HS-GC法同时测定尼莫地平缓释片中乙醇和丙酮的残留量Δ

胡晓琴，韩 春（长治学院化学系，山西长治 046011）

·药物分析与检定·

HS-GC法同时测定尼莫地平缓释片中乙醇和丙酮的残留量Δ

胡晓琴＊，韩 春#（长治学院化学系，山西长治 046011）

目的：建立同时测定尼莫地平缓释片中乙醇和丙酮残留量的方法。方法：采用顶空气相色谱法。色谱柱为以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）为固定液的毛细管柱，程序升温，进样口温度为230℃，检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为250℃，载气为氮气，流速为2.0 ml/min，分流比为5∶1，顶空加热温度为90℃，平衡时间为20 min，顶空进样量为1.0 ml。结果：乙醇、丙酮检测质量浓度线性范围分别为1.25～500.0 μg/ml（r＝0.999 9）、0.50～202.0 μg/ml（r＝0.999 2）；定量限分别为5.01、2.02 μg/ml，检测限分别为1.67、0.67 μg/ml；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜3.0%；加样回收率分别为96.81%～102.00%（RSD＝1.89%，n＝9）、96.64%～102.31%（RSD＝1.82%，n＝9）。结论：该方法简便、快速、准确，可用于同时测定尼莫地平缓释片中乙醇和丙酮的残留量。

顶空气相色谱法；尼莫地平；乙醇；丙酮；有机溶剂；残留量

尼莫地平（Nimodipine，NMP）是第二代双氢吡啶类钙离子阻滞药，临床上主要用于缺血性脑血管病、阿尔茨海默病、蛛网膜下腔出血等疾病的治疗[1-3]，也是近年来治疗高血压的首选药物之一[4]。尼莫地平缓释片较其他普通剂型具有生物稳定性高、作用时间长、不良反应少等特点，近几年在临床上应用广泛[5]。由于其制备过程中用到了有机溶剂乙醇和丙酮[6]，可能会出现有机溶剂超标，长期使用会对人体造成严重危害[7]。该药收载于国家新药转正标准WS-（X-068）-2004Z，但该标准未对有机溶剂残留量作要求。因此，笔者根据2015年版《中国药典》（四部）通则0861残留溶剂测定法中对残留溶剂的质量控制要求（乙醇和丙酮的溶剂残留限量应＜0.5%）[8]，首次建立了采用顶空气相色谱法（HS-GC）同时测定尼莫地平缓释片中乙醇、丙酮残留量的方法，以期为更好地控制该制剂的质量提供参考。

1 材料

1.1 仪器

7890A型气相色谱仪，包括氢火焰离子化检测器（FID）、7694E顶空自动进样装置、7890A色谱工作站（美国Agilent公司）；MS204TS型万分之一电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；KQ-100DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率：100 W，频率：40 kHz）。

1.2 药品与试剂

尼莫地平缓释片（山西振东制药股份有限公司，批号：20150801、20150802、20150803、20150903，规格：60 mg/片）；乙醇对照品（批号：20150911，纯度≥99.8%）、丙酮对照品（批号：20140611，纯度≥99.7%）均购自国药集团化学试剂有限公司；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）为固定液的毛细管柱（30 m×0.32 mm，1.4 μm）；程序升温：初始温度40℃，保持2 min，以10℃/min升温至60℃，再以30℃/min升温至230℃，保持2 min；进样口温度：230℃；检测器：FID；检测器温度：250℃；载气：氮气；流速：2.0 ml/min；分流比：5∶1；顶空加热温度：90℃；平衡时间：20 min；顶空进样量：1.0 ml。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液 精密称取乙醇对照品50.1 mg、丙酮对照品50.6 mg，置于同一100 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，摇匀，作为混合对照品贮备液。精密量取上述混合对照品贮备液5.0 ml，置于50 ml量瓶中，加DMF定容，摇匀，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液1.0 ml，置于顶空瓶中，密封，作为混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取样品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约含尼莫地平300 mg），置于10 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，超声处理10 min，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液1.0 ml，置于顶空瓶中，密封，作为供试品溶液。

2.2.3 空白对照溶液 精密量取DMF 1.0 ml，置于顶空瓶中，密封，作为空白对照溶液。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。由图1可知，在该色谱条件下，乙醇和丙酮均能达到基线分离，分离度均＞2.0；理论板数以乙醇峰计为12 567，乙醇、丙酮的保留时间分别为3.926、4.375 min。结果表明，其他成分对测定无干扰。

图1 气相色谱图A.混合对照品；B.供试品；C.空白对照；1.乙醇；2.丙酮Fig 1 GC chromatogramsA.mixed reference substance；B.test sample；C.blank control；1.ethanol；2.acetone

2.4 线性关系考察

精密称取乙醇对照品25.0 mg、丙酮对照品10.1 mg，置于同一10 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，摇匀，制成乙醇和丙酮质量浓度分别为2.50、1.01 mg/ml的线性溶液。精密量取上述线性溶液0.005、0.01、0.1、0.2、0.6、1.0、1.5、2.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，加DMF定容，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得乙醇回归方程为y＝1 312.4x－23.98（r＝0.999 9），丙酮回归方程为y＝2 883.7x－4.503（r＝0.999 2）。结果表明，乙醇、丙酮检测质量浓度线性范围分别为1.25～500.0、0.50～202.0 μg/ml。

