于目前临床缺乏理论支持，该猜测仍存在进一步研究空间，可扩大样本量并尽可能排除相关干扰因素后将其作为后续研究课题予以深入分析，以此获得更完善、严谨的报道结果。

综上所述，宫颈癌患者宫颈病变组织中COX-2、MMP-9和P21均为高表达，且COX-2、MMP-9表达水平同临床分期关系密切，P21表达水平同病理类型关系密切。临床可将上述指标作为诊断及评估宫颈癌病变程度的有效指标，为诊疗工作的顺利开展提供条件。

[1] 沙春艳.老年宫颈鳞癌组织中COX-2和MMP-9的表达变化及意义[J].中国老年学杂志,2016,36(3):638-639.

[2] Jonathan S.Berek.妇科学[M].14版.北京：人民卫生出版社，2008：188-193.

[3] 沈铿，崔恒，丰有吉.常见妇科恶性肿瘤诊治指南[M].4版.北京：人民卫生出版社,2014:155-156.

[4] 张志毅.妇科肿瘤手术学[M].上海：上海科学技术出版社，2009:218-224.

[5] 李玉林，文继舫，唐建武.病理学[M].8版.北京：人民卫生出版社,2013:238-290.

[6] 刘慧强.我国宫颈癌流行病学特征和高危因素分析[J].中国妇幼保健,2016,31(6):1258-1260.

[7] 乔友林,赵宇倩.宫颈癌的流行病学现状和预防[J].中华妇幼临床医学杂志：电子版,2015,11(2):1-6.

[8] 秦赟娜,何德明,庄德葆，等.子宫颈癌中Plk1和Cyclin B1、p21 WAF1的表达及其临床意义[J].临床与实验病理学杂志,2015,31(4):385-389.

[9] Li J,Wang Y,Dong R,et al.HOTAIR enhanced aggressive biological behaviors and induced radio-resistance via inhibiting p21 in cervical cancer[J].Tumour Biology the Journal of the International Society for Oncodevelopmental Biology & Medicine,2014,36(5):3611-3619.

[10] 李志杰,张卓然,胡春杰，等.转染p21基因对宫颈癌Hela细胞转移的影响[J].中国临床研究,2015，28(3)：283-289.

[11] 李锐,李冬梅,马洪喜，等.宫颈鳞癌组织中p21和VEGF蛋白表达的实验研究[J].中国妇幼保健,2014,29(14):2241-2242.

[12] Mandic＇ A,Ušaj-Kneževi＇ S,Kapicl TI,et al.Cyclooxygenase-2 expression in cervical cancer.[J].Vojnosanit Pregl.2014,71(11):997-1005.

[13] Hoellen F,Waldmann A,Banzjansen C,et al.Expression of cyclooxygenase-2 in cervical cancer is associated with lymphovascular invasion.[J].Oncol Lett,2016,12(4):2351-2356.

[14] 刘晓旺,陈霄霄,周志刚，等.二烯丙基二硫下调uP A和MMP 9抑制乳腺癌细胞侵袭迁移[J].中南医学科学杂志,2016,44(2):125-129.

[15] Pahne-Zeppenfeld J,Schröer N,Walch-Rückheim B,et al.Cervical cancer cell-derived interleukin-6 impairs CCR7-dependent migration of MMP-9-expressing dendritic cells[J].Int J Cancer,2014,134(9):2061-2073.

ImplicationandExpressionofCOX2,P21andMMP-9inCervicalCancerTissues

HOU Yu

(CentralHospitalofGuangyuanCity，Guangyuan，Sichuan628000，China)

ObjectiveTo investigate the expression of cyclooxygenase-2 (COX-22),P21 and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in cervical cancer tissues and analyse its significance.MethodsThe clinical data of 48 patients with confirmed cervical cancer who underwent surgery (Study group) were analyzed retrospectively. 50 patients who underwent hysterectomy because of other reasons were served as control group.The expression of COX2,P21 and MMP-9 in cervical tissues was tested by immuno histochemistry in the two groups.ResultsThe positive rates of MMP-9 and COX-2 in cervical tissues in the study group were significantly higher than those in control group (P<0.05),and those in patients at clinical stage Ⅰ～Ⅱ were significantly lower than those at stage Ⅲ～Ⅳ (P<0.05).P21 positively expressed in cervical tissues of patients with adenocarcinoma in study group and control group,and the positive rate was 0.0% while the negative rate and positive rate in patients with squamous cell carcinoma in study group (30.6% and 69.4%) were significantly higher than those in patients with adenocarcinoma in the same group and patients in the control group (P<0.05).ConclusionCOX-2,MMP-9 and P21 are highly expressed in cervical cancer tissues,and the expression levels of COX-2 and MMP-9 are closely related to clinical stage while the expression level of P21 is closely related to the pathological type.

cervical cancer;COX2;P21;MMP-9

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.06.016

2016-07-05；

2016-10-23

T737.33

A

秦旭平)