阿萨伊对虚热及虚寒证候模型的生物学表达特征影响

王林元+张建军+王淳+朱映黎+王子晨+贺成+瞿研+王莎

[摘要]研究阿萨伊对虚热证、虚寒证大鼠生物学表达特征的影响。SD大鼠分为空白组；虚热模型组，虚热模型加黄柏组、加阿萨伊高、低剂量组；虚寒模型组，虚寒模型加肉桂组、加阿萨伊高、低剂量组；采用每日肌肉注射地塞米松磷酸钠、氢化可的松琥珀酸钠1次、连续21 d的方法制备大鼠虚热模型、虚寒模型；通过放免法检测环核苷酸（cAMP，cGMP），内分泌激素（T3，T4，rT3）指标变化；通过比色法检测代谢（TP，UA，TC，TG，ALB）指标变化。虚热阿萨伊高剂量组能降低血清中cAMP，cAMP/cGMP值（分别P<0.05，P<0.001）；虚热阿萨伊高剂量组均能显著降低T3，T4，rT3值（分别P<0.01，P<0.001，P<0.05）；虚热阿萨伊高剂量组均能显著降低TP，UA，TC，TG，ALB值（分别P<0.001，P<0.05，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；阿萨伊对虚寒模型作用不明显。阿萨伊同黄柏一致，表现出对虚热模型大鼠的调整作用；与肉桂相反，对虚寒模型大鼠的指标纠正不明显。该文从同类比较、异类反证角度验证了理论推导的阿萨伊中药寒凉药性。

[关键词]阿萨伊； 虚热证； 虚寒证； 中药药性； 生物学表达特征；

[Abstract]To study the effects of Acaí on biological expression characteristics in rats with deficiency-heat and deficiency-cold syndromes， SD rats were divided into blank group， deficiency-heat model group， deficiency-heat+Phellodendri Chinensis Cortex group， deficiency-heat+Acaí high dose and low dose groups， deficiency-cold model group， deficiency-cold+Cinnamomi Cortex group， deficiency-cold+Acaí high dose and low dose groups. The rats were treated with intramuscular injection of hydrocortisone （20 mg·kg^-1） or dexamethasone sodium phosphate （0.35 mg·kg^-1） for 21 days to set up deficiency-heat model and deficiency-cold models. The levels of cAMP， cGMP， T3， T4 and rT3 were detected by radioimmunoassay. The levels of TP， UA， TC， TG and ALB were detected by colorimetry. The level of cAMP， cAMP/cGMP in serum were reduced in Acaí high dose group （P<0.05， P<0.001）. The levels of T3， T4 and rT3 were significantly reduced in the Acaí high dose group （P<0.01， P<0.001， P<0.05）. The levels of TP， UA， TC， TG and ALB were significantly reduced in the Acaí high dose group （P<0.001， P<0.05， P<0.05， P<0.05， P<0.01）. However， Acaí had no obvious effects on deficiency-cold models. Acaí showed the same effect with Phellodendri Chinensis Cortex in adjusting the levels of deficiency-heat rats； but unlike Cinnamomi Cortex， Acaí showed no obvious effects in adjusting the levels of deficiency-cold rats.

[Key words]Acaí； Yin-Deficiency syndrome； Yang-Deficiency syndrome； Chinese herbal properties； biological expression characteristics

doi：10.4268/cjcmm20162020

阿萨伊（英文名Aaí）又名巴西莓，来源于棕榈科植物阿萨伊棕榈树Euterpe oleraceae Mart.的新鲜果实^[1]，作为南美洲地区一种常用草药，在巴西、秘鲁、哥伦比亚、苏里南等地使用广泛^[2]，2013年由卫生部引入我国^[3]。自古以来中医药就有吸收外来医药文化引进新资源品种的传统，如《本草纲目》收录外来药物96种^[4]，《经史证类备急本草》收载的外来药物达200多种^[5]，丰富了本草学品种。然而阿萨伊能否引入中药从而与我国已有的中药进行配伍使用发挥医疗保健作用，尚需要进行理论及实验多方面的研究。

