饲料添加剂对幼犬睾丸功能相关酶活性的影响研究

王卫杰,李　惠,王　乐，徐　丹

（开封市医学科学研究所，河南 开封 475000）

饲料添加剂对幼犬睾丸功能相关酶活性的影响研究

王卫杰*,李惠,王乐，徐丹

（开封市医学科学研究所，河南 开封 475000）

观察饲料添加剂的蓄积对雄性幼犬生殖发育的影响。选用12只1月龄土犬，随机分为试验组和对照组，试验组幼犬饲喂正常剂量日粮和高剂量组大鼠鼠肉，正常对照组幼犬饲喂正常剂量日粮和大鼠鼠肉，喂至幼犬成熟，检测雄性幼犬食用饲料添加剂高剂量组大鼠鼠肉后对其生长、生殖发育产生影响。检测幼犬睾丸标志酶活性，结果显示：试验组幼犬睾丸组织中酸性磷酸酶ACP和乳酸脱氢酶LDH的酶活性下降，碱性磷酸酶AKP活性未发生变化。试验组的酸性磷酸酶和乳酸脱氢酶活性明显下降，差异有统计学意义。推测饲料添加剂可能通过食物链的蓄积影响雄性幼犬的睾丸标志酶活性，从而影响雄性幼犬睾丸组织的正常生理功能，进一步影响幼犬的生殖功能。

饲料添加剂；犬；睾丸标志酶；蓄积

近年来滥用饲料添加剂的危害越来越受到人们的重视。随着人民生活水平的提高和经济全球化，人们对畜禽产品的品质和安全要求越来越高，高质量的畜产品需要有高效安全的饲料作保障，饲料安全已成为动物食品安全的重要环节和源头［1］。饲料添加剂的不当或超量使用会对动物产生危害作用，而其在动物产品中的残留以及蓄积进一步对人的健康和环境产生不良影响。随着人民生活水平的不断提高，人们对于食品的安全问题愈加关注，尤其是动物性食品安全问题。动物饲料是食品中有毒有害物质残留的一个重要来源，饲料添加剂通过畜禽产品带给人类的隐患将是难以估量的［2-4］。

该试验通过研究食用饲料添加剂的大鼠鼠肉是否对雄性幼犬的生殖系统及发育产生影响，通过模拟人类食物链试验，进一步为动物饲料添加剂的蓄积对人类生殖系统的影响提供初步试验依据，从而推测动物饲料添加剂对生殖发育的影响。

1　材料与方法

1.1试验动物

SD雄性大鼠：河南省试验动物中心购买的26日龄SD雄性大鼠，体质量为（85.0±4.5）g。实验室控制温度为22～24℃，空气相对湿度50%～65%，自然采光，自由饮水，环境安静。试验用犬的选择是3只公犬，10只母犬，均通过农村收购，体质量为3.5～4.5kg。3只公犬和10只母犬交配，对照组和试验组均为6只，从交配所生的10窝中选取6窝，每窝选取2只体质量相近、发育良好的幼犬。

1.2饲料添加剂

市售4%仔猪用复合预混料配方见表1。

1.3试验设计

试验动物均为体质量相近，年龄相近的幼犬12只。随机分为试验组及对照组，每组6只，试验组从2月龄开始喂养大鼠鼠肉。幼犬每日肉类：0.262×57.3%=0.15kg，试验大鼠平均重量300.0g，大约需要0.5只；以后每月增加0.5只；对照组饲喂正常犬日粮和正常大鼠鼠肉，试验组饲喂高剂量组大鼠鼠肉和正常犬日粮，饲喂期为10个月。

表1　复合预混料配方

1.4饲养管理

所有试验犬全部饲养于同一动物舍，单笼饲养，定期冲洗及消毒。预试期对试验犬驱虫、注射疫苗。采用群饲方式，每天上午8时和下午4时各饲喂1次。观察犬的生长发育、排便、采食等健康情况，并记录各组投料量与剩料量，做好数据统计工作。

1.4测定指标

1.4.1生长性能指标

体质量的称量：在2月龄开始每月第1周周一上午测量1次，连续测11个月。

1.4.2睾丸组织标志酶指标

试验结束后取双侧睾丸，用冰冷的生理盐水漂洗，制成1%的组织匀浆，酸性磷酸酶ACP、碱性磷酸酶AKP和乳酸脱氢酶LDH的活性测定操作按照试剂盒说明进行。

1.5统计学处理

用SPSS21.0作方差、x2检验等统计分析，结果以“平均值±标准误”表示。

2　结果与分析

2.1犬体质量测定结果（见表2）

表2　试验组犬体质量变化结果

由表2可知，试验组幼犬4个月龄开始其体质量明显增加，具有显著性差异（P＜0.01）；喂养不同天数后，试验组犬体质量与对照组相比明显升高，差异具有显著性（P＜0.01）。

