泽泻不同提取部位对大鼠的利尿作用

黄小强，张雪，李小艳，赵万里，许文，吴水生

（1．福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.中国药科大学中药学院，江苏南京210009）

泽泻不同提取部位对大鼠的利尿作用

黄小强1，张雪1，李小艳1，赵万里2，许文1，吴水生1

（1．福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.中国药科大学中药学院，江苏南京210009）

目的研究泽泻不同提取部位对大鼠的利尿作用。方法用代谢笼法比较泽泻不同提取部位对水负荷大鼠在0～6 h排尿量，用HPLC测定泽泻各提取部位中的化学成分。结果泽泻水提取部位、石油醚提取部位给药2 h具有利尿作用，乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位给药后6 h有显著的利尿作用，泽泻三萜类化合物主要集中在乙酸乙酯提取部位。结论泽泻乙酸乙酯提取部位是泽泻利尿的主要部位，泽泻三萜类化合物是其利尿的主要化学成分。

泽泻；利尿；不同提取部位；三萜类化合物

泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientale（Sam.）Juzep.的干燥块茎［1］，具有利水渗湿、泄热、化浊降脂的功效。文献报道泽泻醇提物具有利尿和抗利尿的功效［2］，但泽泻中起利尿作用的有效部位及主要化学成分尚不清楚。我们用大鼠水负荷模型，对泽泻不同提取部位利尿的功能进行药理学考察，用HPLC分析泽泻利尿的主要化学成分。

1　仪器与试药

1.1仪器LC-20AT高相液相色谱仪、LC solution工作站（日本岛津公司）；RE-2000旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；BS-3000A系列电子天平（上海友声衡器有限公司）；YP202N分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；HC-9885电解质分析仪（深圳市航创医疗设备有限公司）。

1.2材料泽泻（福建金山医药集团）；氢氯噻嗪（山西云鹏制药有限公司，批号：A120804）；吐温-80（天津市福晨化学试剂厂，批号：20120320）；乙腈（德国Merck公司，色谱纯）；水为超纯水，其它试剂为分析级。

1.3动物SPF雄性SD大鼠110只，体质量180～220 g，由上海斯莱克公司提供，合格证号：SCXK（沪）2012-0002。

2　方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：UItimate XB-C18（4.6 mm ×150 mm，5μm）；流动相：水-乙腈（35∶65）；流速：1mL／min；检测波长：208 nm、254 nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

2.2氢氯噻嗪药液制备取氢氯噻嗪2 500 mg研成细粉，用2%吐温-80配制成浓度为0.5 mg／mL药液，备用。

2.3泽泻水溶性部位的制备取泽泻粉末70 g，过60目，6倍量水回流提取3次，合并提取液，减压浓缩制成50 mg／mL。

2.4泽泻脂溶性部位的制备取泽泻粉末70 g，过60目，依次用6倍量石油醚、乙酸乙酯、正丁醇超声提取3次，每次0.5 h。将石油醚提取液、乙酸乙酯提取液、正丁醇提取液进行抽滤，减压浓缩至溶剂被完全回收。将所得浸膏分别用2%吐温-80制成100 mg／mL溶液，即得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。取各提取物液1 m L，过0.45μm膜，取滤液，按2.1项色谱条件进行分析，结果见图1。

2.5泽泻乙酸乙酯提取物制备取泽泻生品粉末400 g，过60目，放入2 L三角瓶中，加入6倍量乙酸乙酯，超声提取3次，每次1 h。过滤，过滤液减压、浓缩至干燥，得泽泻浸膏20.96 g（浸膏总三萜量＞80%）。取泽泻浸膏10 g，用2%吐温-80配制成浓度100 mg／mL的灌胃液，备用。

2.6利尿实验

2.6.1泽泻不同部位利尿活性筛选SD大鼠适应性喂养1周，实验前禁食12 h，每只大鼠按20 mL／kg灌服生理盐水，收集2 h尿液，选用尿量达灌服量40%以上水负荷者为合格动物。筛选出水负荷尿量合格的48只大鼠，随机分为正常对照组、水提物部位组（100mg／mL）、石油醚部位组（100mg／mL）、乙酸乙酯部位组（100 mg／mL）、正丁醇部位组（100 mg／mL）和氢氯噻嗪组（0.5 mg／mL），每组8只，模型筛选30 min后按20 mL／kg体质量灌胃相应剂量药物溶液，立即放入代谢笼内，每笼1只。每小时收集尿液1次，连续收集6 h。记录每小时5组每只大鼠的尿量，计算5组6 h总排尿量，结果见表1。

