消痒洗剂对急、慢性湿疹动物模型的药效研究*

李江萍，蒋 玲，李 玲

(1贵阳中医学院 第二附属医院药学部，贵州 贵阳 550001；2贵州医科大学 机能实验室，贵州 贵阳 550004)



消痒洗剂对急、慢性湿疹动物模型的药效研究*

李江萍1，蒋 玲1，李 玲2▲

(1贵阳中医学院 第二附属医院药学部，贵州 贵阳 550001；2贵州医科大学 机能实验室，贵州 贵阳 550004)

目的：观察消痒洗剂对急、慢性湿疹小鼠模型的白介素-1β(IL-1β)，白介素-4(IL-4)和白介素-8(IL-8)的表达影响，以及其抗炎止痒的效果，阐明其治疗急、慢性湿疹的作用机制。 方法：分别采用2，4-二硝基氟苯(DNFB)、2，4-二硝基氯苯(DNCB)致敏建立小鼠急、慢性湿疹模型，分别给予消痒洗剂低、中、高剂量(体积浓度分别为10 %、20 %、40 %)及阳性对照药(复方苦参洗剂)(浓度为40 %)干预，比较各组炎症因子的变化及其抗炎效果；通过磷酸组胺致痒试验及二甲苯致炎试验观察消痒洗剂的止痒、抗炎效果。 结果：消痒洗剂各剂量组能显著减轻ACD小鼠模型的耳肿胀度(P<0.01)并能够减轻ACD小鼠模型血清IL-1β、IL-8(P<0.01)等炎症因子的水平；能显著减轻DTH小鼠模型的耳肿胀度(高、中剂量组P<0.01，低剂量组无差异)，而所有剂量组均能够减轻DTH小鼠模型血清IL-1β、IL-8(P<0.01)的水平。消痒洗剂高、中剂量组能提高磷酸组胺对豚鼠的致痒阈(P<0.05)；消痒洗剂各剂量组均能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀(P<0.01)。结论：消痒洗剂通过降低炎性细胞因子IL-1β、IL-8的水平来治疗急、慢性皮炎湿疹，且止痒及抗炎的效果明显。

消痒洗剂，急慢性皮炎湿疹，IL-1β，IL-8，IL-4，止痒，抗炎

湿疹是临床常见的皮肤病之一，是一种由多种内外因素引起过敏反应的慢性炎症性皮肤病，多由急性、亚急性湿疹反复发作迁延而来，属变态反应性疾病范畴，约占皮肤科门诊患者的20 %左右[1]。近年来其发病率呈上升趋势。西医临床多采用抗组胺药及糖皮质激素治疗，长期使用可暂时取得良好的疗效，但对药物易产生依赖性，停药易反复，延续数年[2]。中医认为，本病与脏腑功能失调、气血失和、风湿热毒搏结有关。病机为内有湿毒蕴结，外显血癖阻络，久病人络，久病伤阴。“止痒洗剂”为我院自主研发的医院制剂，由苦参、蛇床子等多味药组成，全方具有清热燥湿、消炎杀虫、祛风止痒之功效，注重标本兼治，临床主治急、慢性皮炎湿疹。祖国医学对皮炎湿疹的治疗有着丰富的经验，针对辨证分型治疗，症状的改善与综合疗效均有良好效果，且安全，毒副作用少，在临床上很值得研究和推广，具有良好的应用前景。

1 实验材料及设备

1.1 实验动物

昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g(由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(黔)2012-0001)；豚鼠(贵阳医学院实验动物中心，合格证号：SCXK(黔)2012-0001)。

1.2 实验药物

消痒洗剂由蛇床子、苦参等数味中药材混合水提，浓缩而制成(每1 mL消痒洗剂含生药量0.299 g)(贵阳中医学院第二附属医院药学部制剂室，生产批号：20150617)；复方苦参洗剂(浙江中法制药，生产批号：20150124)。

