Beclin 1、p53蛋白在宫颈组织中的表达意义

张欣宁，吴海燕，姚书忠

(1.清远市人民医院妇科，广东 清远 511500；2.中山大学附属第一医院妇科，广东 广州 510080)



·论著与研究·

Beclin 1、p53蛋白在宫颈组织中的表达意义

张欣宁1，吴海燕1，姚书忠2

(1.清远市人民医院妇科，广东 清远 511500；2.中山大学附属第一医院妇科，广东 广州 510080)

目的：检测自噬基因Beclin 1以及凋亡抑制基因p53在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达，探讨两者之间及其与宫颈癌临床病理参数的关系。方法：采用免疫组化法检测正常子宫颈标本20例，各级CIN病变各30例，子宫颈鳞癌90例。结果：(1)从正常宫颈，CINⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级到宫颈癌组织，Beclin 1蛋白的阳性表达率分别呈递减趋势，与疾病的进展呈负相关；p53蛋白的阳性表达率呈递增趋势，与疾病的进展呈正相关。(2)在宫颈癌组织各组别的比较中，Beclin 1、p53表达程度均与年龄、FIGO分期、肿瘤大小无关(P>0.05)，与肿瘤的分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。(3)在宫颈癌组织中，Beclin 1与p53的表达呈负相关(P<0.01)。结论：Beclin 1和p53的表达水平与宫颈癌发展密切相关，二者联合检测可以为宫颈癌的早期诊断、评估恶性程度和预后提供参考；宫颈癌中细胞自噬受到抑制，这一现象有望为宫颈癌的诊治提供新途径。

宫颈正常组织；CINⅠ；CINⅡ；CINⅢ；Beclin 1；p53

子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，虽然近年来宫颈癌的治疗取得巨大进展，但晚期患者5年存活率仍仅为50%左右[1]。目前，除了已明确高危型HPV感染是宫颈癌发生的主要危险因素之外[2]，对宫颈癌的发生过程仍不完全清楚。所以，我们需要进一步探究宫颈癌的发生、发展过程，研发宫颈癌特异性的肿瘤标志物，为防治宫颈癌提供新的途径。

Beclin 1是近年新克隆的哺乳动物的自噬调控基因，作为候选的肿瘤抑制基因而成为近年来的研究热点[1]。Beclin 1基因的缺失性突变可导致自发性肿瘤的发生率提高，研究其在宫颈癌中的表达，将有助于探索通过调控自噬的表达来干预宫颈癌的发生。p53基因是第一个被证实的凋亡抑制基因，在细胞凋亡过程中起着至关重要的作用[3]。目前关于Beclin 1和p53在宫颈癌中的研究已经分别有报道，但两个指标同时进行检测并研究其相关性的报道未见。因此，本研究采用免疫组织化学方法同时检测正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变组织以及子宫颈鳞癌(squamous cervical cancer， SCC)中的Beclin 1和p53蛋白的表达情况，探讨两者之间及其与宫颈癌临床病理参数的关系，以期进一步揭示宫颈癌变的发展过程，为宫颈癌的诊治提供新的途径。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集清远市人民医院病理科于2010年1月至2014年7月的宫颈石蜡包埋组织200例，包括因子宫肌瘤行子宫切除的正常子宫颈标本(NCT)20 例，宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级各30例，子宫颈鳞癌90例(高分化41例，中低分化49例)，其中Ⅰ级40例，Ⅱa级50例，37例有盆腔淋巴结转移，

患者年龄 30～70岁，所有患者取标本前均未接受放、化疗及免疫治疗。所有的组织标本均由2名高年资病理医师诊断。

1.2 免疫组化结果判定 Beclin 1阳性染色主要表达在细胞膜或质内，出现棕黄色颗粒为表达阳性。p53蛋白以细胞核出现棕黄色显色为表达阳性。每张病理切片通过光学显微镜放大400倍，随机选取5个视野进行阳性细胞结果判定。分别对阳性细胞数所占比例以及染色强度进行评分， 分别按照着色强度计分(0分：不着色；1分：淡黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色)和阳性细胞占细胞总数百分比(0分：<5%；1分：5%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%：4分：>75%)的标准得分，两部分的得分之和为最后的得分：0～1分为阴性，2～3分为阳性，4分以上为强阳性。

1.3 统计学分析 全部数据资料用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。Beclin 1与p53在不同分组中表达的差异计算使用χ2检验，表达水平的相关性采用Spearman相关性分析。

2 结 果

2.1 Beclin 1和p53在宫颈不同组织中的表达情况 结果详见表1。

表1 Beclin 1和p53在宫颈不同组织中的表达

注：1)与SCC比较P<0.01；2) 与SCC组比较P<0.05。5组间同时比较P<0.01

在正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌中，Beclin 1的阳性表达分别为85.0%、80.0%、70.0%、63.3%、45.5%，阳性表达率逐渐下降，与宫颈病变程度呈负相关(Rs=-0.392，P<0.01)。宫颈正常组织、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ与宫颈鳞癌相比有显著性差异(P<0.05或P<0.01)，宫颈正常组织与CIN各级别组织之间两两比较无显著性差异(P>0.05)。p53在正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为5.0%、40.0%、66.7%、73.3%、86.7%，阳性表达率逐渐下降，与宫颈病变程度呈正相关(Rs=0.405，P<0.01)。宫颈正常组织、CINⅠ、CINⅡ与宫颈癌相比有显著性差异(P<0.01)，宫颈正常组织与CIN各级别组织两两比较均有显著性差异(P<0.01)。

