气相色谱法测定三氯乙腈中有关物质含量的研究

戴根来，陆玉明，施伶俐

(1 合肥久诺医药科技有限公司，安徽 合肥 230031；2 安徽新华学院药学院，安徽 合肥 230088)



气相色谱法测定三氯乙腈中有关物质含量的研究

戴根来，陆玉明，施伶俐

(1 合肥久诺医药科技有限公司，安徽 合肥 230031；2 安徽新华学院药学院，安徽 合肥 230088)

采用气相色谱法测定三氯乙腈中有关物质含量，采用AgilentDB-624毛细管柱(30 m×0.53 mm×3.0 μm)，氢火焰离子检测器，程序升温，进样口温度160 ℃，检测器温度250 ℃，载气为氮气。通过专属性试验、线性关系、精密度试验、重复性试验和耐用性试验考察，表明本法操作简便、专属性强、分离度好、准确度高，具有良好的重复性和耐受性，可作为三氯乙腈有关物质的测定方法。

三氯乙腈；有关物质；气相色谱法

药物中任何影响其纯度的物质统称为杂质，而其中的有机杂质一般与活性成分结构相似或具有渊源关系，称为有关物质。有关物质的测定与控制对药物质量的安全性和可控性具有重要意义[1]。三氯乙腈是合成很多活性化合物的重要原料之一，笔者在研究盐酸美金刚的合成工艺中，三氯乙腈作为合成路线中的关键物料，其含量和纯度会直接影响到终产品的质量。三氯乙腈原料中的有关物质主要包括一氯乙腈、二氯乙腈等[2]。

药物中有关物质的分析方法很多，其中气相色谱法具有分离效率高、分析速度快、样品用量少、检测灵敏度高、选择性好等优点[3-5]。气相色谱法要求样品能够气化且具有热稳定性，根据卤代腈的结构特点，对于卤代腈的检测方法多采用气相色谱法[6-8]。故本研究采用气相色谱法，建立三氯乙腈中有关物质含量测定方法，为合成高纯度盐酸美金刚奠定基础。

1 仪器与试剂

仪器：GC1890气相色谱仪，上海惠普分析仪器有限公司；AB135-S电子天平，瑞士梅特勒公司；超声波清洗器，天津市鑫洲科技有限公司。

试剂：甲醇、乙腈均为色谱纯；一氯乙腈、二氯乙腈、三氯乙腈，自制并提纯。

2 方法与结果

2.1 样品溶液制备

乙腈对照品单标溶液：取乙腈对照品100.0 mg，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含10 mg的溶液，作为乙腈单标溶液。

一氯乙腈对照品单标溶液：取一氯乙腈对照品100.0 mg，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含10 mg的溶液，作为一氯乙腈单标溶液。

二氯乙腈对照品单标溶液：取二氯乙腈对照品100.0 mg，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含10 mg的溶液，作为二氯乙腈单标溶液。

三氯乙腈对照品单标溶液：取三氯乙腈对照品1000.0 mg，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含100 mg的溶液，作为三氯乙腈单标溶液。

混合溶液：取乙腈100 mg、一氯乙腈100 mg、二氯乙腈100 mg、三氯乙腈1000 mg，精密称定，置已盛有适量甲醇的10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

供试品溶液：直接进样。

2.2 色谱条件

色谱柱为AgiLentDB-624毛细管柱(30 m×0.53 mm×3.0 μm)；检测器为氢火焰离子化检测器(FID)；柱温为初温80 ℃保持5 min，10 ℃/min升温到200 ℃后保持20 min；进样口温度为60 ℃；检测器温度为250 ℃；氮气流量为30 mL/min；氢气流量为30 mL/min；空气流量为300 mL/min。

2.3 专属性试验

分别取空白溶剂、混合对照溶液、各单标溶液、供试品溶液各1 μL直接进样测定，记录色谱图，计算各组分峰的分离度R，结果见表1和图1。表1和图1表明，空白溶剂无干扰，最小分离度R=18.71，各组分均达到基线分离。

表1 混合样品气相色谱图信息

图1 混合样品气相色谱图

2.4 线性关系考察

精密称取乙腈对照品5.0129 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为乙腈对照品贮备液；精密称取一氯乙腈对照品5.0151 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为一氯乙腈对照品贮备液；精密称取二氯乙腈对照品4.9931 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为二氯乙腈贮备液。