1.3 实验试剂

2，4-二硝基氟苯(DNFB)(德国Merck公司，分析纯)；2，4-二硝基氯苯(DNCB)(德国Merck公司，分析纯)；IL-1β，IL-4及IL-8 ELLSA试剂盒(上海沪鼎生物有限公司)；磷酸组胺(上海士锋生物，生产批号：A0165-10g)；二甲苯(天津志远化学试剂公司，生产批号：20131116)。

1.4 实验设备

AE200S电子分析天平(美国setra公司)；千分尺(新上量量具有限公司，精度10 μm)；打孔器(得力文具)。

2 实验方法

2.1 消痒洗剂对过敏接触性皮炎(ACD)的药效学研究

取60只昆明种小鼠(雌雄各半)随机分为6组：空白组、模型组、消痒洗剂高剂量(体积浓度40 %)、中剂量(浓度20 %)、低剂量(浓度10 %)组及阳性药对照组(复方苦参洗剂，浓度40 %)，每组10只，腹部脱毛(面积3×3 cm)以1 % DNFB溶液0.05 mL涂擦致敏，实验药物干预从致敏后开始以耳廓外涂给药，0.05 mL/次，bid，连续5 d，模型组给予等量蒸馏水处理，5天后再以1 % DNFB涂擦小鼠耳部激发，测定各鼠左右耳同部位的厚度差值，再用8 mm打孔器取同部位的左右两耳片称重计算左右耳片重量之差值，比较各实验组间的肿胀度差异。摘眼球取血处死实验动物，同时采用Elisa方法测定血清中IL-1β，IL-4及IL-8炎性细胞因子的量，比较组间差异。

2.2 消痒洗剂对迟发性变态反应(DTH)的药效学研究

取60只昆明种小鼠(雌雄各半)随机分为6组：空白组、模型组、消痒洗剂高中低3个剂量组(浓度同2.1所述)及阳性药(复方苦参洗剂)对照组，每组10只，以7 % DNCB溶液0.05 mL涂擦耳部致敏，隔两天激发一次，共激发4次，药物干预从致敏后开始涂搽耳部给药，0.05 mL/次，bid，连续10 d，模型组给予等量蒸馏水处理，待末次激发后观察各鼠耳厚及耳红肿情况，并进行评分(无水肿无红斑为0分；轻度水肿或轻微可见红斑为1分；中度水肿或中度红斑为2分；重度水肿或重度红斑为3分；水肿红斑同时存在为4分)；同时采用Elisa方法测定动物血清样本中IL-1β，IL-4及IL-8等炎性因子，比较组间差异。

2.3 止痒实验

采用48只豚鼠，雌雄各半，随机分为6组：空白组、模型组、消痒洗剂高中低3个剂量组(浓度同2.1所述)及阳性药(复方苦参洗剂)对照组，实验时先将豚鼠后右足背剃毛。试验当日，用粗砂纸擦伤右后足背剃毛处，使之发红，但以不出血为度，面积1 cm2，给予实验用药1次(0.05 mL)然后开始在创面滴0.01 %磷酸组胺液(0.05 mL)，以后每隔3 min依0.02 %、0.03 %、0.04 %递增浓度，直至出现豚鼠回头添有后足，以最后出现豚鼠回头舔右后足时所给予的磷酸组胺总量为致痒阈，比较各组致痒阈的差异。

2.4 抗炎实验

取60只昆明种小鼠(雌雄各半)随机分为6组：空白组、模型组、消痒洗剂高中低3个剂量(浓度同2.1所述)组及阳性药(复方苦参洗剂)对照组，每组10只，给鼠右耳涂搽1次实验用药(0.05 mL)，1 h后再给鼠耳涂二甲苯致炎(0.05 mL)，左耳作对照。15 min后用打孔器取双耳相同部位称重。以左右耳重量之差作为肿胀度，比较各组肿胀度的差异。

2.5 统计学处理

实验数据以表示，运用SPSS 11.5统计软件进行方差分析，采用LSD法行组间比较，以P<0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 消痒洗剂对小鼠ACD模型的干预结果