2.6.2泽泻三萜类利尿活性研究筛选出水负荷尿量合格的40只大鼠，随机分为正常对照组、氢氯噻嗪组、泽泻乙酸乙酯提取部位低、中、高剂量组，每组8只。5组动物禁食12 h，不禁水，按20 mL／kg给予生理盐水，造成盐水负荷模型。挤压膀胱排尽余尿，按20 m L／kg灌胃相应的药液，泽泻乙酸乙酯提取部位中剂量组等效于临床成年人每次用量，低剂量为中剂量0.5倍，高剂量为中剂量2倍，正常对照组给予等量的2%吐温-80。给药后，将大鼠置于代谢笼内，收集0～3、3～6、0～6 h的尿量，检测0～6 h大鼠尿液的Na+、K+、Cl－含量，结果见表2。

2.7统计学处理计量资料用x±s表示，用SPSS 18.0软件对数据进行分析，组间比较用单因素方差分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.8结果见图1、图2，表1、表2。

表1　泽泻4种不同提取部位对水负荷大鼠的排尿影响（x±s）

表2　泽泻乙酸乙酯提取物对水负荷大鼠的排尿影响（x±s）

3　讨论

3.1中药泽泻具有利尿作用，广泛用于治疗各种水肿。利尿有2个方面因素，即增加尿量和电解质缺失［3］。阳性药氢氯噻嗪可以明显增加尿量，通过抑制Na+／K+／Cl－转运子增加尿Na+排出。给予水负荷大鼠模型泽泻不同提取部位发现，乙酸乙酯部位和正丁醇部位利尿作用最明显。赵宇辉等［4］研究报道24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B是泽泻利尿作用的主要成分。我们通过HPLC对泽泻不同提取部位进行化学分析，发现三萜类化合物主要集中于乙酸乙酯部位。因此，初步判断泽泻中起利尿作用的是三萜类化合物。实验提示泽泻水提物可增加水负荷大鼠尿量，HPLC比较发现水提物中几乎不含有任何脂溶性成分，说明水提物的利尿作用几乎与泽泻萜类化合物无关。泽泻电解质分析，泽泻的K+含量较高［5］，这是泽泻利尿的主要成分之一。

3.2通过给予不同剂量的泽泻乙酸乙酯提取部位发现，泽泻乙酸乙酯提取部位低、中剂量组大鼠在0～3 h、0～6 h的尿量与正常对照组比较显著增加（P＜0.01），泽泻乙酸乙酯提取部位高剂量组大鼠在各个时间点的尿量均未见统计学差异（P＞0.05）。这与文献报道的泽泻利尿具有双向调节功能相符。泽泻乙酸乙酯提取部位在利尿的同时，还增加电解质Na+的排出，减少K+的排出，使尿液中的Na+／K+比值升高，表明泽泻乙酸乙酯提取部位是Na+排利尿，其机制是抑制了肾远曲小管和集合管Na+-K+交换，产生了类似于低效利尿药螺内酯的保钾排钠作用。

实验结果表明泽泻乙酸乙酯部位是泽泻发挥利尿药效的部位，通过HPLC分析发现其主要化学成分为三萜类化合物。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2015：229.

［2］FENG Y L，CHEN H，TIAN T，et al.Diuretic and anti-diuretic activities of the ethanol and aqueous extracts of Alismatis rhizome［J］.Journal of Ethnopharmacology，2014，154：386-390.

［3］杨静，赵慧英，陆永新，等.17β-雌二醇对去卵巢大鼠子宫Bax和Bcl-2表达的影响［J］.西北农业学报，2008，17（4）：42-46.

［4］赵宇辉，唐丹丹，陈丹倩，等.利尿药茯苓、茯苓皮、猪苓和泽泻的化学成分及其利尿作用机制研究进展［J］.中国药理学与毒理学杂志，2014，28（4）：594-599.

［5］吴启南.中药泽泻微量元素的研究［J］.世界元素医学，2003，10（2）：48-49.

R284.2

B

1000-338X（2016）05-0021-03

2016-07-14

国家自然科学基金资助课题（U1205022）

黄小强（1988—），男，2014级中药学硕士研究生，主要从事中药药效物质基础及作用机制研究。

吴水生（1965—），男，教授。E－mail：wushuishengwss@163. com