安捷伦高效液相色谱仪的日常维护和期间核查

季玲玲

[摘 要]高效液相色谱仪的精密性高，因此在日常维护过程中需格外注意，稍有不慎，将会产生严重的影响。本文列举安捷伦高效液相色谱仪这一实例，分别从仪器开机维护、期间核查、运行环境、关机维护、柱前柱后维护等诸多环节入手展开研究。

[关键词]安捷伦 高效液相色谱仪 日常维护 期间核查

中图分类号：TS206.2 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）21-0088-01

引言

高效液相色谱仪（HPLC）的灵敏度高、分辨率高、色谱柱支持反复利用、运行效率高、速度快、流出组收集难度低，是当前我国实验室内使用范围较广的一种分析型仪器。如今，在大气环境分析、无机分析、生物医药研究、食品检测等领域，高效液相色谱仪都得到了应用。

安捷伦高效液相色谱仪的出现，使HPLC的压力上限得到了提升，四元泵、等度泵、二元泵系统的压力上限均可达到600bar，其最高流速多达5mL/min。其中，四元泵系统与等度泵系统的压力上限在达到200 bar时，其流速为10mL/min，检测速率为80 Hz，灵敏度为原先的十倍，大大提高了安捷伦的通用性，促使安捷伦的分离速度上升了一个台阶。

1 安捷伦高效液相色谱仪的环境要求

为了保持仪器的正常运行，延长仪器的使用寿命，环境必须保持干净、电压稳定、远离水源。我们应避免在温度和湿度的急剧变化，一般温度保持在1530℃，湿度30% - 80%。高效液相色谱法是最常用的有机溶剂，如甲醇，有挥发性并且有毒性，并应配备通风设备。

2 安捷伦高效液相色谱仪的开机维护

首先，检查检测过程中用到的色谱柱与流动相的准确性，紧接着将仪器的稳压电源打开，然后打开柱箱与输液泵，待色谱柱的最大保护柱压设置好后开始排气，保证流路过程中没有气泡产生。若有气泡存在，气泡内的氧气会对仪器组件发生氧化作用，导致机器的性能指标受到影响。其次，在控制流速的过程中，应遵循由慢到快的过程，如此可对色谱柱起到更佳的保护效果。再者，要认真观察柱压和流速是否可以合理与平稳地增加，等到流速已达到所需值且柱压处于稳定状态后，促使检测器工作，如此即可有助于检测器的使用寿命增加。

3 高压输液泵的维护

整个液相系统能否通畅、压力是否稳定、流量是否准确主要取决于输液泵。若压力的跳动幅度大、流量的精准度不高，会导致基线的变幅增大，噪音扩大，最终使检验最终结果与实际出现偏离。为此，要采用HPLC级别的流动相，运用0.45μm滤膜进行过滤。①流动相使用前须脱气，避免给在线脱气机太大的压力。定期更换流动相，避免水溶液滋生藻类或微生物。②要注意更换滤芯，在排气泡的时候，水相以5 ml/min的流速，压力超过10 bar就要更换滤芯。③配制10%异丙醇溶液，清洗柱塞清洗附件。调节其打开周期，让泵里充满异丙醇溶液，防止盐析出。④清洗更换溶剂人口过滤头，如果是玻璃材质的，不能用超声清洗，只能用30%的硝酸溶液浸泡，定期更换。

4 色谱柱的柱前柱后维护

色谱柱属于消耗品，所以购置到的色谱柱的厂家与仪器的厂家不同的情况很普遍。实际上，不同厂家的管线接头也许会和柱头之间存在偏差的可能。因此，在购置色谱柱的过程中，要谨慎行事，严格依据仪器接头购置柱头与其相符的色谱柱。

使用流动相前千万注意，流动相与色谱柱内的保存溶剂和系统内存留溶剂的混溶性，避免形成乳化小液滴，从而毁坏柱子。可以使用异丙醇作为过渡溶剂，实验室应配备有色谱纯的异丙醇作为过渡溶剂，或用于清洗备件。在使用中应当注意，过滤是非常重要的环节，有效过滤才能够有效保护色谱柱、仪器。为了避免这种情况，不能使用已经存放日期过长的蒸馏水及磷酸盐溶液，如果条件许可的话，可以采用“在溶液中加入0.0001-0.001M的叠氮化钠”的方法来处理解决。也可以在溶剂瓶内溶剂的上方不断地吹入比较稳定的氩气从而实现隔绝空气的目的。另外，切忌将溶剂瓶放置于光线强烈的环境下，否则会使溶液本身的效用丧失。同时，为了减轻阳光对容积瓶的影响，应尽可能地运用琥珀色的溶剂瓶进行防治。当然，也可采取把保护柱安装于色谱柱之前的方式，以防色谱柱受到污染。此外，要定期用水对全部通道进行冲洗，确保阀口上的盐沉淀被及时清除。

鉴于在日常分析检测过程中的对象大部分是复杂的混合物，但色谱柱的内腔容积与填料相当小，考虑到色谱柱的使用时间有限，因此通常会在柱前应用保护柱，通过0.45μm的滤膜后才能使用样品，并定期更换保护柱芯。待样品做好后，清洗干净流路与柱子，确保其清洁度达到要求。为节省光源，增加灯的使用年限，应关闭检测器开关，然后选取5%的甲醇与95%的水对流路内的盐进行冲洗，紧接着用5%的水与95%的甲醇继续进行冲洗，待其使整个系统达到充盈状态。色谱柱首先选择50%的乙睛水将残留物清除，然后用纯乙睛充满整个柱子。

5 期间核查

试剂：山梨酸标准溶液；

检测条件：色柱：Hypersil ODS， 5 EA.m， 4.6 mm×150 mm；流速：1.0 mL/min；

流动相：甲醇、乙酸钱溶液（（ 0.02 mol/L ） （ 5：95，VIV）；

检测器：二极管阵列检测器，紫外检测器，波长230 nm。

6 评定结果

6.1 技术要求

①通过六次测量后，得到的定性测量重复性误差，RSD定性为1.5%。②定量测量重复性误差（6次测量）RSD定量为3.0%。③回收率（6次测量浓度的平均值与标准液浓度）大约处在90%至110%的范围内。

6.2 液相色谱仪期间核查记录表

选择以浓度值是20μg/mL的山梨酸为标准物，进样量是10μL，波长是230 nm，甲醇为其流动相：乙酸钱溶液（0.02 mol/L）（5：95，V/V），流量是1mL/min，下表1为液相色谱仪期间核查记录表。

6.3 核查结论

通过对仪器设备的使用期间的验证，以满足实验工作的要求，保证实验结果的准确性，试验检定的有效期内可以继续使用。

7 安捷伦高效液相色谱仪关机维护

做完实验后，需立马清洗色谱柱，确保色谱柱干净。首先，要关闭检测器的开关，以节省光源，延长仪器灯的使用时间。同时，将检测器和色谱柱的连接程序全部切断，从而避免对检测池形成不利影响。运用流动相对流路进行长达半个多小时的冲洗，紧接着用15%的甲醇水洗大约10min，再用纯甲醇冲大概30min，运用纯化水对外流路等处进行冲洗。输液泵的流速减至0时，才可将稳压器与泵关闭。若把柱子彻底地浸泡在有机相中放置的话，可以有效防止纯有机相封存反相色谱柱。

参考文献：

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