HPLC法测定利心丸中毛蕊花糖苷的含量

于士婷，赵大庆，李修刚，白雪媛#，赵 雨（.长春中医药大学药学院，长春 307；.长春市修和商贸有限公司，长春 30000）

HPLC法测定利心丸中毛蕊花糖苷的含量

于士婷1＊，赵大庆1，李修刚2，白雪媛1#，赵 雨1（1.长春中医药大学药学院，长春 130117；2.长春市修和商贸有限公司，长春 130000）

目的：建立测定利心丸中毛蕊花糖苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为ZORBAX SB-Aq，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶84，V/V），流速为1.0 ml/min，检测波长为334 nm，柱温为30℃，进样量为10 μl。结果：毛蕊花糖苷检测进样量线性范围为0.254 4～1.526 4µg（r＝0.999 7）；定量限为1.358 6µg/ml，检测限为0.407 6µg/ml；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2%；加样回收率为95.06%～97.31%（RSD＝1.05%，n＝6）。结论：该方法操作简便、结果准确，适用于测定利心丸中毛蕊花糖苷的含量。

利心丸；毛蕊花糖苷；高效液相色谱法；含量测定

利心丸由貂心、茯苓、地黄、天冬、防己、牡丹皮、琥珀和朱砂等8味中药材组成，具有补心安神的功效，可用于治疗风湿性心脏病、心动过速、心律不齐、心力衰竭等心血不足之证者。毛蕊花糖苷是利心丸原料地黄中的主要有效成分，具有保护神经、降血糖等作用[1]。

利心丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂》（第8册）（WS3-B-1546-93）[2]，该标准关于利心丸的质量控制过于简单，主要采用显微和紫外分光光度法进行鉴别，而目前的相关文献主要集中在丹皮酚的含量测定及对地黄、防己和牡丹皮的薄层色谱定性鉴别[3-6]，且没有对毛蕊花糖苷的含量测定报道。因此，笔者采用高效液相色谱法（HPLC）建立了测定利心丸中毛蕊花糖苷含量的方法，以期为完善利心丸的质量标准提供参考。

1 材料

1.1 仪器

1100型HPLC仪，包括G1311A型四元泵、G1315B型二级管阵列检测器、G1322A型脱气机、ChemStation数据处理系统（美国Aglient公司）；HH-2型恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；DHG-9070A型电热鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；CP225D型万分之一电子天平（德国Sartorius公司）。

1.2 药品与试剂

利心丸（吉林特研药业有限公司，批号：20141201、20141202、20141203、20141204、20141205，规格：3 g/袋）；毛蕊花糖苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：15040713，纯度：99.57%）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-Aq（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶84，V/V）；流速：1.0 ml/min；检测波长：334 nm；柱温：30℃；进样量：10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密量取毛蕊花糖苷对照品4.24 mg，置于50 ml量瓶中，加甲醇制成每1 ml含毛蕊花糖苷84.8µg的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取样品适量，粉碎成细粉，取约6.0 g，精密称定，置于250 ml锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，加热回流提取1.5 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣用流动相溶解，转移至10 ml量瓶中，并用流动相定容，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 取不含地黄的其余药材，按样品的制备工艺和处方比例制备缺地黄的阴性样品，再按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。由图1可知，在该色谱条件下，各成分均能达到基线分离，分离度＞1.5；理论板数以毛蕊花糖苷峰计＞4 000，保留时间为15.954 min。结果表明，其他成分对测定无干扰。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.毛蕊花糖苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；C.negative control；1.verbascoside

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下对照品溶液3、6、9、12、15、18 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以毛蕊花糖苷进样量（x，µg）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得毛蕊花糖苷的回归方程为y＝361.1x+6.4（r＝0.999 7）。结果表明，毛蕊花糖苷检测进样量线性范围为0.254 4～1.526 4µg。

2.5 定量限与检测限考察

取“2.2.1”项下对照品溶液适量，等倍逐步稀释，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。当信噪比为10∶1时，得定量限为1.358 6µg/ml；当信噪比为3∶1时，得检测限为0.407 6µg/ml。

2.6 精密度试验

精密量取“2.2.1”项下对照品溶液10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，毛蕊花糖苷峰面积的RSD＝1.66%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：20141201）适量，分别于室温下放置0、1、2、4、6、8 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，毛蕊花糖苷峰面积的RSD＝1.50%（n＝6），表明供试品溶液在室温下8 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一批样品（批号：20141201）适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积并计算平均含量。结果，毛蕊花糖苷的平均含量为54.7µg/g，RSD＝1.98%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验

