陶萨茹拉,乌力吉,李春生,王 莉,杜建儒,莫 仁,何云梅,乌仁图娜勒,吉日嘎拉
(1.内蒙古鄂尔多斯市家畜改良工作站,康巴什 017010;2.内蒙古鄂托克旗家畜改良工作站,鄂托克 016100)
阿尔巴斯型白绒山羊胚胎移植效果与分析
陶萨茹拉1,乌力吉1,李春生1,王 莉1,杜建儒1,莫 仁1,何云梅2,乌仁图娜勒2,吉日嘎拉2
(1.内蒙古鄂尔多斯市家畜改良工作站,康巴什 017010;2.内蒙古鄂托克旗家畜改良工作站,鄂托克 016100)
选取37只优质阿尔巴斯型白绒山羊母羊作为供体,300只普通山羊为受体,采用递减法注射FSH进行超排。经同期发情、超数排卵、人工授精等过程后,采用手术法子宫角回收胚胎,经鉴定后移植。结果表明:37只供体共获得345枚胚胎,可用胚胎308枚,只均获得胚胎9.32枚、可用胚胎8.32枚,胚胎合格率高达89.28%。285只受体羊发情,发情率95%。将308枚胚胎移入273只受体,妊娠183只,受胎率67.03%,产羔197只,产羔率107.65%,繁殖率71.06%。
阿尔巴斯白绒山羊;超数排卵;胚胎移植
阿尔巴斯白绒山羊是经过长期自然选择和人工选育而形成的地方良种,是世界一流的绒肉兼用型品种,以绒细、产绒量高、纺织性能好、遗传性能稳定和改良其他绒山羊效果显著等著称,被列入首批发布的动物遗传资源保护名录一级保护品种之中。其所产的羊绒曾获意大利“柴格纳”奖,被誉为“软黄金”、“纤维宝石”,是众多畜产品中唯一以克为单位计价的纺织原料。阿尔巴斯白绒山羊是内蒙古白绒山羊三大品系中的优秀类群,它具有绒细、纤维长、白度高、光泽好、个体大,为绒山羊育种提供了好的素材。因此,内蒙古鄂尔多斯市从2008年开始邀请区内专家实施优质阿尔巴斯白绒山羊胚胎移植项目,并于2010年开始自主实施,取得了可喜的成绩。
1.1 材料
1.1.1 试验动物 供体羊选自阿尔巴斯白绒山羊原种场优质阿尔巴斯基础母羊37只。受体选自鄂托克旗新召苏木两户牧民的300只能繁母羊。
1.1.2 试验药品和器械 PG:上海市计划生育研究所生产,0.2 mg/mL瓶;FSH:宁波激素制品厂,100 IU/瓶;LH:宁波激素制品厂,200 IU/瓶;CIDR栓:澳大利亚生产;PBS:新西兰生产;Holding液:美国AB Tecnology;生理盐水,酒精,碘酒,青霉素;黄安粉,新洁尔灭,石蜡油,凡士林。手术器械2套(手术刀,剪刀,组织钳,止血钳,缝合针,持针钳,手术推车,保定架),体视显微镜,水浴锅,恒温箱,灭菌锅,创布,假阴道,开膣器,输精器,镊子,等等。
1.2 方法
1.2.1 供受体羊的选择
1.2.1.1 供体羊选择标准 完全符合本品种的体型外貌特点;具有稳定的遗传能力,没有遗传疾病;繁殖机能旺盛;体质健壮没有任何传染疾病;发情周期正常,发情症状明显;年龄2~5周岁。
(1)母羊:绒细度15.0 μm以下,产绒量850 g以上;
(2)公羊:绒细度15.50μm以下,产绒量1 250 g以上。
1.2.1.2 受体羊选择标准 受体羊要选择体型较大,繁殖率较高,哺乳力较强,母性强,对地方适应性强的优良羊只。受体羊的健康状况良好,已进入发情季节(也就是说,和供受体的发情时间较近或一致)、产羔后断奶至少1个月以上的空怀母羊。从产羔情况看,2~4胎产羔史的青壮羊为最理想的受体,一般不用育成羊作为受体羊。1.2.2供受体羊的饲养管理与训练 供受体羊的饲养管理与正常繁殖生产母羊的要求基本一致。供受体羊手术前两个月进行场地适应及强化饲养。手术前要求羊只身体健康,达到中上等膘情,防止过肥或过瘦导致乏情或不排卵。术前不要突然变换饲养管理环境,改变饲养方式及饲料。防止出现应激反应,购进受体母羊越早,适应环境的时间越早越好;保持饲养环境的稳定,饲养环境卫生、干燥,棚舍温度适宜。
