蒙药大栀子超微饮片的质量标准研究Δ

白万富，鞠爱华，张 静，蔡丽娟，庄志鹤（1.内蒙古科技大学包头医学院，内蒙古包头 014040；.内蒙古医科大学药学院，呼和浩特 010059）

蒙药大栀子超微饮片的质量标准研究Δ

白万富1＊，鞠爱华2#，张 静2，蔡丽娟2，庄志鹤2（1.内蒙古科技大学包头医学院，内蒙古包头 014040；2.内蒙古医科大学药学院，呼和浩特 010059）

目的：建立蒙药大栀子超微饮片的质量标准。方法：观察超微饮片的显微鉴别特征；采用薄层色谱法（TLC）对超微饮片进行定性鉴别；检测超微饮片水分、灰分、浸出物量；采用高效液相色谱法测定超微饮片中栀子苷的含量：色谱柱为Kromasil C18，流动相为乙腈-水（15∶85，V/V），流速为1.0 ml/min，检测波长为238 nm，柱温为30℃，进样量为10 μl。结果：超微饮片细胞已完全破壁，粒径为5～60 μm。超微饮片TLC斑点清晰，分离良好。超微饮片水分为3.89%～5.55%，灰分为3.13%～5.22%，酸不溶性灰分为0.16%～0.80%，浸出物为29.2%～43.4%。栀子苷检测质量浓度线性范围为1.56～7.82 μg/ml（r＝0.999 9）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2.0%；加样回收率为100.17%～102.04%（RSD＝1.07%，n＝6）。结论：该研究所建标准可用于蒙药大栀子超微饮片的质量控制。

蒙药大栀子；超微饮片；栀子苷；质量标准

大栀子为茜草科植物长果栀子Gardenia jasminoides Ellis f.Longicarpa Z.W.Xie et M.Okada的干燥成熟果实。为蒙医专用特色药材，蒙药名为“朱如拉”，收载于1998年版《中华人民共和国药品标准》蒙药分册[1]。该药具有清血热、明目、祛“巴达干协日”、生津、调元的功效，蒙医临床用于血热、肝热、黄疸、急性结膜炎、肾热、膀胱热、血热头痛、口渴等证的治疗。

大栀子主要含有栀子苷等环烯醚萜类成分，故本课题组在前期对蒙药大栀子超微饮片系统规范研究的基础上，为了控制其内在质量，对其从性状、显微、薄层色谱（TLC）、含量测定及各项检查方面进行了深入研究，为建立科学、合理的质量标准提供参考。

1 材料

1.1 仪器

SLC-10AVP型高效液相色谱（HPLC）仪，包括紫外可见检测器、CLASS-VP色谱工作站（日本Shimadzu公司）；BFM-6A型翻滚式倍力粉碎机（济南倍力粉碎技术工程有限公司）；AL204型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；3001型干粉激光粒度测定仪、激光粒度分析专家系统（济南微纳仪器有限公司）；KQ-250D型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率：400 W，频率：40 kHz）。

1.2 试剂

栀子苷对照品（批号：110749-200714，纯度＞98%）、大栀子对照药材（批号：120907-2011111）均购自中国食品药品检定研究院；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

1.3 药材

大栀子药材采集于广西等地及市售（见表1），均经内蒙古医科大学药学院鞠爱华教授鉴定为真品。超微饮片为笔者自制，粒径为5～60 μm。

2 方法与结果

2.1 性状鉴别

大栀子超微饮片为黄红色极细微粉，质地细腻而柔滑，气微，味酸而苦。

2.2 显微形貌特征

取粉末少许，置载玻片上，滴加蒸馏水少许，加盖玻片，置显微镜下观察，可见超微饮片细胞已完全破壁，失去大栀子粉末的原有显微形貌，为细小均匀的颗粒状，粒径为5～60 μm，极少数为75 μm；大栀子原粉可见各种薄壁组织、厚壁组织的碎断片，或完整的石细胞、纤维等聚集成群或散在，大小悬殊，粒径为40～380 μm[2-4]，详见图1。

表1 大栀子药材来源Tab 1 Origin of G.jasminoides

图1 大栀子原粉与超微饮片显微特征图（100×）A.原粉；B.超微饮片Fig 1 Microscopic characters of G.jasminoides raw powder and ultramicro decoction piece（100×）A.raw powder；B.ultramicro decoction piece

2.3 TLC鉴别

取本品粉末1.0 g，加甲醇10 ml，超声处理30 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成质量浓度为2 mg/ml的对照品溶液。再取大栀子对照药材1.0 g，研细，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。按TLC法[2015年版《中国药典》（四部）][5]试验，吸取上述对照品溶液4 μl，供试品溶液和对照药材溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于110℃加热至斑点显色清晰，置日光灯下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图2。

图2 薄层色谱图1～4.供试品；5.对照药材；6.对照品Fig 2 TLC chromatograms1-4.test samples；5.control medicinal herb；6.reference substance

