苦丁茶对自发性高血压大鼠心室重构的影响

申 屠 敏 华 王赛斌 李 栋 杨炉刚 陈向东.浙江省金华市中心医院磐安分院心血管内科，浙江金华00；.浙江省金华市中心医院呼吸科，浙江金华00；.浙江省金华市中心医院耳鼻喉科，浙江金华00；.浙江省金华市中心医院磐安分院院长办公室，浙江金华00

苦丁茶对自发性高血压大鼠心室重构的影响

申 屠 敏 华1王赛斌2李 栋3杨炉刚4陈向东1
1.浙江省金华市中心医院磐安分院心血管内科，浙江金华322300；2.浙江省金华市中心医院呼吸科，浙江金华322300；3.浙江省金华市中心医院耳鼻喉科，浙江金华322300；4.浙江省金华市中心医院磐安分院院长办公室，浙江金华322300

目的研究苦丁茶对自发性高血压大鼠心室重构的影响。方法将实验大鼠随机分为SHR苦丁茶处理组、SHR空白组以及WKY对照组，实验8周后观察大鼠血压、心肌厚度、LVWI值、CVF值、PVCA值、H-E和Masson染色病理学情况以及心肌AdipoR1 mRNA与AdipoR1蛋白表达情况。结果苦丁茶作用8周后，SHR苦丁茶处理组大鼠收缩压、左心室厚度、LVWI值、CVF值和PVCA值均低于SHR空白组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。病理学改变上SHR苦丁茶处理组心肌纤维化程度低于SHR空白组。SHR苦丁茶处理组大鼠AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白相对表达量相比SHR空白组明显增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论苦丁茶可以抑制自发性高血压大鼠心肌重构。

苦丁茶；自发性高血压；心肌重构；收缩压；心肌纤维化

高血压作为常见的心血管疾病，其发病率呈逐年上升趋势［1］，常合并脑卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性肾脏病等主要并发症，不仅致残、致死率高，而且严重消耗医疗和社会资源，给家庭和国家造成沉重负担［2］。高血压通过压力负荷及一系列神经内分泌因素，引起心室重构，增加心力衰竭的发生风险［3］。苦丁茶是我国一种常见的饮品，已有研究将苦丁茶用于高血压的治疗中，本文拟探讨苦丁茶对自发性高血压大鼠心室重构的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

本实验采用12只SHR大鼠，购于中科院上海实验动物中心，均为雄性，12周龄，体重200～250 g，选择自发性高血压（SHR）背景品系WKY大鼠6只作为对照。动物均饲养于温州医科大学动物实验中心SPF级别动物房，将实验大鼠随机分为SHR苦丁茶处理组、SHR空白组以及WKY对照组，每组各6只。

实验所用苦丁茶选择磐安当地茶叶生产基地，为大冬叶青苦丁茶。精选优质茶叶，经过粉碎机粉碎，制成茶粉，灌胃时，将茶叶粉末溶解在蒸馏水中（浓度为1.0 g/100 mL）即可使用。

1.2 实验方法

SHR空白组与WKY对照组给予蒸馏水灌胃，SHR苦丁茶处理组给予苦丁茶溶液灌胃，每天上午9：00开始灌胃给药1次（剂量为1.0 g/kg），连续进行8周。每周测量一次体重，并根据体重变化调整给药剂量。

1.3 观察指标

（1）血压测定：每周日采用尾袖法通过无创血压仪测量清醒安静状态下的各组大鼠尾动脉的收缩压和心率。测量之前加热大鼠10 min至37℃，使尾动脉充盈以便测量。测压环置于大鼠尾根部，然后让大鼠休息3～5 min，开始测量。每次取连续3次血压差值不超过5 mmHg的血压平均值作为应测血压值，并记录心率。（2）灌胃8周后，各组大鼠分别测定体重（BW），然后将大鼠处死取出左心室测量左心室重量（LVW），计算左室重量指数（LVWI=LVW/BW），并测量左心室厚度；电镜、H-E染色和Masson染色观察心肌组织形态学改变，并测定心肌胶原容积分数（CVF）和血管周围胶原面积（PVCA）；RT-PCR方法检测心肌组织心肌脂联素受体1 mRNA（AdipoR1 mRNA）表达水平，蛋白质印迹法（Western-blot）检测心肌组织AdipoR1蛋白表达水平。

1.4 统计学方法

本研究使用的统计分析软件为IBM公司的SPSS 21.0，本研究均为计量资料，采用独立样本t检验，进行t检验前先进行方差齐性检验，三组计量资料间比较采用方差分析。检验标准取α=0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 收缩压和左心室肥厚情况

随机分组前三组大鼠的血压平均值比较，差异有统计学意义（P<0.05），SHR苦丁茶处理组与SHR空白组血压相似，但是均显著高WKY对照组。实验8周后，SHR空白组及WKY对照组血压与实验前比较差异无统计学意义（P>0.05），而SHR苦丁茶处理组血压显著下降，与实验前比较差异有统计学意义（P<0.05）。实验8周后三组大鼠的平均血压比较，差异有统计学意义（P<0.05），其中SHR苦丁茶处理组大鼠血压平均值小于SHR空白组，表明苦丁茶可显著降低自发性高血压大鼠的血压，见表1。