2.5 定量限与检测限考察

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，等倍逐步稀释，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。当信噪比为10∶1时，得乙醇、丙酮的定量限分别为5.01、2.02 μg/ml；当信噪比为3∶1时，得乙醇、丙酮的检测限分别为1.67、0.67 μg/ml。

2.6 精密度试验

精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，乙醇、丙酮峰面积的RSD分别为1.78%、1.83%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：20150801）适量，分别于室温下放置0、1、2、4、6、8 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，乙醇、丙酮峰面积的RSD分别为2.48%、1.88%（n＝6），表明供试品溶液在室温下8 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一批样品（批号：20150801）适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，乙醇、丙酮峰面积的RSD分别为1.91%、2.99%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验

取样品（批号：20150903）适量，研细，精密称取1.45 g（约含尼莫地平300 mg），共9份，分别置于10 ml量瓶中，再分别加入低、中、高质量浓度的乙醇、丙酮对照品，每组3份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。

2.10 样品中残留溶剂的测定

取4批样品适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算乙醇、丙酮的残留量，结果见表2。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

为保证待测样品中的乙醇、丙酮完全释放，必须选择适合的溶剂来完全溶解待测样品。笔者分别参考了水、二甲基亚砜（DMSO）和DMF[8]，结果尼莫地平不溶于水，不能保证乙醇、丙酮的有效溶出；但其在DMSO和DMF中均能溶解，经试验验证，当DMF作为溶剂时，乙醇、丙酮的分离度良好、峰形对称、灵敏度高。故本试验选择DMF为溶剂。

3.2 色谱柱的选择

为了使待测残留溶剂获得较好的分离度，笔者分别考察了非极性色谱柱Rtx®-1（50 m×0.53 mm，10 μm）、弱极性色谱柱HP-5（30 m×0.32 mm，0.50 μm）、中等极性色谱柱以DB-624为固定液的毛细管柱（30 m×0.32 mm，1.4 μm）和极性色谱柱Rtx®-wax（20 m×0.18 mm，0.4 μm）对样品的处理。结果，采用Rtx®-1、HP-5时，乙醇、丙酮保留时间较长；采用Rtx®-wax时，分离度较差；以DB-624为固定液的毛细管柱时，保留时间短、分离度好、峰形对称。故选择以DB-624为固定液的毛细管柱为本试验的色谱柱。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

表2 样品中残留溶剂测定结果（n＝3，%）Tab 2 Determination results of residual solvents in samples（n＝3，%）

3.3 样品处理的优化

目前，残留溶剂的检查，只强调原料药中有机溶剂的残留情况，而对制剂过程中使用的有机溶剂没有引起足够的重视[9]，尤其是在脂质体[10-11]、缓（控）释[12-13]、微丸包衣[14-15]等过程中使用的有机溶剂。本试验对样品的处理采用将药片研细，并进行超声处理，保证了药片充分溶于溶剂中，使得最终测量结果能够真实反映药物制剂中的有机溶剂残留量。

综上所述，本方法简便、快速、准确，可用于同时测定尼莫地平缓释片中乙醇和丙酮的残留量。

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Residual Determination of Ethanol andAcetone in Nimodipine Sustained-release Tablet by HS-GC

HU Xiaoqin，HAN Chun（Dept.of Chemistry，Changzhi College，Shanxi Changzhi 046011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the residual determination of ethanol and acetone in Nimodipine sustained-release tablet.METHODS：Headspace GC was on the column of capillary column with fixative solution of 6%cyanopropyl phenyl-94%dimethyl polysiloxane（DB-624）by temperature programming，injector temperature was 230℃，detector was a flame ionization detector，detector temperature was 250℃，carrier gas was nitrogen gas，flow rate was 2.0 ml/min，split ratio was 5∶1，equilibrium temperature was 90℃，equilibrium time was 20 min，and volume of sample was 1.0 ml.RESULTS：The linear range was 1.25-500.0 μg/ml for ethanol（r＝0.999 9）and 0.50-202.0 μg/ml for acetone（r＝0.999 2）；limits of quantitative were 5.01，2.02 μg/ml，limits of detection were 1.67，0.67 μg/ml，respectively；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 3.0%；recoveries were 96.81%-102.00%（RSD＝1.89%，n＝9），96.64%-102.31%（RSD＝1.82%，n＝9），respectively. CONCLUSIONS：The method is simple，rapid，accurate，and can be used for simultaneous residual determination of ethanol and acetone in Nimodipine sustained-release tablet.

HS-GC；Nimodipine；Ethanol；Acetone；Organic solvent；Residue

R917

A

1001-0408（2016）33-4686-03

2016-01-08

2016-08-31）

（编辑：刘 柳）

国家自然科学基金资助项目（No.21402012）；国家自然科学项目子项目（No.GJZXM201605）

＊助教，硕士。研究方向：药物分析。电话：0355-2178113。E-mail：244174693@qq.com

#通信作者：副教授，博士。研究方向：药物合成与分析。电话：0355-2178113。E-mail：coldspringfibre@126.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.33.26