2.4 水分检查

按2015年版《中国药典》（四部）水分测定法[5]项下方法检测样品水分。结果，10批样品水分在3.89%～5.55%范围内（见表2），故拟定大栀子超微饮片水分含量不得过6.0%。

2.5 总灰分检查

按2015年版《中国药典》（四部）灰分测定法[5]项下方法检测样品总灰分。结果，10批样品总灰分在3.13%～5.22%范围内（见表2），故拟定大栀子超微饮片总灰分含量不得过5.5%。

2.6 酸不溶性灰分检查

按2015年版《中国药典》（四部）灰分测定法[5]项下方法检测样品酸不溶性灰分。结果，10批样品酸不溶性灰分在0.16%～0.80%范围内（见表2），故拟定大栀子超微饮片酸不溶性灰分含量不得过1.0%。

2.7 浸出物检查

按2015年版《中国药典》（四部）热浸法[5]项下方法检测样品浸出物量。结果，10批样品浸出物量在29.2%～43.4%范围内（见表2），故拟定大栀子超微饮片浸出物量不得低于28.0%。

表2 大栀子超微饮片各项目检测结果（n＝2）Tab 2 Determination results of G.jasminoides ultramicro decoction piece（n＝2）

2.8 含量测定[6-11]

2.8.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈-水（15∶85，V/V）；流速：1.0 ml/min；检测波长：238 nm；柱温：30℃；进样量：10 μl。在上述色谱条件下，理论板数以栀子苷峰计≥1 500，各成分基线分离良好，分离度＞1.5，详见图3。

2.8.2 对照品溶液的制备 取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成栀子苷质量浓度为6 μg/ml的对照品溶液。

2.8.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过4号筛）约0.1 g，精密称定，置于具塞锥瓶中，加甲醇25 ml，称定质量，超声处理20 min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过。精密量取续滤液2 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得。

2.8.4 线性关系考察 取栀子苷对照品11.5 mg，精密称定，置于25 ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀（栀子苷质量浓度为460.00 μg/ml）；精密量取上述溶液1.7 ml，置于25 ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得栀子苷对照品溶液（栀子苷质量浓度为31.28 μg/ml）。分别精密量取上述栀子苷对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，分别置于10 ml量瓶中，加甲醇定容，制成系列对照品溶液。精密量取上述系列对照品溶液各10 μl，按“2.8.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以栀子苷质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得栀子苷回归方程为y＝3.173 9×104x+6 675.4（r＝0.999 9）。结果表明，栀子苷检测质量浓度线性范围为1.56～7.82 μg/ml。

图3 高效液相色谱图A.供试品；B.对照品；1.栀子苷Fig 3 HPLC chromatogramsA.test sample；B.reference substance；1.geniposide

2.8.5 精密度试验 取“2.8.2”项下对照品溶液适量，按“2.9.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，栀子苷峰面积的RSD＝0.74%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.8.6 稳定性试验 取“2.8.3”项下供试品溶液（批号：1）适量，分别于室温下放置0、4、8、12、16、20、24 h时按“2.8.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷峰面积的RSD＝1.23%（n＝7），表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.8.7 重复性试验 精密称取同一批样品（批号：1）适量，按“2.8.3”项下方法制备供试品溶液，共6份，再按“2.8.1”项下色谱条件进样测定，计算样品含量。结果，栀子苷平均含量为5.28%，RSD＝0.95%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.8.8 加样回收率试验 取已知含量样品（批号：1）适量，共6份，分别加入一定质量的栀子苷对照品，按“2.8.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.8.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表3。

表3 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 3 Results of recovery tests（n＝6）

2.8.9 样品含量测定 取10批样品各适量，分别按“2.8.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.8.1”项下色谱条件进样测定，计算样品含量，结果见表2。结果，不同产地大栀子超微饮片中栀子苷含量差异较大，根据10批样品测定结果，考虑到各地药材质量差异，故规定栀子苷含量不得低于2.8%。

3 讨论

3.1 TLC鉴别的选择

TLC鉴别试验中，笔者选择了大栀子药材及大栀子特征性成分栀子苷作为对照[12]。通过比较研究，建立了TLC鉴别系统。笔者在预试验中选用0.5%羧甲基纤维素钠溶液制备的硅胶G薄层板，并比较了14个不同展开系统：（1）乙酸乙酯-甲醇-水（6∶1∶0.1，V/V）；（2）乙酸乙酯-甲酸-水（6∶0.5∶0.1，V/V/V）；（3）三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（3∶3∶0.5，V/V/V）；（4）三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（3∶3∶1∶0.1，V/V/V/V）；（5）三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（3∶3∶1∶0.1，V/V/V/V）；（6）三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（1∶3∶0.5，V/V/V）；（7）三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（1∶3∶1，V/V/V）；（8）乙酸乙酯-甲酸-水（4∶1∶0.1，V/V/V）；（9）乙酸乙酯-甲酸（4∶1，V/V）；（10）乙酸乙酯-丙酮-甲酸（5∶5∶1，V/V/V）；（11）三氯甲烷-甲醇（3∶1，V/V），展距8 cm；（12）三氯甲烷-甲醇（3∶1，V/V），展距15 cm；（13）三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（3∶3∶2∶0.1，V/V/V/V）；（14）乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1，V/V/V/V），显色剂为10%硫酸乙醇，于110℃加热至斑点显色清晰。结果表明，以第14个系统为展开系统时的效果最为理想，分离度良好，斑点清晰，重复性好。