模型组与空白组相比耳重量差异、耳厚度差异均明显增加，有显著统计学意义(P<0.01)。消痒洗剂高、中、低剂量组和复方苦参洗剂组均能减轻小鼠耳重量差、耳厚度差值，与模型组相比，有显著统计学意义(高、中剂量组P<0.01，低剂量组P<0.05)(表1)。采用Elisa法检测血清IL-1β、IL-4、IL-8水平。模型组与空白组比较，IL-1β、IL-8有明显的升高(P<0.05)，消痒洗剂干预后，出现剂量依赖性的下降趋势，从数据结果能明显看出消痒洗剂能较强抑制IL-1β、IL-8水平；而IL-4水平变化不明显，表明消痒洗剂能够减轻小鼠ACD模型血清IL-1β、IL-8等炎症因子的水平(表2)。

组 别耳重量差/mg耳厚度差/mm空白组0.015±0.0480.004±0.002模型组9.88±0.3580.127±0.005苦参洗剂组5.57±0.371*0.035±0.007*消痒洗剂高剂量5.91±0.412*0.036±0.002*消痒洗剂中剂量6.45±0.375*0.047±0.009*消痒洗剂低剂量8.12±0.274*0.070±0.016*

备注：* 与模型组比较，P<0.01

表2 消痒洗剂对ACD模型小鼠血清炎症因子水平的影响

备注：* 与模型组比较，P<0.01

3.2 消痒洗剂对DTH动物模型的干预结果

结果表明消痒洗剂中、高剂量组和复方苦参洗剂组与模型组相比，均具有显著差异(P<0.05)。这表明消痒洗剂能够减轻小鼠慢性皮炎模型耳肿胀度及水肿红斑评分值，且具有剂量依赖性(表3)。模型组与空白组比较，IL-1β、IL-8有明显的升高(P<0.05)，消痒洗剂干预后，出现剂量依赖性的下降趋势，从数据结果能明显看出消痒洗剂能较强抑制IL-1β、IL-8水平；而IL-4水平变化不明显，表明消痒洗剂能够减轻小鼠DTH模型血清IL-1β、IL-8等炎症因子的水平(表4)。

表3 消痒洗剂对DTH模型小鼠耳肿胀和耳红斑水肿评分值的影响

备注：* 与模型组比较，P<0.01

表4 消痒洗剂对DTH模型小鼠血清炎症因子水平的影响

备注：* 与模型组比较，P<0.01

3.3 消痒洗剂止痒试验结果

空白对照组和溶媒对照组豚鼠舔体反应较为明显，在给予磷酸组胺过程中仅有1只动物未出现舔体反应；阳性对照组有3只动物未出现舔体反应；消痒洗剂三个剂量组均有接近半数动物未出现舔体反应。各组计算磷酸组胺总量，与空白对照组和溶媒对照组相比，消痒洗剂高、中剂量组对外源性磷酸组胺均有较为明显的抑制作用，且高、中剂量组优于阳性药物对照组(表5)。

表5 消痒洗剂抗磷酸组胺止痒试验豚鼠舔体反应情况

备注：* 与空白对照组比较，P<0.05

3.4 消痒洗剂抗炎试验结果

消痒洗剂高、中、低剂量组和复方苦参洗剂组均能减轻二甲苯所致的鼠耳炎性肿胀程度，其耳片重量差值与模型组相比，均有显著统计学意义(P<0.01)(表6)。

组 别耳片重量差/mg肿胀抑制率/%空白组0.03±0.012—模型组9.56±0.78—苦参洗剂组5.44±0.46*43.09消痒洗剂高剂量5.8±0.24*39.33消痒洗剂中剂量6.7±0.71*29.92消痒洗剂低剂量8.0±0.1316.32