2.2 Beclin 1、p53的表达与宫颈鳞癌临床病理因素的关系 结果详见表2。

统计分析显示：Beclin 1蛋白的表达与年龄、宫颈癌临床分期(FIGO)、肌层浸润深度、肿瘤大小均无显著性相关(P>0.05)，与肿瘤分化程度、是否合并淋巴结转移相关(P<0.01)。Beclin 1蛋白在高分化的宫颈癌组织中的表达高于中低分化者(P<0.01)，Beclin 1在无淋巴结转移的宫颈癌组织中的表达高于有淋巴结转移者(P<0.01)，而p53蛋白的表达与此相反(P<0.01)。

2.3 Beclin 1与p53在早期宫颈鳞状细胞癌组织中表达的相关性 运用Spearman相关性分析，对上述Beclin 1与p53在90例早期宫颈鳞癌的免疫组化评分进行相关性分析显示：SCC组织中Beclin 1蛋白的表达与p53蛋白的表达呈负相关(r=-0.429，P<0.01)。

表2 p53、Beclin 1的表达与宫颈鳞癌临床病理因素的关系

注：1)与对照组比较P<0.05

3 讨 论

3.1 Beclin 1蛋白在宫颈不同病变组织中的表达及意义 Beclin 1蛋白具有调节细胞分化、存活和生长的作用。以往的研究提示，Beclin 1蛋白与肺癌、胃癌和肝癌等恶性肿瘤的发生密切相关[4]。在本研究中可以发现，在宫颈正常组织、各级CIN组织及宫颈癌组织中，Beclin 1表达的阳性率逐渐下降，在宫颈浸润癌中的表达以阴性和弱阳性为主，提示宫颈癌中存在Beclin 1蛋白的表达缺失和下调(阴性和弱阳性表达)。另外，在宫颈各级CIN组中，虽然Beclin 1的表达出现下调趋势(平均阳性率71.1%)，但与正常宫颈组(85.0%)比较无显著性差异(P>0.05)。而各级CIN组与宫颈癌组相比较，均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。据此，我们可以推测，Beclin 1表达下调多发生在CIN向浸润癌发展的过程中，在宫颈癌的发生中起着一定的作用。

在以往的临床研究中发现，临床分级不同、病理学分级高低以及是否存在淋巴结转移等因素均可预示宫颈癌恶性侵袭程度以及预后。分级越晚，分化越差，其侵袭与转移能力越强，预后越差。本研究发现Beclin 1蛋白的表达阳性率与宫颈癌的临床分级、病理类型以及宫颈肌层浸润深度、肿瘤大小等无相关性(P>0.05)，而与是否存在淋巴结转移及组织分化程度相关。在宫颈高中分化组Beclin 1的表达较低分化组高(P<0.01)，表明肿瘤细胞分化越差，恶性程度越高，自噬能力也逐渐减弱，提示Beclin 1表达下调可能与宫颈癌的发生、发展相关。

3.2 p53在宫颈不同病变组织中的表达及意义 p53是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的肿瘤抑制蛋白，在多种恶性肿瘤中有异常表达。正常状态下， p53可调节凋亡通路中多个关键因子调控凋亡，而缺失p53的肿瘤细胞DNA损伤后不再发生凋亡，导致恶性肿瘤的发生[5-7]。本试验的研究结果可看出，宫颈正常组织、宫颈各级别CIN组织及宫颈癌组织中，p53表达的总阳性率分别为5.0%、40.0%、66.7%、73.3%、86.7%。随着宫颈病变程度的加重，p53表达阳性率上升。p53蛋白在宫颈癌组织中的表达比宫颈正常组织及CIN各级组织中的表达高，说明野生型p53蛋白的突变对宫颈癌细胞的凋亡作用减弱或消失，从而导致癌细胞无限制生长，肿瘤细胞的过度增殖，导致肿瘤的发生，继而发生浸润及转移。

在许多恶性肿瘤的研究中发现，突变型p53的表达与肿瘤细胞的侵袭及淋巴转移高度相关[8]。在宫颈癌的研究中，对此类的报道不一致。在本研究中，p53蛋白表达的阳性率与年龄、分级无关，与肿瘤的分化程度及是否淋巴转移相关，分化越差，p53表达阳性率越高，合并淋巴转移比无淋巴转移者表达阳性率高(P<0.01)。这跟宫颈癌预后不良的高危因素相符。

