赤芍配方颗粒与水煎剂中主要化学成分研究

王迎春，甄亚钦，高佳明，李军山，王鑫国，牛丽颖

（1.河北中医学院，河北石家庄050200；2.神威药业集团有限公司，河北石家庄051430；3.河北省中药配方颗粒工程技术研究中心，河北石家庄050200；4.河北省高校配方颗粒应用技术研发中心，河北石家庄050200）

赤芍配方颗粒与水煎剂中主要化学成分研究

王迎春1，3，4，甄亚钦1，3，4，高佳明1，李军山2，3，4，王鑫国1，3，4，牛丽颖1，3，4

（1.河北中医学院，河北石家庄050200；2.神威药业集团有限公司，河北石家庄051430；3.河北省中药配方颗粒工程技术研究中心，河北石家庄050200；4.河北省高校配方颗粒应用技术研发中心，河北石家庄050200）

目的建立赤芍配方颗粒的质量标准。方法选用5个批次的赤芍饮片制备配方颗粒和水煎剂，采用薄层色谱（TLC）法分别进行定性鉴别；参考2015年版《中国药典（一部）》中方法对制剂中醇溶性浸出物的量进行测定；采用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中的芍药苷含量。比较2种方法的差异。结果薄层色谱图中，赤芍配方颗粒、水煎剂与赤芍对照药材在相应的色谱位置上显相同颜色主斑点；赤芍配方颗粒与水煎剂中醇溶性浸出物和芍药苷的含量均无显著性差异。结论赤芍配方颗粒与水煎剂中主要化学成分的定性定量分析结果基本一致，为赤芍配方颗粒质量标准的制订与临床应用提供了一定的参考依据。

赤芍；配方颗粒；水煎剂；薄层色谱法；醇溶性浸出物；高效液相色谱法；芍药苷

河北省高等学校科学技术研究重点项目，项目编号：ZD2015001。

赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根，性微寒，味苦，归肝经，具有清热凉血、散瘀止痛功效，常用于热入营血、温毒发斑、吐血衄血、目赤肿痛、肝郁胁痛、经闭痛经、瘕腹痛、跌打损伤、痈肿疮疡［1］的治疗。现代研究表明，赤芍中主要含芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷等化学成分，其中芍药苷具有抗炎、镇静、免疫调节、抗心肌缺血等药理作用，为赤芍中含量较高的有效成分之一［2-5］。传统方剂中，赤芍多以汤剂入药，赤芍配方颗粒则是根据汤剂的制备原理，以水为溶剂煎煮提取。赤芍配方颗粒是以赤芍饮片为原料，经现代工艺提取、浓缩、干燥、制粒而成的纯中药产品，其性味、归经、功效、成分与原中药饮片基本一致，具有服用量小，携带保存方便，卫生安全等特点［6-7］。本试验中选用5批次赤芍饮片制备配方颗粒和水煎剂，采用薄层色谱（TLC）法对制剂中主要化学成分进行定性鉴别；参考2015年版《中国药典（一部）》中方法对制剂中醇溶性浸出物进行定量测定；采用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中芍药苷含量。同时，比较了赤芍配方颗粒与水煎剂中主要化学成分含量的差异，为赤芍配方颗粒的质量控制与临床应用提供了一定的试验依据，现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

日本岛津高效液相色谱仪（LC-15C泵，SPD-15C型紫外检测器，SIL-10AF自动进样器，CTO-15C柱温箱，岛津LC色谱工作站）；TB-215D型及BSA224SCW型电子分析天平（德国赛多利斯集团）；JCX-250G型超声波清洗器（山东济宁恒盛超声机械有限公司）。

1.2试药

芍药苷对照品（批号为110736-201438）、赤芍对照药材（批号为110736-201539）购自中国食品药品检定研究院；赤芍饮片（毛莨科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，取5批），赤芍配方颗粒（由以上5批赤芍饮片制得，批号分别为15062121，15072321，15080121，15101611，15121821），均由神威药业集团有限公司提供；甲醇、乙腈均为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1赤芍水煎剂（干浸膏）的制备

水煎剂严格按照《医疗机构中药煎药室管理规范》药材煎煮方法相关要求制备。取生产各批次配方颗粒所用赤芍饮片各100 g，加水（水面高出药材5 cm）浸泡30 min，保持微沸煎煮30 min，倒出煎液，药渣再分别加水煎煮2次，时间依次为30 min和20 min，合并3次煎液，滤过，真空减压浓缩，浓缩液真空干燥，得干浸膏。

2.2薄层色谱鉴别［8-9］

取赤芍配方颗粒适量，研细，取约0.3 g，加甲醇5 mL，超声提取15 min，滤过，滤液作为配方颗粒供试品溶液。另取水煎剂制得的干浸膏及赤芍对照药材各0.3 g，同法制成水煎剂供试品溶液和对照品溶液。照薄层色谱法［2015年版《中国药典（四部）》通则0502］试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。赤芍配方颗粒、水煎剂供试品溶液色谱中，在与赤芍对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点。结果见图1。

2.3醇溶性浸出物测定

分别精密称取相当于赤芍饮片10 g的5批配方颗粒和水煎剂干浸膏，置100 mL锥形瓶中，按2015年版《中国药典（四部）》通则2201项下方法测定醇溶性浸出物含量。结果表明，5批饮片制得的配方颗粒和水煎剂中醇溶性浸出物的量无显著性差异。结果见表1。

图1　赤芍薄层色谱图

表1　赤芍配方颗粒与水煎剂中醇溶性浸出物含量测定结果（%）

2.4芍药苷含量测定［10-15］

2.4.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：DiamonsilC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；检测波长：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃。在此色谱条件下，赤芍配方颗粒中芍药苷的分离度良好，且峰形对称，色谱图见图2。