备注：* 与模型组比较，P<0.01

4 讨论

湿疹、皮炎(包括接触性皮炎、过敏性皮炎、自敏性皮炎、传染性湿疹样皮炎等)是临床常见、多发的皮肤病，约占皮科门诊量的15 %～30 %，其中尤以急性湿疹、皮炎多见，是国内外皮肤性病临床及基础研究的重点课题之一[3-5]。根据现代研究认为其发病机理与I、IV型变态反应、细菌或真菌感染有关，临床主要表现为过敏性炎症和剧烈骚痒症状，治疗上只能以抗变态反应、抗炎及止痒来说明所研究药物是否具有治疗湿疹的作用。中医认为皮炎湿疹的病因是以湿邪为主，并可兼风挟热。“风湿热邪久滞，耗血伤阴，化燥生风，肌肤失养”是本病的病机特点。结合消痒洗剂其功能主治为清热燥湿、凉血解毒、祛风止痒，主要用于湿疹、银屑病、丘疹性荨麻疹、结节性痒疹、疥疮、皮肤瘙痒症等瘙痒性皮肤病。近年来报道的皮炎湿疹模型大致可分为变态反应性接触性皮炎及迟发型湿疹模型、光变态反应性皮炎模型与特应性皮炎模型三类[6]，故本实验主要采用了变态反应性接触性皮炎及迟发型变态反应性皮炎湿疹模型来考察消痒洗剂的治疗效果及其作用机制，并且针对疾病的常见症状瘙痒及炎性红肿具体观察了药物的对症疗效，从标本兼治两方面充分阐明消痒洗剂的药效。

消痒洗剂方中的君药取用苦参，有清热燥湿、杀虫、利尿的作用，苦参能抑制动物被动和主动皮肤过敏反应，并能减少致敏动物血清抗体的形成，对过敏性疾病如荨麻疹、急性湿疹和阴部湿疹及其它皮炎有一定疗效[7]。臣药黄柏具有调节免疫功能，抗菌、抗炎、解热等作用。臣药地肤子水提取物能抑制单核巨吞噬功能、从而抑制快发型变态反应(ADC)及迟发型超敏反应(DTH)，临床常用接触性皮炎等变态反应性皮肤病[8-10]。本实验结果显示消痒洗剂各剂量组能显著减轻ADC及DTH小鼠模型的炎性组织肿胀程度，说明其对ADC及DTH所致的皮炎湿疹是有治疗效果的。白细胞介素-1(IL-1)又称淋巴细胞激活因子，是急性期免疫反应的主要调节因子，它分为IL-1α和IL-1β两种，其中血液中的IL-1主要为单核细胞和巨噬细胞所产生的IL-1β，正常人血液中不含IL-1β或者含量很低，其含量升高表明机体内有组织损伤或者感染产生。IL-4与IL-3协同可维持和促进肥大细胞的增殖，在某些过敏反应性疾病发生中具有一定的意义。IL-8是趋化性细胞因子，可以促进炎症细胞趋化和诱导细胞增殖，参与细胞免疫及迟发型超敏型炎症的发生。实验结果显示消痒洗剂确实能降低ADC及DTH小鼠模型血清IL-1β和IL-8的含量，证明其作用机制是通过减轻机体急性期免疫反应及迟发型超敏反应的感染程度，进而减轻炎症造成的皮肤组织损伤，属于对因治疗。但是其对IL-4的影响不明显，考虑是因为IL-4对肥大细胞的刺激需要有IL-3的配合才能完成，故我们的研究还应进一步结合探讨消痒洗剂是否能调节IL-3的水平才能评价。另外，通过实验的验证，消痒洗剂能显著提高磷酸组胺致痒豚鼠的致痒阈值，并能减轻二甲苯所致的鼠耳炎性肿胀程度，说明其对皮炎湿疹两大主要临床表现瘙痒、炎性水肿具有良好的控制效果，属于对症治疗。

综上所述，本实验以中西医理论对皮炎湿疹发病原因为变态反应性炎性皮肤病为依据对消痒洗剂进行药理学方面的研究，阐明了其通过调节机体免疫反应相关的炎症因子水平，起到抗炎、止痒、减轻水肿等临床治疗效果，为临床应用消痒洗剂治疗急、慢性皮炎湿疹提供基础理论依据，促进了中医药治疗皮炎湿疹的发展，减轻了患者痛苦。但由于本研究实验条件和时间限制，仅从抗速发型过敏反应及迟发型变态反应、抗炎及止痒实验进行了研究，尚没有进行抗菌、病理改变等方面的研究，不能充分反映药物治疗该病的其他作用机制，因此还能再开辟新方向，以期为临床应用提供更加充分的实验依据。

【REFERENCES】

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[2] 田润梅，康克非.初诊病例中某些变态反应性皮肤病的统计分析[J].临床皮肤科杂志，1988， 17(6)：288-289.

