龙葵超声波乙醇提取物抑菌作用研究

姜雪琪，张卫东

(佳木斯大学生命科学学院，黑龙江佳木斯 154007)



龙葵超声波乙醇提取物抑菌作用研究

姜雪琪，张卫东*

(佳木斯大学生命科学学院，黑龙江佳木斯 154007)

[目的]研究龙葵乙醇提取物的抑菌作用。[方法]以天然植物龙葵为原料，采用超声辅助乙醇提取龙葵生物活性成分，将提取物配置成50、100、150、200 mg/mL 4种不同浓度的溶液，利用滤纸琼脂扩散法研究不同浓度龙葵生物成分对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌3种菌种生长的影响。[结果]一定浓度的龙葵乙醇提取液对3种菌种均有抑制作用，且随着龙葵提取液质量浓度的增加，3种菌种的抑菌效果越显著，其中对金黄色葡萄球菌抑制效果最明显。[结论]龙葵提取液具有一定的抑菌作用，且抑菌效果随着龙葵提取液浓度的增加而增强。

龙葵；乙醇；菌种；抑菌

龙葵(SolanumnigrumL.)为茄科Solanaceace属，一年至多年生草本野生植物，在全国各地均有分布。龙葵的生物成分主要是龙葵碱[1]。龙葵性寒，味苦、微甘，有小毒，归肺、胃、膀胱经，主治疮痈肿毒、皮肤湿疹、尿路感染、慢性支气管炎、类风湿性关节炎和前列腺炎等疾病，全草可入药，有抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗菌、解热镇痛等药理作用[2-4]。传统的龙葵生物碱提取方法有水或酸水法、醇类溶剂提取法、沉淀法、亲脂性有机溶剂提取法等。用水或酸水提取法，提取液体积较大，浓缩困难[5]。沉淀法操作繁琐，成本高，且得到纯品较难。亲脂性有机溶剂提取法适合于提取脂溶性生物碱，适用范围比较窄。由于大多数生物碱均能溶于甲醇或乙醇，可采用醇类溶剂提取法，乙醇为最常用的溶剂提取[6]。随着科技的发展，近几年出现的一些新的技术，如超声场强化、超临界流体萃取，已应用于中药有效成分的提取过程中[7]。有研究表明，应用这些新技术提取中药龙葵有效成分的方法具有产率高、纯度高、提取速度快等优点，有广阔的应用前景[8]。该试验利用超声波对龙葵乙醇提取法获取龙葵的生物碱粗提物，研究不同浓度龙葵粗提溶液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌生长的影响，探讨龙葵粗提的抑菌作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料 龙葵购自佳木斯中医院药局，菌种来自佳木斯大学微生物实验室。

1.2 试验方法

1.2.1 龙葵提取液的提取和灭菌。磨碎的龙葵粉末放入90%酒精溶液中浸泡，12 h后施加超声波进行提取，60 ℃情况下提取30 min，对提取液进行蒸馏得到白色物质，将得到的白色物质封口放入高压灭菌锅中进行灭菌，灭菌后的龙葵生物粗提放在室温中进行保存。

1.2.2 培养基的制备。常规MS培养基，pH 5.8，121.3 ℃下，灭菌20 min，37 ℃培养箱放置1 d后确定无菌后再使用。

1.2.3 菌种活化。菌种转接至试管活化，培养3～5 d后冰箱保藏。

1.2.4 提取物和菌种的共培养。将滤纸剪成0.5 cm直径的圆纸片，将滤纸片放入盛有龙葵粗提物的烧杯中进行浸泡，高压灭菌后，无菌放置在划线接菌后的培养基中，在37 ℃的培养箱中进行培养，培养时间3 d。然后取出观察测量滤纸片周围的抑菌圈大小。

1.2.5 枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对龙葵乙醇提取物的敏感性测试。采用琼脂扩散纸片法[9]测定抑菌圈直径。通过测定抑菌圈直径检测枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对龙葵乙醇提取物的敏感性。体外抑菌定性结果的判定标准[10]：抑菌圈直径<10 mm，表示不敏感；抑菌圈直径为10～15 mm，表示中度敏感；抑菌圈直径为16～20 mm，表示高度敏感。