2.2犬的睾丸组织标志酶指标结果

由表3可知，增加食用实验大鼠鼠肉的剂量，试验组睾丸组织标志酶的变化如下：试验组酸性磷酸酶ACP、乳酸脱氢酶LDH活性下降，试验组的碱性磷酸酶AKP活性未发生明显变化。与对照组相比，试验组的ACP、LDH活力明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.01）。

表3　试验中各组犬的睾丸组织标志酶指标结果

3　讨论

3.1雄性幼犬食用试验大鼠对其体质量的影响

饲料添加剂引起机体和器官组织的改变，往往在动物体质量上反映出来。因此动物体质量是机体改变的重要而敏感的指标之一。该试验结果显示，试验初始幼犬体质量没有出现显著差异，但试验组雄性幼犬食用大鼠鼠肉后，试验组幼犬体质量从4月龄开始逐渐增加，试验组体质量增加速度相比对照组较快。这表明饲料添加剂的二次蓄积能够促进雄性幼犬的生长。经过试验，饲料添加剂的残留或蓄积通过食物链显著提高了雄性幼犬的生长。

3.2雄性幼犬食用试验大鼠对其睾丸标志酶指标的影响

雄性生殖细胞在睾丸组织中的发育依赖于其生存的稳定内环境、激素以及相关酶类的调节。有研究表明，睾丸组织标志酶在精子发生与成熟过程中起重要作用，比如琥珀酸脱氢酶（SDH）、乳酸脱氢酶（LDH）、酸性磷酸酶（ACP）等。主要分布于生精细胞的线粒体内，是能量代谢的主要参与酶，精子的发生和成熟与SDH和LDH的活力大小密切相关［5-7］。

睾丸碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）和乳酸脱氢酶（LDH）是睾丸中的几种标志酶，其活性是睾丸机能正常与否的标志，也是维持精子发生不可缺少的重要条件。LDH主要存在于生精细胞胞质及精子尾中段线粒体上，催化丙酮酸转化为乳酸进行无氧代谢，其活性与精子生成、精子活动、获能及受精有关。笔者在试验中发现10月龄幼犬睾丸组织中LDH活性下降，说明睾丸组织细胞能量代谢作用受到影响，进而影响到精子质量；ACP由前列腺分泌，主要分布于睾丸支持细胞的溶酶体内，它参与精子代谢并有助于精子活力，其活性受雄激素调控，它在精液中的含量变化能反应前列腺的分泌功能并有助于前列腺疾病的诊断。ACP在性激素诱导下参与蛋白质的合成，其活性改变与上皮细胞的变性有关，可作为是否有生精障碍的指标；笔者的结果同样显示，试验组酸性磷酸酶活性随精子密度及活动率减低而下降。

该试验结果表明，雄性犬增加食用大鼠鼠肉的剂量，实验组睾丸组织中LDH、ACP活性随之下降。睾丸LDH参与能量代谢，该酶受到抑制，将阻碍能量的供给，造成精子活动度降低，良好精子比例下降。这与该研究关于饲料添加剂对犬精子及生殖器官发育的影响结果一致［8-9］。

4　结论

雄性幼犬食用实验大鼠瘦肉后睾丸组织中乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶活性下降，碱性磷酸酶活性未见明显变化。说明雄性幼犬食用实验大鼠后可干扰其部分睾丸标志酶的正常反应，引起生殖系统的损伤。

［1］唐黎标.饲料添加剂对畜产品安全的影响及对策［J］.江西饲料，2016，（1）：6-7.

［2］熊前.补饲微量元素对种公狗精液质量的影响［J］.黑龙江畜牧兽医（下半月），2013，（8）：104-105.

［3］周文.喹赛多在比格狗中的亚慢性毒性研究［D］.武汉：华中农业大学，2011.

［4］李忠玲，杜忍让，武和平，等.复合酶制剂对陕北绒山羊增重效果的研究［J］.畜牧兽医杂志，2014，33（6）：4-7.

［5］李红.不同浓度的谷氨酰胺对幼狗生长性能的影响［J］.中国饲料添加剂，2006，（7）：33-35.

［6］张磊.微量元素对种公牛精液品质的影响［D］．扬州大学硕士学位论文，2006．

［7］于文会.中药饲料添加剂对狗生长性能和生理生化指标的影响［J］.中兽医医药杂志，2008，27（4）：7-10.

［8］徐丹，沈澎，卢大雷，等.肥胖对青春期公犬精子发育的影响［J］.河南畜牧兽医，2014，7（35）：5-6.

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1004-5090（2016）10-0003-03

（2016-08-16）