1.2.3 同期发情与超数排卵 2012年10月14日开始将供体羊分3组放入CIDR(定为0天),10月14日放栓的定为第1组,15日放栓的定为第2组,16日放栓的定为第3组,按照分组顺序,从10月23日开始撤栓并开始注射FSH,按照分组顺序10月25日下午注射PG。10月31日第1组开始手术,11月1日第2组手术,11月2日第3组手术。
1.2.4 人工授精 早晚各试情一次,确定母羊发情后进行人工授精。以鲜精授精为主。精液活力0.7以上,每次输精有效精子数不少于3 000万个,输精次数2~3次,最关键的输精是第2次。稀释后精液温度保持在25~30℃。严格要求配种每个环节的卫生和消毒。选择合适的输精枪,子宫颈输精。确认发情时立即进行第1次输精,之后间隔12 h输精1次。详细做供体羊的配种记录。
1.2.5 受体羊同期发情处理 根据供体羊分组及同期发情处理情况,同步处理受体羊。撤栓注射PG后12 h开始试情,对发情受体羊做好发情时间记录,并做好标记。
1.2.6 胚胎的采集、检查和鉴定
1.2.6.1 胚胎采集 供体羊在开始配种6.5~7 d后冲胚,在冲胚手术前24 h停食,并做好手术前的准备。采集胚胎过程如下:供体母羊麻醉→上手术台→术部剃毛→消毒→打开术口→对卵巢黄体检查→镜检查合格冲胚(子宫角法)→捡胚(选出有效胚胎)→供体母羊术部的缝合、消毒→下手术台。术后观察创口恢复情况,肌注青霉素1~3 d。
1.2.6.2 胚胎检查和鉴定 把盛有冲卵回收液的表面皿放在立体显微镜下仔细检查,不可遗漏。完全收集好以后进行胚胎等级鉴定。1级:优秀胚。发育正常,胚龄与发育相吻合,卵裂球轮廓清楚,透明度适中,细胞密度大,卵裂均匀,无孪性的细胞。2级:良好胚。发育基本符合预定胚龄,轮廓清楚,明暗适中或稍暗稍淡,细胞密度较小或小型卵裂过多,细胞变性率10%~20%。3级:一般胚,轮廓不清楚,色泽过暗或过淡,细胞密度小,细胞孪性率30%~40%。4级:不可用胚。未受精卵和变性胚。
将检出的胚胎放入盛有保存液的培养皿中。超排供体羊在发情后第5.5~6天用子宫冲胚法采集胚胎。此时胚胎处于以下发育期:早期桑葚胚(EM),紧缩桑葚胚(M),早期囊胚(EB),扩张囊胚EXB。
1.2.7 胚胎移植 胚胎移植时对受体的手术采用内窥镜手术法。胚胎的移植部位与供体母羊冲胚部位一致。仔细观察登记受体羊黄体发育情况,没有黄体的受体羊淘汰。抽好胚胎以后,将受体羊黄体发育良好一侧的子宫角取出,用尖端磨钝的10#针头(或用曲别针尖)在子宫壁上扎一孔,把装有胚胎的移植器从此孔插入子宫腔内,伸至子宫角端后将胚胎轻轻退出即可。注意不要在子宫角内扎进,必须避开子宫角的血管,防止出血。移植进去以后,将子宫轻轻塞进腹腔,并缝合创口、消毒,受体羊下手术台。
2.1 供体羊超排效果
结果见表1。
表1 第一批供体羊超数排卵及胚胎采集情况
2.2 受体羊同期发情情况
同期发情共处理300只绒山羊,同期发情率达95%。
2.3 移植效果
由表2可知,第1组共移植85只受体,其中移植1枚胚胎受体80只,妊娠52只,妊娠率65.00%,共产羔51只,产羔率98.08%,繁殖率67.06%;移植2枚胚胎受体5只,妊娠4只,妊娠率80.00%,共产羔7只,产羔率175%,繁殖率140%。