取样品（批号：20141201）适量，约6.0 g，精密称定，共6份，置于250 ml锥形瓶中，加入一定质量的毛蕊花糖苷对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.10 样品含量测定

取5批样品各适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2 Results of contents determination of samples（n＝3）

3 讨论

3.1 提取方法和提取溶剂的选择

笔者参考相关文献[7-10]考察了不同提取方式（回流提取、超声提取和索氏提取）以及不同溶剂（甲醇、50%甲醇、75%甲醇）对样品的处理。结果，以甲醇经回流提取的提取率最高，且经方法学验证其专属性好。因此，本试验选择甲醇为提取溶剂，回流提取为提取方法。

3.2 流动相的选择

笔者参考相关文献[11-13]，分别考察了乙腈-0.1%乙酸溶液、甲醇-0.1%乙酸溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液等不同比例的溶液作为流动相。结果发现，以乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶84，V/V）作为流动相时的分离效果最好。因此，本试验选择以乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶84，V/V）为流动相。

综上所述，本方法操作简便、结果准确，适用于测定利心丸中毛蕊花糖苷的含量。

[1] 刘晶，邹伟，安利佳.从现代衰老学说谈地黄的抗衰老作用研究进展[J].辽宁中医杂志，2008，35（6）：952.

[2] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制剂：第8册[S].1993：80.

[3] 吴楠，张秀丽.HPLC法测定利心丸中丹皮酚的含量[J].中国药事，2009，23（6）：568.

[4] 王喜民，孙文，吴晶.利心丸质量标准的研究[J].中国医药指南，2014，12（18）：88.

[5] 张绍轩，扬军，王学农，等.利心丸中牡丹皮及防己的薄层色谱鉴别[J].时珍国医国药，2009，20（2）：432.

[6] 张绍轩，张红岩，司云珊，等.利心丸中生地黄的薄层色谱鉴别[J].时珍国医国药，2010，21（2）：506.

[7] 李文斌.HPLC法测定麦味地黄丸中毛蕊花糖苷的含量[J].中国药房，2014，25（28）：2 665.

[8] 何培根，刘菁，李志浩.补益地黄丸中毛蕊花糖苷的含量分析[J].现代中药研究与实践，2015，29（3）：56.

[9] 王亮，张巧艳，年华，等.用HPLC法测定地黄叶中毛蕊花糖苷含量[J].药学服务与研究，2015，15（1）：26.

[10] 赵群涛，张红伟，方永凯，等.HPLC法同时测定芪黄疏糖胶囊中梓醇和毛蕊花糖苷的含量[J].中华中医药学刊，2014，32（5）：1 200.

[11] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：124.

[12] 陈天朝，翟来超.HPLC同时测定地黄中梓醇与毛蕊花糖苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（5）：105.

[13] 陈健，刘钱林，张传平，等.HPLC法测定口炎颗粒中毛蕊花糖苷的含量[J].世界最新医学信息文摘，2015，15（65）：110.

（编辑：刘 柳）

Content Determination of Verbascoside in Lixin Pill by HPLC

YU Shiting1，ZHAO Daqing1，LI Xiugang2，BAI Xueyuan1，ZHAO Yu1（1.School of Pharmacy，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China；2.Changchun Xiuhe Trading Company，Changchun 130000，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of verbascoside in Lixin pill.METHODS：HPLC was performed on the column of ZORBAX SB-Aq with mobile phase of acetonitrile-1%phosphoric acid solution（16∶84，V/V）at a flow rate of 1.0 ml/min，detection wavelength was 334 nm，column temperature was 30℃，and injection volume was 10 μl.RESULTS：The linear range of verbascoside was 0.254 4-1.526 4µg（r＝0.999 7）；limit of quantification was 1.358 6µg/ml，and limit of detection was 0.407 6µg/ml；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2%；recovery was 95.06%-97.31%（RSD＝1.05%，n＝6）.CONCLUSIONS：The method is simple，accurate，and suitable for the content determination of verbascoside in Lixin pill.

Lixin pill；Verbascoside；HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2016）33-4728-03

2016-01-27

2016-08-29）

＊硕士研究生。研究方向：中药有效成分及产品开发。E-mail：470687557@qq.com

#通信作者：副研究员，硕士。研究方向：中药有效成分及产品开发。E-mail：baixy1212@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.33.40