寒热药性作为中药性能的主要元素之一，是中药性味归经研究的核心和主体内容，更重要的是它已成为当前药性研究的主要着眼点和切入点^[6]。根据巴西、秘鲁等南美地区传统医学记载，阿萨伊可用于治疗痢疾，皮肤溃疡，发烧以及糖尿病，脱发，出血，肝炎、黄疸等肝脏疾病，肾脏疾病，疟疾，月经不调，经期疼痛和肌肉酸痛等。现代药理、临床研究表明阿萨伊具有抗氧化、抗癌、抗炎、降脂、降糖、保肝等多方面的作用。笔者在总结科学文献和课题组实验研究结果^[7]的基础上，根据阿萨伊原产地的临床应用，以中医药理论为指导在理论上探讨了阿萨伊的中药药性，提出阿萨伊性凉的科学假说^[8]。本实验以同类比较、异类反证法通过考察阿萨伊对虚热证、虚寒证大鼠环核苷酸、内分泌激素以及代谢的影响，对阿萨伊的寒凉药性进行药理学验证。

1 材料

1.1 药品 阿萨伊冻干粉[蒙维（上海）贸易有限公司]；地塞米松磷酸钠 （天津金耀集团湖北天药药业股份有限公司，批号H42020020）；氢化可的松琥珀酸钠 （天津生物化学制药有限公司，批号H21020493）；黄柏配方颗粒（北京康仁堂药业有限公司，批号15015431）；肉桂配方颗粒（北京康仁堂药业有限公司，批号15025691）。

1.2 动物 SD大鼠90只，雄性，体重（240±10） g，由斯贝福动物实验中心提供，合格证号SCXK（京）2014-0006。

1.3 试剂 环磷酸腺苷（cAMP）放免试剂盒（北京华英生物技术研究所，批号20160115）；环磷酸鸟苷（cGMP）放免试剂盒（北京华英生物技术研究所，批号20160115）；三碘甲腺原氨酸（T3）放免试剂盒（北京华英生物技术研究所，批号20160123）；甲状腺素（T4）放免试剂盒（北京华英生物技术研究所，批号20160130）；反三碘甲腺原氨酸（rT3）放免试剂盒（北京华英生物技术研究所，批号20160130）；总蛋白（TP）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160203）；尿酸（UA）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160203）；总胆固醇（TC）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号 20160203）；甘油三酯（TG）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160203）；白蛋白（ALB）试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20160203）。

1.4 仪器 XH-6020全自动放免计数仪（西安核仪器厂）；STAT FAX 2100全自动酶标仪（Awareness Technology Inc.USA）；日本日立7160全自动生化仪；TGL-16A台式高速冷冻离心机；JY203电子天平。

2 方法

2.1 分组、造模及给药 SD大鼠适应性喂养1周后，随机分成9组，每组10只，即空白组、虚热模型组、虚热模型加黄柏配方颗粒组（5 g·kg^-1，相当于60 kg人每日用生药量37.5 g）、虚热模型加阿萨伊冻干粉高剂量组（3.2 g·kg^-1，相当于60 kg人每日用生药量24 g）、虚热模型加阿萨伊冻干粉低剂量组（1.6 g·kg^-1，相当于60 kg人每日用生药量12 g）、虚寒模型组、虚寒模型加肉桂配方颗粒组（30 g·kg^-1，相当于60 kg人每日用生药量225 g）、虚寒模型加阿萨伊冻干粉高剂量组（3.2 g·kg^-1，相当于60 kg人每日用生药量24 g）、虚寒模型加阿萨伊冻干粉低剂量组（1.6 g·kg^-1，相当于60 kg人每日用生药量12 g）。动物适应数天后，肌肉注射地塞米松磷酸钠（0.35 mg·kg^-1）造成虚热证模型，肌肉注射氢化可的松琥珀酸钠（20 mg·kg^-1）造成虚寒证模型，每日上午造模，持续21 d^[9-10]。除空白组、模型组每天灌胃去离子水外，其余各组灌胃相应药物。造模7 d后，按大鼠每100 g体重灌胃1 mL给药，每日下午1次，给药14 d，根据体重适当调整灌胃量。

2.2 检测指标 从造模第8天下午开始给药，第22天腹主动脉取血，分离血清，采用放免、比色等方法检测各组大鼠血清中环磷酸腺苷（cAMP），环磷酸鸟苷（cGMP），cAMP/cGMP，三碘甲腺原氨酸（T3），甲状腺素（T4），反三碘甲腺原氨酸（rT3），总蛋白（TP），尿酸（UA），总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），白蛋白（ALB）等指标的变化。