实验8周后三组大鼠间LVWI平均值、左室壁厚度平均值比较，差异有统计学意义（P<0.05），其中SHR苦丁茶处理组实验8周后LVWI值和左室壁厚度均小于SHR空白组，说明苦丁茶可在一定程度上抑制左心室肥厚的进程，见表2。

表1 三组干预前、后收缩压（SBP）情况（±s，mmHg）

表1 三组干预前、后收缩压（SBP）情况（±s，mmHg）

组别n干预前干预后t值P值SHR苦丁茶处理组SHR空白组WKY对照组F值P值6 6 6 173.6±4.5 173.8±4.4 112.3±2.9 8.564 0.012 142.6±3.8 186.6±4.9 111.3±2.6 15.264 0.005 4.258 0.257 -5.658 0.028 0.521 0.851

表2 实验8周后三组LVWI、左室壁厚度比较±s）

表2 实验8周后三组LVWI、左室壁厚度比较±s）

组别nLVWI左室壁厚度（mm）SHR苦丁茶处理组SHR空白组WKY对照组F值P值6 6 6 3.29±0.09 4.49±0.12 2.72±0.09 10.564 0.009 3.72±0.03 4.56±0.05 2.99±0.03 9.542 0.011

2.2 病理学改变

2.2.1 H-E染色实验8周后大鼠心肌H-E染色显示，WKY对照组心肌纤维排列整齐致密，SHR苦丁茶处理组和SHR空白组心肌纤维没有WKY对照组排列的整齐致密，但SHR苦丁茶处理组较SHR空白组心肌纤维排列更整齐致密。SHR空白组心肌排列紊乱，存在断裂带。提示苦丁茶处理后大鼠心肌良性肥厚，改善心肌纤维化。见封三图2。

2.2.2 Masson染色实验8周后大鼠心肌Masson染色显示，WKY对照组心肌间质仅见少量胶原纤维，与WKY对照组相比，SHR苦丁茶处理组和SHR空白组心肌间质胶原纤维均明显增加，但SHR苦丁茶处理组较SHR空白组少；提示苦丁茶处理可改善大鼠心肌纤维化。见封三图3。

2.3 三组心肌CVF和PVCA情况

心肌胶原成分增多是心肌纤维化的主要表现。实验8周后，相比于WKY对照组，SHR空白组大鼠血管周围和心肌间质的胶原明显较多，可见心肌组织被大量胶原纤维联结成网状包绕，而SHR苦丁茶处理组的情况较SHR空白组心肌纤维化有所改善。三组大鼠心肌CVF和PVCA平均值间差异均有统计学意义（P＜0.05），其中SHR苦丁茶处理组和SHR空白组的CVF和PVCA均显著高于WKY组；而SHR苦丁茶处理组的CVF和PVCA明显低于SHR空白组。见表3。

表3 三组心肌CVF和PVCA情况（±s，%）

表3 三组心肌CVF和PVCA情况（±s，%）

组别nCVFPVCA SHR苦丁茶处理组SHR空白组WKY对照组F值P值6 6 6 4.56±0.26 6.36±0.52 3.16±0.21 11.257 0.008 1.31±0.09 1.72±0.12 0.98±0.08 6.864 0.021

2.4 三组心肌AdipoR1 mRNA与AdipoR1蛋白表达情况

荧光定量RT-PCR和Western-blot检查结果显示，三组间AdipoR1 mRNA相对表达量、AdipoR1蛋白相对表达量差异均有统计学意义（P＜0.05），其中与WKY对照组大鼠相比，SHR处理组大鼠AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白相对表达量均低，但是相对于SHR对照组，SHR苦丁茶处理组大鼠AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白相对表达量明显增加。见表4。

表4 三组心肌AdipoR1 mRNA与AdipoR1蛋白表达情况（±s）

表4 三组心肌AdipoR1 mRNA与AdipoR1蛋白表达情况（±s）

组别nAdipoR1 mRNA相对表达量AdipoR1蛋白相对表达量SHR苦丁茶处理组SHR空白组WKY对照组F值P值6 6 6 0.578±0.035 0.129±0.021 0.927±0.067 13.154 0.006 0.918±0.057 0.423±0.049 1.319±0.082 10.146 0.009

3 讨论

心室重构是指心肌对压力或容量超负荷产生代偿性、适应性改变，包括心肌细胞肥大、间质纤维化和心肌细胞凋亡等，进而发展为心力衰竭［4］。高血压通过影响机体内皮功能、细胞内钙超载、炎症反应、肾素血管紧张素系统等造成心血管重构［5］。心脏结构的重构是高血压引起的最重要的靶器官损害，心脏的重构主要表现为心肌间质纤维化和心肌肥厚缺血缺氧，而心肌间质纤维化在心力衰竭的发生过程中更为重要［6］。

