鸡新城疫抗体检测技术在诊断中的应用

王彩霞



鸡新城疫抗体检测技术在诊断中的应用

王彩霞

（山东畜牧兽医职业学院 山东潍坊 261061）

近几年在生产实践中存在鸡非典型新城疫及新城疫强毒株感染的和在免疫过程中的一些问题，是鸡群发生了新城疫的一个主要原因，如果鸡群新城疫抗体水平很低，就会引起典型的新城疫；如果鸡群新城疫抗体水平不均匀，就会引起非典型的新城疫抗体检测技术在诊断中的应用，具有诊断和预防意义.

1 发病情况

2015年2月，山东潍坊某鸡场的鸡突然发病，发病率90%，死亡1500只左右，主要的临床症状表现为：体温升高，呼吸困难，下痢，排黄白色、黄绿色甚至绿色稀便；嗉囊积液，倒提病鸡从口角流出酸臭液体；有的表现神经症状，两腿麻痹，不能站立。

2 剖检变化

喉头、气管出血，十二指肠、小肠前段及小肠近盲肠基部呈点状或斑块状出血，严重的出现溃疡，腺胃乳头、腺胃和肌胃交界处、肌胃角质层下出血；盲肠扁桃体出血、肿胀、溃疡，心冠脂肪及心外膜点状出血，脾脏肿大有白色坏死点，肝、肺、肾基本正常，无肉眼可见的明显变化。

3 实验室诊断

3.1 细菌涂片和分离培养 取病死鸡肝脏、脾脏及脑组织分别作组织触片，美兰染色和革兰氏染色镜检，没有发现任何细菌；取上述病料分别接种普通琼脂平板、SS琼脂平板和血清琼脂平板，37℃培养24h，结果无细菌生长。

3.2 病毒分离 无菌取刚死亡的鸡脑及脾脏，减碎、研磨后冻融2次，然后用每ml含青霉素、链霉素各1000IU的无菌生理盐水1:5稀释，4000r/min离心15min，取上清液，置4℃冰箱作用4~12h，备用[1][2]。（1）鸡胚接种：将双抗处理的病料上清液通过尿囊腔接种30枚11日龄的SPF鸡胚，每胚0.2ml，石蜡封孔后继续孵化，弃去24h内死亡的鸡胚，以后每2~4h照蛋一次，并将死亡鸡胚置4℃冰箱冷藏备用。（2）病毒的鉴定：①病毒的血凝试验(HA)：取鸡胚接种分离的尿囊液作血凝试验，以微量法在血凝板作2-11倍比稀释，并设生理盐水对照孔，然后向每孔加1%鸡的红细胞，振荡混匀，20~25℃作用40min后观察结果，生理盐水对照孔的红细胞成明显的钮扣状沉到孔底时判定结果.病毒若有凝集性，说明导致鸡发病死亡的病原体具有血凝性。②抗NDV阳性血清血凝抑制试验。③讨论：结果中，前4孔仍出现凝集，是由于ND阳性血清效价较低，而病毒浓度较高，从第5孔开始病毒凝集红细胞的作用完全被ND阳性血清所抑制，从病死鸡脑、脾分离到的病毒，具有凝集红细胞的特性，并且能被ND阳性血清所抑制，说明分离到的病毒与NDV有很大的相关性[3]。

附表 抗NDV阳性血清血凝抑制试验(HI) (µl)

孔号123456789101112 生理盐水252525252525252525252550 尿囊液2525252525252525252525 ND阳性血清252525252525252525252525 1%鸡红细胞252525252525252525252525 结果﹢﹢﹢﹢﹣﹣﹣﹣﹣﹣﹣﹣

注：轻叩反应板，20-25℃作用不少于30min。20~25℃作用40min后观察结果，生理盐水对照孔的红细胞成明显的钮扣状沉到孔底时判定结果。﹢凝集，﹣不凝集。

3.3 抗体检测 到鸡场按5%采样30只，进行ND抗体检测，抗体水平30只鸡有27只超过11log2，发现抗体异常升高，结合临床症状和剖检变化，说明可能感染强毒，可诊断该鸡群已经感染ND强毒。

4 发生非典型ND的紧急措施

（1）深埋或焚烧病死鸡，淘汰病重鸡，隔离有症状的鸡，对病死鸡污染的环境进行彻底消毒。（2）对未发病的鸡群进行紧急接种 可采用倍量Clone-30疫苗紧急接种，或用倍量IV系疫苗滴鼻点眼，同时肌肉可皮下注射油乳剂灭活苗，还中口服大剂量(5倍量)V4弱毒疫苗进行紧急预防。一般不宜采用大剂量中等毒力的I系疫苗作紧急预防，因其接种后易产生较大的应激反应，影响鸡的产蛋率，并且鸡群恢复时间较长，死亡率相对较高。（3）患病鸡不宜进行接种，可以使用抗ND卵黄液和抗血清进行治疗，为防止继发感染细菌病，可在饲料和饮水中适量添加抗菌类药物。

5 应用

无条件开展ND抗体监测的鸡场，提高免疫接种密度和质量，使鸡具有稳定持久的高滴度的中和抗体和循环抗体，可选用以下免疫程序：7~10日龄采用NDII系或IV系滴鼻点眼首免，20~25日龄用II系疫苗进行第2次滴鼻点眼，同时皮下或肌肉注射ND油乳剂灭活苗0.3ml/只，60日龄左右进行1次弱毒或联苗注射，120日龄进行油苗或联苗注射，种鸡在300~350日龄再进行1次油苗接种。

5.1 确定雏鸡首免日龄 在母源抗体消失或接近消失时进行首免，可获得理想的免疫效果。一般在雏鸡出壳1日龄时采血，检查雏鸡的HI效价。在大型高密度鸡场抽样率不低于0.1%，鸡群越小，抽样率应随之增加，理想的抽样率为2%。求出HI抗体效价均值，然后将效价均值带入公式推算适宜的首免日龄：适宜的首免日龄＝4.5(1日龄HI抗体效价均值-4)+5。例如某批雏鸡1日龄HI抗体效价均值为6log2，则该批雏鸡的首免日龄=4.5(6-4)+5= 14(日龄)。

5.2 首免后定期抽检，适时强化免疫 首免后10d采血抽检，当HI抗体效价均值降至4log2或以下时进行二免。二免后15d再采血抽检，如抗体效价在5log2以下时，应进行第2次免疫接种。以后，鸡的HI效价应保持在5log2以上，同日龄的种鸡应比其他鸡高一个滴度。如低于此标准，应立即进行免疫接种，只有HI抗体效价均值上升2log2以上方可认为该次免疫成功，否则应进行补免。

[1] 徐为燕. 兽医病毒学[M]. 北京: 中国农业出版社, 1993. 219-221.

[2] 陆承平. 兽医微生物学(第3版)[M]. 北京: 中国农业出版社, 2001-523.

[3] 严维巍, 王永坤, 周继宏等. 鹅副粘病毒的分类地位初探[J]. 中国兽医科技, 2000, 30(12).

（2016–05–19）

S851.33

C

1007-1733(2016)09-0052-02