此外，笔者考察了不同温度（－5、25℃）、不同湿度（25%、75%）以及不同型号的薄层板对TLC鉴别的影响，结果表明以上条件对试验均无显著影响。

3.2 检测波长的选择

文献[12]和2015年版《中国药典》（一部）[6]中有关栀子苷的测定波长均为238 nm，经在200～700 nm波长范围内进行光谱扫描，证明对照品及供试品均在238 nm波长处有最大吸收。故本试验选择238 nm为检测波长，既可保证样品测定，又可排除其他组分的干扰。

综上所述，本研究所建标准可用于蒙药大栀子超微饮片的质量控制。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药品标准：蒙药分册[S].呼和浩特：内蒙古人民出版社，1998：2.

[2] 王爱武，吕文海，耿晖.超微饮片碎在中药生产中应用概况及展望[J].时珍国医国药，2000，7（11）：669.

[3] 谢瑞红，王顺喜，谢建新，等.超微粉碎技术的应用现状与发展趋势[J].中国粉体技术，2009，15（3）：64.

[4] 李守信，邱新建，贺凤成，等.红参超微粉的质量标准研究[J].中国药房，2014，25（3）：256.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：57、103、204、418.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：248.

[7] 王恩力，董方，姚景春.栀子苷药理学和毒理学研究进展[J].中国药房，2015，26（19）：2 730.

[8] 朱继孝，李磊，朱玉野，等.HPLC-DAD法同时测定复方栀子柏皮汤中8种有效成分的含量[J].中药材，2014，37（1）：147.

[9] 王钢力，赵淑杰，陈德昌.大黄栀子果实化学成分的研究[J].中国中药杂志，1999，24（1）：38.

[10] 鞠爱华，周凯，张静，等.蒙药大栀子普通粉与超微饮片高效液相色谱指纹图谱的比较[J].中药材，2013，36（7）：1 072.

[11] 关金凤，于淑华，刘玉琴.反相高效液相色谱法测定蒙药大栀子中栀子苷的含量[J].中国民族民间医药杂志，2001，53（4）：355.

[12] 包晓华，赵贤芳，王秀兰，等.蒙药洁妇康洗剂的薄层色谱鉴别研究[J].内蒙古民族大学学报：自然科学版，2014，29（5）：582.

Study on the Quality Standard of Ultramicro Decoction Piece of Meng Medicine Gardenia jasminoides

BAI Wanfu1，JU Aihua2，ZHANG Jing2，CAI Lijuan2，ZHUANG Zhihe2（1.Baotou Medical College，Inner Mongolia University of Science&Technology，Inner Mongolia Baotou 014040，China；2.College of Pharmacy，Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010059，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard of ultramicro decoction piece of Meng medicine Gardenia jasminoides. METHODS：Microscopic identification character of the ultramicro decoction piece was observed；TLC was adopted for its qualitative identification；moisture，ash，extract were detected；HPLC was used for the content determination of geniposide：the column was Kromasil C18with mobile phase of acetonitrile-water（15∶85，V/V）at a flow rate of 1.0 ml/min，detection wavelength was 238 nm，column temperature was 30℃，and injection volume was 10 μl.RESULTS：Cell wall was completely broken and the particle sizes were 5-60 μm.TLC spots were clear and well separated.The moisture was 3.89%-5.55%，ash was 3.13%-5.22%，acid-insoluble ash was 0.16%-0.80%，and extract was 29.2%-43.4%.The linear range of geniposide was 1.56-7.82 μg/ml（r＝0.999 9）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2.0%；recovery was 100.17%-102.04%（RSD＝1.07%，n＝6）.CONCLUSIONS：The standard can be used for the quality control of ultramicro decoction piece of Meng medicine G.jasminoides.

Gardenia jasminoides；Ultramicro decoction piece；Geniposide；Quality standard

R282.5

A

1001-0408（2016）33-4689-03

2015-12-07

2016-01-31）

（编辑：张 静）

国家科技支撑计划课题(No.2012BAI28B01)

＊讲师，博士。研究方向：中蒙药质量标准及有效成分分析。电话：0472-7167795。E-mail:bwf007007@sina.com

#通信作者：教授。研究方向：生药学。电话：0471-6653132。E-mail：hhhtnmyxyjih5511@sina.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.33.27