2.3 统计方法 数据用±s表示，采用SPSS Statistics 20.0的Independent-Sample T Test或One-way ANOVA过程（两两比较采用SNK）进行统计学分析，以P<0.05为有统计学意义。

3 结果

3.1 阿萨伊冻干粉对大鼠一般状态及体重的影响 与空白组相比，虚热模型组大鼠毛色发黄、脱毛甚至皮肤溃烂、饮水饮食减少、形体消瘦、大便干硬、小便发黄、自主活动增加、易被激惹、反应活跃等。实验第2天开始，虚热模型组体重较空白组显著减轻；第7天虚热模型组老鼠形体消瘦，易被激怒；第14天时与虚热模型组比较，黄柏组精神状态及表现都有一定程度好转；第21天时与虚热模型组比较，阿萨伊高剂量组、低剂量组精神状态及表现与黄柏组相似有很大程度的改善。同时每周对大鼠体重进行检测记录，从体重统计结果上看，与空白组比较，虚热模型组体重在第7天、第14天、第21天均明显下降（P<0.001），与模型组比较其余组体重值在第7天、第14天、第21天均无统计学意义。

与空白组相比，虚寒模型组大鼠毛色枯槁、精神状态萎靡、自主活动减少、畏寒、便溏等。实验第4天，虚寒模型组大鼠较空白组体重开始明显降低，但与虚热模型组相比减低不明显，精神萎靡，畏寒；第21天，与虚寒模型组相比，肉桂组大鼠整体症状有所改善；而虚寒阿萨伊高剂量、低剂量组大鼠整体状态未见明显改善且与模型组相似。同时每周对大鼠体重进行检测记录，从体重统计结果上看，与空白组比较，虚寒模型组体重在第7天具有统计学意义（P<0.05），在第14天、第21天均无统计学意义，与模型组比较其余组体重在第7天、第14天、第21天均无统计学意义，结果见表1。

3.2 阿萨伊冻干粉对阴虚证、阳虚证环核苷酸水平的影响 与空白组比较，虚热模型组cAMP，cGMP，cAMP/cGMP值均明显升高（P<0.001，P<0.05，P<0.001）；与模型组相比较，黄柏组cAMP，cGMP，cAMP/cGMP值均明显降低（P<0.001，P<0.001，P<0.05）；阿萨伊高剂量组cAMP，cAMP/cGMP值均明显降低（P<0.05，P<0.05）；阿萨伊低剂量组cAMP，cAMP/cGMP值均明显降低（P<0.01，P<0.05）。

与空白组比较，虚寒模型组cAMP，cAMP/cGMP值明显降低（P<0.05），cGMP明显升高（P<0.01）；与模型组相比，肉桂组cAMP，cAMP/cGMP值均明显升高，差异非常显著（P<0.001），cGMP值明显降低，差异显著（P<0.001）。

在虚热与虚寒状态下大鼠各项指标统计差异多为2级变化，结果见表2。

3.3 阿萨伊冻干粉对阴虚证、阳虚证大鼠内分泌激素水平的影响 与空白组比较，虚热模型组T3，T4，rT3值均显著升高（P<0.01，P<0.01， P<0.05）；与虚热模型组相比，黄柏组T3，T4，rT3值均显著降低，差异显著（P<0.01）；阿萨伊高剂量组T3，T4，rT3值均显著降低（P<0.01，P<0.001，P<0.05）；阿萨伊低剂量组T3，T4，rT3值均降低（P<0.05，P<0.001，P<0.05）。

与空白组比较，虚寒模型组T3，T4，rT3值均显著降低，差异显著（P<0.01，P<0.001，P<0.001）。与模型组相比较，肉桂组T3，T4，rT3值均显著升高，差异非常显著（P<0.01，P<0.001，P<0.001）。