2.4.2溶液制备

对照品溶液：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度为0.025 g/L的芍药苷对照品溶液。

配方颗粒供试品溶液：取由5批赤芍饮片制备的配方颗粒适量，研细，取约0.2 g（相当于赤芍饮片1.0 g），精密称定，置25 mL具塞锥形瓶中，加70%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声提取20 min，放冷，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL置10 mL容量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

水煎剂供试品溶液：取按2.1项下方法制得的水煎剂干浸膏，研细，取相当于赤芍饮片1.0 g的干浸膏粉末，精密称定，置25 mL具塞锥形瓶中，依法制备赤芍水煎剂供试品溶液。

2.4.3方法学考察

线性关系考察：精密吸取对照品溶液5，10，15，20，25 μL，按拟订色谱条件进样测定峰面积，以芍药苷的进样量（X）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=1.492 9×106X+2.831 6×104，r= 0.999 9（n=5）。结果表明，芍药苷进样量在0.125 0～0.625 0 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定峰面积。结果的RSD为1.00%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批赤芍配方颗粒，依法平行制备配方颗粒供试品溶液6份，精密吸取各供试品溶液10 μL，按拟订色谱条件进样测定。结果的RSD为0.80%（n=6），表明该方法重复性良好。

稳定性试验：取同一赤芍配方颗粒供试品溶液，按拟订色谱条件，分别于0，2，4，8，12，18 h进样测定峰面积。结果的RSD为1.21%（n=6），表明供试品溶液在18 h内稳定。

加样回收试验：取已测定含量的赤芍配方颗粒9份，每份约0.05 g，精密称定，分别按样品中芍药苷含量的80%，100%，120%精密加入芍药苷对照品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，并计算回收率。结果见表2。

2.4.4样品含量测定

图2　高效液相色谱图

表2　芍药苷加样回收试验结果（n=9）

分别精密吸取5批赤芍饮片制得的配方颗粒供试品溶液和水煎剂供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件进样，测定芍药苷含量，结果见表3。

表3　赤芍配方颗粒与水煎剂中芍药苷含量测定结果

3　讨论

本试验中参照2015年版《中国药典（一部）》赤芍药材鉴别项下的方法，通过薄层色谱法对赤芍配方颗粒与水煎剂中主要化学成分进行了定性鉴别。结果显示，赤芍配方颗粒与水煎剂得到同样清晰的特征斑点，均与赤芍对照药材色谱在相同位置上显相同颜色的主斑点。然后按2015年版《中国药典（四部）》通则2201醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定醇溶性浸出物含量，结果表明，由同一批赤芍饮片制备的配方颗粒与水煎剂中醇溶性浸出物的量无显著性差异。最后参照2015年版《中国药典（一部）》赤芍药材含量测定项下方法采用HPLC法测定赤芍配方颗粒与水煎剂中芍药苷的含量，以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾（40∶65）为流动相时，芍药苷色谱峰拖尾现象较严重；改用乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）为流动相，芍药苷色谱峰的峰形及分离度均较好。

由表3可见，同一批赤芍饮片制备的配方颗粒与水煎剂中芍药苷的含量基本一致。薄层色谱鉴别、醇溶性浸出物测定及芍药苷含量测定结果均体现了赤芍配方颗粒与水煎剂化学成分的相似性，为赤芍配方颗粒质量标准的制订及临床应用提供了一定的参考依据。

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Analysis of the Main Chemical Constituents in Formula Granules and Water Decoction of Radix Paeoniae Rubra

Wang Yingchun1，3，4，Zhen Yaqin1，3，4，Gao Jiaming1，Li Junshan2，3，4，Wang Xinguo1，3，4，Niu Liying1，3，4
（1.HebeiUniversity of Chinese Medicine，Shijiazhuang，Hebei，China050200；2.Shineway Pharmaceutical Group Ltd，Shijiazhuang，Hebei，China 051430；3.Hebei TCM Formula Granule Research Center，Shijiazhuang，Hebei，China050200；4.TCM Formula Granule Research Center of Universities in Hebei，Shijiazhuang，Hebei，China050200）

ObjectiveTo establish the quality standard on formula granules of Radix Paeoniae Rubra.Methods5 batches of cut crude drugs ofRadix Paeoniae Rubra were selected to prepare the granules and water decoction.The TLC was used to identify ofRadix Paeoniae Rubra formula granules and water decoction.The assaying of alcohol soluble extractive was conducted according to the specification of 2015 China Pharmacopeia.The content of the main active constituent paeoniflorin in the Radix Paeoniae Rubra formula granules and water decoction was determined by HPLC.ResultsThe distinct same color spots in the chromatogram obtained with the test solution corresponded in position and color with the spots in the chromatogram obtained with the reference crude drug solution.There was no obvious difference between alcohol soluble extractive and the contents of paeoniflorin of Radix Paeoniae Rubra formula granules and those of wanter decoction.ConclusionThe main chemical components of Radix Paeoniae Rubra formula granules and water decoction are basically same.The results provide supporting basis for the formulation of its quality standard and clinical application of Radix Paeoniae Rubra formula granules.

Radix Paeoniae Rubra；formula granules；water decoction；TLC；ectuact；HPLC；paeoniflorin

R284．1；R282．71

A

1006－4931（2016）16－0017－04

王迎春，在读硕士研究生，研究方向为中药质量控制，（电子信箱）309181914@qq.com；牛丽颖，硕士研究生，教授，硕士研究生导师，研究方向为中药质量控制及中药药效物质基础，本文通讯作者，（电子信箱）niuliyingyy@163.com。

（2016－02－10）