免疫胶体金技术在猪旋毛虫病诊断中的应用研究

赵阿普

（云南省怒江傈僳族自治州动物卫生监督所，云南 怒江 673199）

免疫胶体金技术在猪旋毛虫病诊断中的应用研究

赵阿普

（云南省怒江傈僳族自治州动物卫生监督所，云南 怒江 673199）

免疫胶体金技术；猪旋毛虫病；诊断效果

旋毛虫病，是一种较为常见的人畜共患寄生虫病。若是患有旋毛虫病的人得不到及时治疗，会造成死亡。随着医疗技术的不断发展和进步，对于猪旋毛虫病提出了经由免疫胶体金技术的诊断方式。所以，我院为了探究免疫胶体金技术在猪旋毛虫病诊断中的应用，对其进行了相关实验研究。现将报告如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

以我我院2015年01月01日至2015年09月01日收集的猪旋毛虫标本进行讨论和分析。

1.2 方法

在实验过程中需要使用的器械有79-1加热磁力搅拌器和SⅠGMA-3K30超速离心机，生产公司分别为江苏中大仪器厂和上海天呈医流科技股份有限公司。在实验过程中需要使用的试剂有柠檬酸三钠、牛血清白蛋白、氯金酸、碳酸钾，其生产公司分别为北京鼎国生物技术有限公司、大连宝生物生物技术有限公司、洛阳市化学试剂厂。

1.2.1 制备试剂首先需要制备胶体金和处理旋毛虫排泄抗原。在制备胶体金时，将浓度为0.01%的100mL氯金酸进行加热到沸腾。加入2mL的柠檬酸三钠水溶液，浓度为1%，加热30min后进行冷却。最后，加入0.5mL的碳酸钾。处理旋毛虫排泄抗原时，首先需要进行样本的标记，并将其放置在氯化钠中。其次，将其冰箱中进行透析。最后，放置在离心机中进行离心，并调整蛋白浓度。

1.2.2 胶体金于旋毛虫排泄抗原比例确定实验在10支试管中均装入1mL pH为9的胶体溶液，并将旋毛虫排泄抗原使用pH为9的硼酸钠缓冲液，并将蛋白浓度分别稀释为50μg/mL、45μg/mL、40μg/mL、35μg/mL、30μg/mL、25μg/mL、20μg/mL、15μg/mL、10μg/mL、5μg/mL，并将其分别置入于10支试管内于胶体金溶液混合。同时在使用一支空试管将胶体金溶液于1mLPBS进行混合。在静置10min后，在11支试管中分别置入100μL的氯化钠溶液，其浓度为10%。观察11支试管在静置2h后的化学反应变化情况。

1.3 观察指标

观察胶体金与旋毛虫排泄抗原比例确定实验后的液体颜色变化以及聚沉的现象。

1.4 统计学方法

应用SPSS l5.0软件分析，计量数据采用均数±标准差（X±S）表示，组间比较采用t检验；计数资料采用百分比表示,数据对比采取X2校验，P＞0.05，差异无统计学意义，P＜0.05，差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 实验结果分析

经过数据对比分析后发现，对于胶体金与旋毛虫排泄抗原的混合，其实验结果显示pH为9的结合效果最佳。在实验中发现，1～6试管的旋毛虫排泄抗原量不足，因此颜色由红色转变为蓝色。在第7支试管内的旋毛虫排泄抗原量为稳定胶体金的最低含量。而7～10试管中的旋毛虫排泄抗原量以达到了标准或是超出不，因此试管内的颜色不变。

对于胶体金与蛋白用量比例情况。详见表1。

表1 胶体金与蛋白用量比例情况

3 讨论

随着医学的不断发展和进步，在免疫诊断中提出了经由免疫胶体金技术的诊断方式。胶体金在弱碱中，其能够有效的于蛋白分子进行结合。现今，免疫胶体金技术的诊断方式已经得到了广泛的应用。在实施胶体金于旋毛虫排泄抗原比例确定实验时，将胶体金于旋毛虫排泄抗原的pH值调节到到稳定值，两者的正负电荷就能够有效的结合到一起。从上述实验研究结果中可知，加入少量的猪旋毛虫排泄分泌抗原或是不加入猪旋毛虫排泄分泌抗原，那么液体颜色就会由红色逐渐变为蓝色。若是加入最低稳定量的猪旋毛虫排泄分泌抗原或是过量的猪旋毛虫排泄分泌抗原，那么液体颜色则会保持不变，但是会出现聚沉的现象。在实验中1mL的胶体金中最少需要35μg的猪旋毛虫排泄分泌抗原蛋白才能够保持稳定。由此可见，在免疫胶体金技术在猪旋毛虫病诊断中的应用效果较为显著，值得在临床诊断中大力推广和应用。

［1］陈俊彦，等.免疫胶体金技术的应用与展望［J］.化学分析计量，2014，23（1）∶101-103.

［2］王建科，等.胶体金免疫层析技术在动物病毒性传染病诊断中的应用［J］.动物医学进展，2011，32（1）∶93-98.

［3］刘明远，等.我国的食源性寄生虫病及其相关研究进展［J］.中国兽医学报，2014，34（7）∶1205-1206.

［4］林彤，等.胶体金标记免疫层析技术的最新应用进展［J］.安徽农业科学，2010，38（16）∶8429-8431.

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．04.020

赵阿普（1965～），纳西族，云南省人，高级兽医师，主要从事畜牧兽医技术推广应用和兽医公共卫生研究工作