[3] 刘敏.HPLC测定杀菌消痒洗剂中苦参碱的含量[J].中成药，2006，28(7)：1070-1071.

[4] 余家奇，蹇红军，等.HPLC法测定杀菌消痒洗剂中苦参碱的含量[J].中国药事，2005，19(10)：615-616.

[5] 安家丰，陈 勇.中医药治疗急性皮炎、湿疹的进展[J].皮肤病与性病，1996，18(1)：29-30.

[6] 杜憬生.消疹液治疗慢性湿疹的药理学研究[D].广州：广州中医药大学，2008.

Du J S.Pharmacodynamics study of Xiaozhen fluid on Chronic Eczema Abstract[D].Guangzhou：Guangzhou University of Chinese Medicine，2008.

[7] 刘玉清，宋晓东.苦参的药理活性及临床应用[J].中国分子心脏病学杂志，2003，3(4)：23.

[8] 邓茂，钟桂书，等.川百消痒洗剂治疗湿疹的Ⅰ临床研究[J].药物与临床，2011，20(2)：420-422.

[9] 蒲江，朱全刚，陆松伟，等.复方苦参消痒洗剂的研制[J].浙江中西医结合杂志，2010，20(7)：445-447.

[10] 朱必建，刘剑秋.自拟止痒洗剂治疗皮肤瘙痒症100例疗效观察[J].中医中药，2011，18(4)：89.

▲通讯作者：李 玲，药理学硕士，教授，从事药理学研究。

Pharmacodynamics study on antipruritic lotion on animal model with acute and chronic eczema*

LI Jiangping1，JIANG Ling1，LI Ling2▲

(1No.2HospitalAffiliatedtoTCMCollegeofGuiyaug，Guiyaug550001，China；2FunctionLaboratoryofGuizhouMedicalUniversity，Guiyaug550004，China)

In order to clarify the cure mechanism of the antipruritic lotion on acute and chronic eczema，we observed the effects of the antipruritic lotion on the expression of interleukin-1β(IL-1β)，interleukin-4(IL-4)and interleukin-8(IL-8)in mice with acute and chronic eczema，and its anti-inflammatory and antipruritic effects.2，4-dinitro Fluor benzene(DNFB)and 2，4-dinitrochlorobenzene(DNCB)were used to establish the mice model with acute and chronic eczema.Then antipruritic lotion(volume concentration of 10 %，20 % and 40 %)and positive control drug(Compound Kushen Lotion，concentration of 40 %)were given to the mice，and the change of inflammatory factors in each group and the anti-inflammatory effect of the lotions were compared.Phosphoric-acid-histamine-induced itch test and xylene-induced inflammation test were carried out to observe the antipruritic and anti-inflammatory effect of the antipruritic lotion.The results showed that，the antipruritic lotion of all doses could significantly reduce the ear swelling of ACD mice(P<0.01)，and could reduce the serum level of IL-1β and IL-8 in ACD mice(P<0.01).The antipruritic lotion of high and medium doses could significantly reduce the ear swelling of DTH mice(P<0.01)，and the lotion of all doses could reduce the serum level of IL-1β and IL-8 in DTH mice(P<0.01).The antipruritic lotion of high and medium doses could rise the histamine-induced itch threshold in guinea pigs(P<0.05).The antipruritic lotion of all doses could significantly inhibit the xylene-induced ear swelling in mice(P<0.01).In conclusion，the antipruritic lotion cured acute and chronic eczema by reducing IL-1β and IL-8 level，and its antipruritic and anti-inflammatory effects were significant.

antipruritic lotion，acute and chronic eczema，IL-1β，IL-8，IL-4，antipruritic，anti-inflammatory

R

B

2016-08-18；

2016-08-31

贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术研究课题(编号：QZYY-2014-026)。

李江萍，药学学士，副主任药师，从事临床药学研究。