3.3 Beclin 1和p53在宫颈癌组织中的关系 肿瘤分化差，早期即有淋巴转移是恶性肿瘤预后不良的征兆。本研究结果显示， 宫颈癌分化差及合并淋巴结转移者的p53蛋白表达率显著高于分化好及无淋巴结转移者(P<0.01)。而Beclin 1蛋白的表达与之相反。该结果提示， 伴随侵袭力的增加， 宫颈癌组织细胞中p53蛋白表达率进一步升高，Beclin 1表达率进一步降低。说明宫颈癌患者肿瘤组织 Beclin 1蛋白和p53蛋白，不仅和肿瘤的发生关系密切，而且和肿瘤转移也十分密切，两者可能共同参与了宫颈鳞癌的发生、发展过程。对相关性分析结果显示，宫颈癌组织中Beclin 1蛋白的表达与p53蛋白的表达呈负相关 (r=-0.429，P<0.01)。Beclin 1和p53的相关性进一步说明了宫颈癌的发生、发展是一个多因素共同作用的过程，自噬减弱和抗凋亡增强在此过程中共同存在，宫颈癌的转移与癌组织中p53的过表达及Beclin 1表达缺失是分不开的。二者联合检测可作为早期评估肿瘤转移和侵袭力及判断预后的指标。

总之，在宫颈癌组织中Beclin 1和p53表达异常，二者联合检测可以为肿瘤的早期诊断、评估恶性程度和预后提供参考。目前，调控凋亡的基因治疗已引入宫颈癌的治疗中并取得一定疗效，将来随着研究的不断深入，将自噬性细胞死亡引入宫颈癌治疗，在加强凋亡诱导的同时诱导自噬或许会成为治疗的新靶点。

[1]王赞宏.自噬基因Beclin 1与宫颈癌相关性的实验研究[D].成都：四川大学，2007：1-113.

[2]王颖.宫颈癌发病相关因素的研究分析[J].实用预防医学，2014，21(3)：345-347.

[3]LEE J J， KIM S， YEOM Y I， et al. Enhanced specificity of the p53 family proteins-based adenoviral gene therapy in uterine cervical cancer cells with E2F1-responsive promoters[J]. Cancer Biol Ther， 2006， 5(11)： 1502-1510.

[4]QIU D M， WANG G L， CHEN L， et al. The expression of Beclin 1， an autophagic gene， in hepatocellular carcinoma associated with clinical pathological and prognostic significance[J]. BMC Cancer， 2014， 14(1)： 1-13.

[5]LIVESEY K M， KANG R， VERNON P， et al. p53/HMGB1 complexes regulate autophagy and apoptosis[J]. Cancer Res， 2012， 72(8)： 1996-2005.

[6]DONG X X， WANG Y R， QIN S， et al. p53 mediates autophagy activation and mitochondria dysfunction in kainic acid-induced excitotoxicity in primary striatal neurons[J]. Neuroscience， 2012， 207(207)： 52-64.

[7]LEE C C，YAMAMOTO S， WANIBUCHI H， et al. Cyclin D1 overexpression in rat two-stage bladder carcinogenesis and its relationship with oncogenes， tumor suppressor genes， and cell proliferation[J]. Cancer Res， 1997， 57(21)： 4765-4776.

[8]刘福虹.缺氧诱导因子-1α、VEGF、P53在宫颈癌组织中的表达及其与微血管密度的关系[D].石家庄：河北医科大学，2007.

Expression and Clinical Significance of Beclin 1 and p53 Proteins in Squamous Cervical Cancer

ZHANG Xinning1， WU Haiyan1， YAO Shuzhong2

(1.Department of Gynaecology，Qingyuan People's Hospital，Qingyuan， Guangdong 511500，China；2.Department of Gynaecology， First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University， Guangzhou， Guangdong 510080，China)

Objective: To detect the protein expression of Beclin 1 and p53 gene in normal cervical tissue(NCT)，cervical intraepithelial neoplasia(CIN)and squamous cervical cancer(SCC) tissues， and explore the correlation between the two proteins and their correlations with clinical pathological parameters of cervical cancer. Methods: 20 cases of NCT， 30 cases of CIN at various degrees and 30 cases of SCC were detected by immunohistochemistry method. Results: (1)The positive expression rate of Beclin 1 protein showed a gradually downward trend from NCT， CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ to SCC， which was negatively correlated with the progression of cervical cancer； on the contrary， the positive expression rate of p53 protein showed an upward trend， which was positively correlated with the progression of this cancer. (2)Beclin 1 and p53 expression levels had significant correlations with differentiation grade and lymph node metastasis(P<0.05) while no correlations were found with the age， FIGO stage， tumor size(P>0.05). (3) The chi-square test revealed an inverse correlation between Beclin 1 and p53 expression in SCC tissue (P<0.01). Conclusion: The expression levels of Beclin 1 and p53 are closely related to the progression of cervical cancer； combined detection can provide a reference for early diagnosis， the evaluation of malignant degree and prognosis； the cell autophagy activity in cervical cancer is down-regulated，which may contributes to the development of novel options for its diagnosis and therapy.

normal cervical tissue； CINⅠ； CINⅡ；CINⅢ；Beclin 1；p53

清远市科技局项目(2015B044)

姚书忠，yszlfy@163.com

R737.33

A

10.11851/j.issn.1673-1557.2016.06.004

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1688.R.20161111.1011.002.html

2016-04-07)