在虚热与虚寒状态下大鼠各项指标统计差异多为2级变化，结果见表3。

3.4 阿萨伊冻干粉对阴虚证、阳虚证大鼠代谢水平的影响 与空白组比较，虚热模型组TP，UA，TC，TG，ALB值均显著升高，差异显著（分别P<0.001，P<0.01，P<0.001，P<0.001，P<0.001）；与模型组比较，黄柏组TP，UA，TC，TG，ALB值均显著降低，差异显著（分别P<0.001， P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；阿萨伊高剂量组TP，UA，TC，TG，ALB值均显著降低，差异显著（分别P<0.001，P<0.05， P<0.05，P<0.05，P<0.01）；阿萨伊低剂量组TP，UA，TC，TG，ALB值均显著降低，差异显著（分别P<0.01，P<0.01，P<0.01，P<0.05，P<0.01）。

与空白组比较，虚寒模型组TP，TC，TG，ALB值显著降低（分别P<0.001，P<0.001，P<0.05，P<0.001），UA值显著升高（P<0.001）；与模型组相比肉桂组TP，TC，TG，ALB值均显著升高（分别P<0.001，P<0.01，P<0.05，P<0.001），UA值显著降低（P<0.01）；阿萨伊高剂量组与低剂量组未出现统计学差异。

在虚热与虚寒状态下大鼠各项指标统计差异多为2级变化，结果见表4。

4 讨论

药性即中药的性能，是药物与疗效有关的性质和性能的统称，也是中医临床用药的核心依据。《神农本草经》序录云：“药有寒热温凉四气。”寒热药性反映了中药对证候寒热属性的影响趋向，是中药性味归经研究的核心和主体内容。围绕着寒热药性，借鉴现代科技手段，国内学者开展了多角度的药性研究，如张冰提出“药性三要素”假说，认为中药药性是中药作用于“不同状态机体”的与“化学成分”相关的“生物学效应”的概括和归纳^[11]。传统中药寒热药性是通过人体对临床用药的反应总结获得的，与所治疗的疾病性质是相对而言的^[12]。近年来，发展了多种寒热药性的评价方法^[13]，动物实验法是用热证或寒证动物模型评价药物的寒热属性。寒凉药能抑制机体的神经、内分泌、代谢等机能活动而温热药则相反^[14]，这是目前最成熟、与临床病理特征最接近的评价中药寒热药性的方法^[6，15]。

在中医理论体系中^[16]，阴虚（虚热）是指机体精、血、津液等物质亏耗，阴气不足，滋润、宁静和制约阳热功能减退，以及阴不制阳，出现燥热、升动和化气太过等阳相对亢盛的虚热内生的病理状态。阳虚（虚寒）是指阳气的推动、气化、温煦功能不足，而出现精神不振、面色淡白、少气乏力、畏寒肢冷等阴相对亢盛的虚寒内生的病理状态^[17]。笔者根据文献的方法^[9-10]，采用地塞米松磷酸钠诱导大鼠产生毛色发黄、脱毛、饮水饮食减少、形体消瘦、大便偏干、反应活跃暴躁等类似中医阴虚（虚热）症状；氢化可的松琥珀酸钠诱导大鼠产生毛色枯槁、精神状态萎靡、少动、体质量增长缓慢，大便溏稀等类似中医阳虚（虚寒）症状。

从生物学表达特征上看，cAMP，cGMP，cAMP/cGMP是阴虚（虚热）、阳虚（虚寒）证候重要的客观指标^[18]，当cAMP/cGMP比值异常时，偏高或偏低，就会发生功能失调，出现虚热、虚寒证候^[19]。同时cAMP，cGMP作为细胞调控作用的第二信使，是激素、神经介质、药物效应的中间环节，大多数激素等都是通过cAMP，cGMP发挥生理作用进而影响酶的生成或活性以实现对代谢的调节^[10]。根据张冰等实验研究表明^[20]，在阴虚病理状态下，cAMP与cGMP的含量出现相对失调，cAMP/cGMP值明显升高，进一步增加T3，T4，rT3等激素的释放，提高了机体组织耗氧和产热，与此同时由于大量激素的释放，加快了TP，UA，TC，TG，ALB物质的代谢，使代谢量升高，当给予相关寒凉药物（六味地黄丸）治疗后，抑制了机体环核苷酸、激素、代谢等指标的水平。在阳虚状态下生物学表达特征变化则反之，当给予相关热性药物（仙茅）治疗后^[21]，促进了机体环核苷酸、激素、代谢等指标的水平。