2 结果与分析

从表1可知，一定浓度的龙葵提取液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用，随着龙葵提取液质量浓度的增加，3种菌种的抑菌圈直径呈增大趋势，当龙葵提取液浓度≤150 mg/mL时，枯草芽孢杆菌对其表现为不敏感，浓度≥200 mg/mL时，对其表现为中度敏感；当龙葵提取液≤100 mg/mL时，大肠杆菌对其表现为不敏感，浓度≥150 mg/mL时，对其表现为中度敏感；当龙葵提取液≤50 mg/mL时，金黄色葡萄球菌对其表现为不敏感，浓度为100～150 mg/mL时，对其表现为中度敏感，浓度≥200 mg/mL时，对其表现为高度敏感。通过对龙葵提取液不同浓度产生的提取液进行差异显著性分析，发现不同浓度的龙葵提取液产生的抑菌圈直径之间差异显著。

表1 枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对龙葵乙醇提取物的敏感性测试

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。“-”表示不敏感，“+”表示中度敏感，“++”表示高度敏感。

Note：Different lowercases in the same column stand for significant difference(P<0.05).- stands for insensitivity，+ indicates medium sensitivity，++ indicates high sensitivity.

3 小结与讨论

试验结果显示，不同浓度的龙葵提取液产生的抑菌圈之间差异显著，表明一定浓度的龙葵乙醇提取液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用，且随着龙葵提取液质量浓度的增加，3种菌种的抑菌效果越显著，其中，龙葵乙醇提取液对金黄色葡萄球菌的抑制效果最明显。

试验采用的龙葵提取物为粗提物，目前对龙葵抑菌活性成分的分析及其抑菌活性成分之间的相互作用效应的研究较少，日后可对龙葵活性成分进一步分离纯化及对其抑菌活性成分的结构进行解析，也可将龙葵与其他中草药混合再测试其抑菌效果，对临床应用提供更准确的依据。此次试验还应用了索氏提取法对龙葵进行粗提取，但由于试验条件的限制导致对龙葵生物成分的提取率非常低，超声波提取法的提取率非常高，所以舍弃了索氏提取法改用超声波提取法进行试验。

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[2] 徐东花，于春月，韩成花.龙葵的化学成分及其药理作用研究[J].黑龙江中医药，2007，50(2)：46.

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Study on Antibacterial Effect of Ultrasonic Ethanol Extracts ofSolanumnigrum

JIANG Xue-qi, ZHANG Wei-dong*

(School of Life Science, Jiamusi University, Jiamusi, Heilongjiang 154007)

[Objective] The aim was to study antibacterial effect of ethanol extracts ofSolanumnigrum. [Method]With natural plantSolanumnigrumL. as raw material, by ultrasonic assisted ethanol extraction of bioactive constituents inSolanumnigrum, then configured to 50, 100, 150, 200 mg/mL 4 different concentrations of solution, using filter paper agar diffusion method to study effects of different concentrations ofSolanumnigrumbiological components onBacillussubtilis,EscherichiacoliandStaphylococcusaureusgrowth.[Result] The results indicated that a certain concentration ofSolanumnigrumethanol extracts had inhibitory effects on three bacteria. With the increasing concentration ofSolanumnigrumethanol extracts, the antibacterial effects were more obvious, especially onStaphylococcusaureus. [Conclusion]Solanumnigrumextract has certain antibacterial effects, and the inhibitory effect increased with increasing concentration of the extracts.

Solanumnigrum; Ethanol; Bacteria; Antibacterial

姜雪琪(1990-)，女，黑龙江佳木斯人，硕士研究生，研究方向：植物进化生态学。*通讯作者，副教授，硕士，硕士生导师，从事植物进化生态学研究。

2016-09-02

S 58

A

0517-6611(2016)31-0125-01