第2组共移植124只受体,其中移植1枚胚胎受体103只,妊娠60只,妊娠率58.25%,共产羔56只,产羔率93.33%,繁殖率54.37%;移植2枚胚胎受体21只,妊娠16只,妊娠率76.19%,共产羔24只,其中死亡1只,产羔率150%,繁殖率114%。
第3组共移植64只受体,其中移植1枚胚胎受体55只,妊娠42只,妊娠率76.36%,共产羔42只,其中死亡1只,产羔率100%,繁殖率62.63%;移植2枚胚胎受体9只,妊娠9只,妊娠率100%,共产羔17只,其中死亡1只,产羔率189%,繁殖率188.89%。
3组共移植273只,其中移植1枚胚胎受体238只,妊娠154只,妊娠率64.71%,共产羔149只,其中死亡2只,产羔率96.75%,繁殖率62.61%;移植2枚胚胎受体35只,妊娠29只,妊娠率82.86%,共产羔48只,其中死亡1只,产羔率165.52%,繁殖率137.14%。
308枚可用胚胎移植于273只受体羊(其中有29只羊移植双胚),术后3个情期内共有90只受体羊返情,返情率32.97%;以不返情为标准确认为妊娠的受体183只,最后共产羔197只,产羔率71.06%。
表2 受体羊胚胎移植结果及产羔情况
3.1 讨论
本次试验共处理供体37只,收集胚胎345枚,可用胚胎308枚,平均可用胚胎8.32枚/只,胚胎合格率达89.28%。据不完全统计,目前国内绒山羊胚胎移植规模大部分都在10~20只;平均可用胚胎数大部分在8~10枚之间,个别超过10枚;胚胎合格率大部分在60%~80%之间,高达94.12%[1-3]。本试验单次试验规模较大,平均可用胚胎数量在全国平均范围之内,胚胎合格率超出全国平均范围,可以说效果较好。
以不返情为标准确认为妊娠的受体为183只,最后产羔共 197只,受胎率(妊娠率)67.03%,产羔率107.65%,繁殖率达71.06%,在绒山羊胚胎移植中产羔率较高。
3.2 分析
(1)本次试验超排效果不稳定,超排最多排卵达23枚,最少2枚,差距较大,而且部分母羊超排效果很理想,但是手术冲胚时发现黄体退化,冲不出胚胎。这除与个体差距及激素比例的调整有关外,还与母羊超排前和配种后的饲养管理有密切联系。以后要加强供体公母羊的饲养管理,根据母羊个体情况,调整激素剂量。
(2)本试验受体全部采用内窥镜手术法移植,这对受体羊的创伤小,伤口恢复快,但是在受体羊术后饲养管理方面有些疏忽,导致部分受体羊流产,还有部分受体羊产下死羔,使产羔率和繁殖率下降。
(3)绒山羊胚胎移植全过程是个连续的、环环相扣的过程,只要一个环节出现问题就会影响整个过程,所以不仅要做好每一个阶段的工作,而且还要做好各个环节间的相互连接。
(4)从3组受体羊产羔结果来看,移植2枚胚胎的效果要好于移植1枚胚胎的效果,产羔率和繁殖率都有明显差距。说明在胚胎移植中1个受体移植2枚胚胎后,充分加强饲养管理,不但可以减少受体羊数量,节省费用,还可以保证产羔效果。
[1] 马占峰,刘晓春.辽宁绒山羊胚胎移植试验报告[J].辽宁畜牧兽医,2002(4):8-9.
[2] 王贵江,闫振富.绒山羊胚胎移植效果观察[C]//全国养羊生产与学术研讨会议论文集.兰州:中国草食动物编辑部,2010:279-280.
[3] 高文超.山羊同期发情与超数排卵及其影响因素的研究[D].陕西杨凌:西北农林科技大学,2013:32-35.
S827.3
A
2095-3887(2016)03-0079-03
10.3969/j.issn.2095-3887.2016.03.021
2016-02-26
内蒙古现代农牧业科技服务体系绒毛用羊示范推广团队建设项目;鄂尔多斯市绒山羊选育提高项目
陶萨茹拉(1983-),女,中级畜牧师,硕士研究生。