在传统中药中，黄柏苦、寒，为寒性中药；肉桂辛、甘、大热，为热性中药。本实验结果显示，虚热状态的大鼠，内分泌激素出现紊乱，代谢增强，并伴有环核苷酸代谢亢进。虚寒状态的大鼠，内分泌激素出现紊乱，代谢降低，并伴有环核苷酸代谢障碍。经黄柏、肉桂干预后，纠正了血清中内分泌激素的紊乱，恢复了环核苷酸以及代谢水平。经阿萨伊干预后，虚热证候的老鼠血清中内分泌激素紊乱明显改善，代谢下降，恢复了环核苷酸代谢水平，且与黄柏作用相似，反观虚寒证候的大鼠状态未明显改善。

本研究以同类比较、异类反证法，通过考察、分析黄柏、肉桂以及阿萨伊对虚热证、虚寒证大鼠生物学表达特征变化差异，验证了阿萨伊的中药寒凉药性，同时为深入探讨阿萨伊并将其引入中药，发挥临床疗效奠定了理论基础。

[致谢]基础医学院科研实验中心李伟老师在药物制备及实验操作中提供了帮助。

[参考文献]

[1]Ulbricht C， Brigham A， Burke D， et al. An evidence-based systematic review of Acai （Euterpe oleracea） by the natural standard research collaboration[J]. J Dietary Suppl，2012，9（2）：128.

[2]许利嘉，肖伟，马培，等.具开发前景的南美洲常用草药简介[J].现代药物与临床，2011，26（2）：84.

[3]申海鹏.卫生部关于批准茶树花等7种新资源食品的公告[J].食品安全导刊，2013（1）：19.

[4]谭晓蕾，彭勇.《本草纲目》收录外来药物的整理研究[J].中药材，2014（11）：2099.

[5]金素安，郭忻.外来药物传入史略——宋金元至明清时期[J].中医药文化，2011，6（2）：23.

[6]肖小河，郭玉明，王伽伯，等.基于传统功效的中药寒热药性研究策论[J]. 世界科学技术——中医药现代化，2013（1）：9.

[7]屈胜胜. 巴西莓对酒精性肝损伤的保护作用及机制研究[D].北京：北京中医药大学，2014.

[8]张建军，陈绍红，朱映黎，等.南美草药阿萨伊的中药性能与功用探析[J].中国中药杂志，2015，11（6）：2258.

[9]刘欣，张冰，刘小青，等.辛热药和苦寒药对阳虚大鼠的不同药性生物学表达特征研究[J].中草药，2013，44（10）：1295.

[10]薛春苗，张冰，金锐，等. 虚寒状态动物模型的评价研究[J]. 中华中医药杂志，2012（8）：2037.

[11]李连珍，张冰，金锐，等. 虚寒模型与临床阳虚病人生化指标的类比分析研究[J]. 时珍国医国药，2013（1）：245.

[12]高学敏.中药学[M]. 北京：中国中医药出版社， 2002.

[13]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2011：263.

[14]Zhao Y L， Wang J B， Xiao X H， et al. Study on the cold and hot properties of medicinal herbs by thermotropism in mice behavior[J]. J Ethnopharmacol， 2011， 133（3）：980.

[15]梁月华. 中医寒热本质的初步研究[J].中华医学杂志，1979，59（12） ：705.

[16]孙广仁.中医基础理论[M]. 北京：中国中医药出版社， 2007.

[17]Wang Y H， Xu A L. Zheng：a systems biology approach to diagnosis and treatments[J]. Science， 2014，346（6216）：S13.

[18]倪莉，张冰，刘小青，等. 地塞米松磷酸钠诱导大鼠阴虚状态的实验研究[J]. 中华中医药杂志，2012（2）：355.

[19]陈奇. cAMP、cGMP与中医阴阳学说[J]. 江西中医药，1980（2）：12.

[20]张翠珍，王天芳. cAMP、cGMP拮抗性代谢调节与中医证候关系研究进展[J]. 北京中医药大学学报，1999（6）：51.

[21]李敏，张冰，刘小青. 仙茅对类虚寒大鼠物质代谢及内分泌水平影响的实验研究[J]. 中成药，2012（6）：1011.

[责任编辑 马超一]