高血压心室重构发生的机制还不是完全清楚，但是近年来有许多研究显示氧化应激参与心室重构的发生发展［7］。周淑娴等［8］研究了大鼠急性心肌梗死后氧化应激对心室重构的影响，得出氧化应激参与心室重构的病理生理过程的结论，建议干预氧化应激可作为防治心室重构的手段。在心室重构的过程中，核转录因子kappa B（NF-κB）激活，其下游TNF-α、白细胞介素1（IL-1）和白细胞介素6（IL-6）等因子表达增加，这些炎性因子的增加将加速心肌细胞凋亡以及心肌纤维化，另外，NF-κB的激活还可以进一步调诱导型NOS/NO的表达，加重心肌组织损伤［9］。

众多临床研究已证实血管紧张素抑制剂、血管紧张素转换酶抑制剂类（ACEI）、他汀类以及维生素C、维生素E等抗氧化药物可以延缓心室重构的发生和发展［4］。另外，具有抗氧化、清除自由基的中药也广泛用于心室重构的防治，参附注射液［10］、三七总皂苷［11］、黄芪苷Ⅳ［12］、丹参酮ⅡA［13］、灯盏花［14］、葡萄籽原花青素［15］、通心络［16］、心脉康［17］等中药或者中药提取成分均具有干预心室重构的作用。

苦丁茶作为应用历史悠久的药食两用中药，古代本草典籍中称其为“瓜卢”、“皋卢”、“过罗”等，又因其味较苦，可以作茶饮而被称为苦丁茶。苦丁茶含有丰富的茶多酚，可以很好地保护心血管。现有研究报道苦丁茶具有降血脂［18］、抗血小板凝集［19］、扩血管［20］、清除NO2-和·OH的作用［21］，可以降低血压及保护高血压引起的靶器官损伤作用［22］，在临床上也有利用治疗高血压的临床研究，黄镇才［23］利用苦丁茶治疗35例高血压病患者，观察治疗两个月，降压效果明显，总有效率达85.7%；潘桂等［24］利用苦丁茶联合维生素C治疗高血压病，降压效果明显，长期服用，1年后随访血压一直维持正常范围。但是还没有苦丁茶对高血压心室重构的文献发表。

本研究显示，苦丁茶作用后8周后大鼠收缩压明显降低，可在一定程度上抑制左心室肥厚的进程，降低LVWI值。病理学改变上可改善心肌纤维化，SHR苦丁茶处理组的CVF和PVCA明显低于SHR空白组，且SHR苦丁茶处理组大鼠AdipoR1 mRNA相对表达量和AdipoR1蛋白相对表达量较SHR空白组明显增加，从而起到抑制大鼠心肌重构的作用。

综上所述，苦丁茶作为药食两用的中药，日常生活中可以长期饮用，可有效预防高血压所致的心室重构。苦丁茶干预心室重构的作用可能与其所含的三萜皂苷、多酌类、多糖类和挥发油类等化学成分相关［25］，本研究证实苦丁茶可干预心室重构过程，为在苦丁茶中寻找具有抑制心室重构过程的单体化学成分提供证据，对发掘祖国中医药宝藏具有重要意义。

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Effect of broadleaf holly leaf on ventricular remodeling in spontaneously hypertensive rats

SHENTU Minhua1WANG Saibin2LI Dong3YANG Lugang4CHEN Xiangdong1
1.Department of Cardiovascular Medicine，Pan'an Branch of Jinhua Central Hospital in Zhejiang Province，Jinhua 322300，China；2.Department of Respiration，Jinhua Central Hospital in Zhejiang Province，Jinhua322300，China；3.Department of Otolaryngology，Jinhua Central Hospital in Zhejiang Province，Jinhua322300，China；4.Director's Office，Pan'an Branch of Jinhua Central Hospital in Zhejiang Province，Jinhua322300，China

Objective To investigate the effect of broadleaf holly leaf on ventricular remodeling in spontaneously hypertensive rats.Methods Laboratory rats were randomly divided into SHR broadleaf holly leaf treatment group，SHR blank group and WKY control group.The blood pressure，myocardium thickness，LVWI value，CVF value，PVCA value，pathology by H-E and Masson staining，and expression of AdipoR1 mRNA and AdipoR1 protein in myocardium were observed.Results After 8 weeks of treatment by broadleaf holly leaf，the systolic pressure，left ventricular thickness，LVWI value，CVF value，and PVCA value were significantly lower in the SHR broadleaf holly leaf treatment group than in the SHR blank group（P＜0.05）.As to pathological alteration，the degree of myocardial fibrosis was significantly lower in the SHR broadleaf holly leaf treatment group than in the SHR blank group（P＜0.05）.The relative expression of AdipoR1 mRNA and AdipoR1 protein was significantly higher in the SHR broadleaf holly leaf treatment group than in the SHR blank group（P＜0.05）.Conclusion Broadleaf holly leaf can inhibit the myocardial remodeling in spontaneously hypertensive rats.

Broadleaf holly leaf；Spontaneous hypertension；Myocardial remodeling；Systolic pressure；Myocardial fibrosis

R285.5

A

1673-9701（2016）26-0030-04

2016-05-07）

浙江省金华市科学技术研究计划项目（2015-3-111）