不同ELISA试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析

周美君/重庆市涪陵区李渡街道畜牧兽医站

不同ELISA试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析

周美君/重庆市涪陵区李渡街道畜牧兽医站

猪瘟（Classical swine fever，CSF）是 由 猪 瘟 病 毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的严重威胁养猪业的病毒性疾病。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类动物传染病，我国也将此病列为一类动物疫病，2005年发布的新版《陆生动物卫生法典》将猪瘟列入OIE规定必须通报疾病名录，是我国发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一。然而就目前的研究来说，还没找到一种方法完全把猪瘟完全根除。现在世界范围内对该病的防制主要是采用强制免疫、禁运、扑杀、消毒、封锁等措施，而免疫接种是最主要的也是最经济的防控措施。近年来，由于我国采取了猪瘟强制免疫的预防措施，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化，逐步转变为隐性感染和亚病毒感染，在临床上表现也更加复杂，大规模的暴发流行基本停止，出现了所谓“非典型猪瘟”，“温和型猪瘟”，“带毒母猪综合征”以及“新生仔猪的免疫耐受”等病例，在病理剖检上也出现了不同于典型猪瘟的病理变化，这些改变就导致了兽医工作者在临床上根据临床表现和病理变化很难对猪瘟做出确诊，针对猪瘟流行的新特点，对猪瘟的实验室诊断技术要求也越来越高，准确的实验室诊断方法对于预防和控制猪瘟都有重要意义。

随着疫苗免疫的广泛应用，疫苗的免疫效果评价就显得十分重要。目前，常见的猪瘟诊断方法分为血清学诊断和分子生物学诊断，其中血清学诊断方法包括琼脂扩散试验（AGP）、荧光抗体试验（FAT）、间接血凝试验（IHA）、中和试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫胶体金技术（IGSS）；分子生物学方法包括RT-PCR技术和核酸探针技术。而血清学诊断方法以其使用方便、一次性检测量大、血清容易采集保存等优点被广泛应用，特别是酶联免疫吸附试验在猪瘟流行状态的监测和流行病学调查等方面有着重要的作用，同时也是免疫猪群抗体水平监测的主要方法，对疫苗免疫效果评价及免疫程序的制定均具有重要意义。但由于每种试剂盒的特异性和敏感性不同，用不同的试剂盒检测时其抗体的阻断率会出现差异。

本研究采用市面上常见的两种猪瘟抗体检测ELISA试剂盒对重庆市涪陵区农村散养生猪猪瘟抗体进行检测，以明确不同试剂盒之间的敏感性和特异性，从而为以后针对性的选择使用试剂盒提供依据。

一、材料与方法

（一）材料

1.试验试剂盒。进口阻断ELISA试剂盒，美国IDEXX公司生产；猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒，中国兽医药品监察所产品。

2.血清来源。4 000份血清均为2014年采自重庆市涪陵区各乡镇农村散养户（一是疫苗相同，均是政府统一采购疫苗由乡镇畜牧兽医站免疫；二是免疫程序一致，均是商品猪28日龄首免，58日龄二免，种猪春秋防集中免疫）。

（二）方法

1.重复性试验。在4 000份血清样品中随机抽取一份，分别采用两种抗体检测试剂盒对其进行猪瘟抗体检测，同时设置5个平行试验孔以检测其重复性。操作方法严格按照操作说明书进行。

2.两种试剂盒检测猪瘟抗体阳性率对比试验。随机抽取2 000份血清用美国IDEXX公司生产的试剂盒进行猪瘟抗体检测，另外2 000份血清用中国兽医药品监察所生产的试剂盒进行猪瘟抗体检测，

3.操作方法。均严格按照ELISA试验诊断试剂盒中操作说明书进行，最终判断去阴阳性。

二、结果与分析

（一）重复性试验结果

采用两种试剂盒检测同一份血清抗体结果见表1。结果显示，用两种不同的试剂盒对猪瘟抗体进行重复检测时，同一个试剂盒的检测结果均一致，数据具有极高的重复性，但是两个不同试剂盒之间的结果具有显著性差异。

表1　两种试剂盒检测猪瘟抗体重复性试验结果

表2　猪瘟抗体检测阳性率结果

（二）两种试剂盒检测猪瘟抗体阳性率对比试验结果

利用两种不同试剂盒对猪瘟抗体进行检测结果见表2。从表中可看出，采用中监所试剂盒检测猪瘟抗体的平均阳性率明显高于采用IDEXX试剂盒的检测结果，二者之间具有显著性差异。

三、讨论

本试验通过对4 000份生猪血清猪瘟抗体进行检测，结果发现中监所的试剂盒的检测结果阳性率明显高于美国IDEXX的试剂盒，在本试验中，由于样本选择量大，所检测的血清均是采用的政府统一采购疫苗，经乡镇畜牧兽医站统一免疫后的生猪血清，未注射过其他厂家的猪瘟疫苗，且所有免疫程序均一致，受到其他疫苗的干扰作用也一致。分析原因主要有以下几点：

1.美国IDEXX公司生产的ELISA猪瘟病毒抗体检测试剂盒为单克隆抗体阻断ELISA方法，它所用的抗原是通过基因工程的方法生产的，纯度高，所用的单抗针对 E2蛋白，检测E2抗体。但它只能识别猪瘟两个位点中的一个，它所检测的是猪瘟病毒特异性抗体，且抗原为原核表达产物，检测特异性高，检测敏感性受到单抗检测范围限制，影响检测敏感性，因此检测结果可能会出现假阴性，特别是对免疫逃逸猪瘟病毒株的抗体检测存在缺陷，不适合抗体的动态监测和免疫效果评价，但该种试剂盒可以区分牛病毒性腹泻性病毒和边界病，可以在引种监测和个体淘汰中广泛应用。

2.中监所生产的ELISA猪瘟病毒抗体检测试剂盒为间接ELISA检测方法，是以表达的E2蛋白作为ELISA包被抗原建立的间接ELISA方法检测猪瘟抗体，敏感性较高，可作为猪群抗体检测评价的首选检测方法，但操作时需要避免假阳性的出现。

3.美国IDEXX公司的试剂盒成本高，而中监所的试剂盒相对而言价格实惠，因此在具体选择试剂盒时应根据实际情况加以灵活应用，特别是对基层来说，这不仅能够保证免疫监测工作的完成，且能够为防制猪瘟的暴发提供可靠的依据，还可以解决实际供应紧张等问题。但是一个地区在进行疫病的免疫监测时，为了更好的掌握疫苗免疫效果最好不要经常变换检测方法和检测试剂盒，相对稳定的检测方法有利于该地区的猪场和散养农户建立档案资料，为指导生产提供理论依据。所以我们要合理的选用试剂盒，更好的为生产服务。

（略）