分别精密量取贮备液1、3、5、8、10 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1 μL，注入气相色谱仪，记录色谱图。以各杂质对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程(图2)。乙腈线性方程为A=8217C+842.79(r=0.9997)，在2.01～20.05 mg/mL范围内线性关系良好；一氯乙腈线性方程为A=6373.7C-1008.6(r=0.9999)，在2.01～20.06 mg/mL范围内线性关系良好；二氯乙腈线性方程为A=4760.1C-119.49(r=0.9999)在2.00～19.97 mg/mL范围内线性关系良好。

图2 标准曲线图

2.5 精密度试验

取线性关系考察项下各对照品溶液，精密量取1 μL，注入气相色谱仪，测定峰面积，重复进样6次，结果见表2。表2表明精密度良好。

表2 精密度试验结果

2.6 重复性试验

取同批号三氯乙腈供试品6份，精密量取1 μL直接进样，分别注入气相色谱图中，记录色谱图，采用面积归一化法计算，实验结果见表3。表3表明重复性良好。

表3 重复性试验结果

2.7 耐用性试验

参照中国药典要求，在不同的色谱条件下取三氯乙腈1 μL，注入气相色谱仪，记录色谱图。以分离度为主要考察指标，考察方法的耐用性。结果见表4，当柱温、流速等进行微小调整时，主峰与前后杂质分离度均满足分析要求，说明本方法耐用性较好。

表4 耐用性试验结果

2.8 样品测定

取三氯乙腈供试品，精密量取1 μL，直接进样，记录色谱图，以面积归一化法计算，结果见表5。 表5表明此方法测定的三氯乙腈有关物质结果符合规定。

表5 样品测定结果

3 结 论

通过方法学考察实验结果表明，采用气相色谱法测定三氯乙腈有关物质，在选定的色谱条件下测定，三氯乙腈各杂质间能够完全分离，空白溶剂无干扰，各组分均达到基线分离。

选定的气相色谱条件能够有效检出杂质，乙腈、一氯乙腈、二氯乙腈在一定浓度范围内线性关系良好，仪器精密度良好，样品的重复性良好。在该方法的耐用性实验考察中，对柱温、流速等进行微小调整后，主峰与前后杂质分离度均能够满足分析要求，表明该方法耐用性较好。采用建立的测定方法对三氯乙腈样品中的有关物质进行了测定，结果各杂质含量均在限度范围内，符合规定。

本文建立的三氯乙腈中有关物质的含量测定方法切实可行，操作简单、专属性强、分离度好、准确度高，可为建立三氯乙腈中有关物质的限量标准，从而控制合成终产品药物的质量提供一定的依据。

[1] 金祥飞,沈卫阳,党柱.药物中有关物质的色谱分析研究近况[J]. 药学进展, 2009, 33(12):542-548.

[2] 孙勇.三氯乙腈的合成、应用与市场[J].中国氯碱,2007(10):103-104.

[3] 张义.气相色谱法及其在药物分析中的应用[J].河北化工,2012,35(8):85-88.

[4] 张红印,马丽卿.气相色谱法与液相色谱法的比较及应用[J].肉类工业,2000(10):38-39.

[5] 李娜.色谱质谱技术在化学药物杂质研究中的应用[D]. 上海:第二军医大学,2014.

[6] 李海青,蔡烨.气相色谱-质谱法测定饮用水中消毒副产物卤代腈[J].环境监测管理与技术, 2014, 26(5):37-39.

[7] 周洪柱,崔云彪.气相色谱法测定乙腈废水中乙腈含量[J].云南化工,2005,32(5):42-43.

[8] 陈安群,何咏梅,罗延谷.气相色谱法测定反应液中氯乙腈含量[J].现代农药,2011, 10(1):33-35.

Determination for Related Substances of Trichloroacetonitrile by Gas Chromatography

DAIGen-lai1,LUYU-ming1,SHILing-li2

(1 Hefei Jiunuo Medicine & Technology Co.,Ltd., Anhui Hefei 230031; 2 College of Pharmacy,Anhui Xinhua University, Anhui Hefei 230088, China)

A determination method for related substances of trichloroacetonitrile by Gas Chromatography was established. The related substances were determined on the GC instrument with a FID detector using a AgilentDB-624 column(30 m×0.53 mm×3.0 μm)，programmed temperature, the temperature of injection port was 160 ℃，the temperature of FID detector was 250 ℃，the carry gases was nitrogen. Through the specificity test, linear relationship, precision test, reproducibility test and serviceability test, results showed that the method was simple, sensitive and accurate. It can be used for determination of trichloroacetonitrile and its related substances.

trichloroacetonitrile; related substances; gas chromatography

戴根来(1974-)，男，理学学士，主管中药师，主要研究方向为药物新制剂及质量研究。

R917

A

1001-9677(2016)022-0092-03