自制电化学发光检测 N末端B型利钠肽原室内质控品及应用评价

薛一峰，黄建荣

(南京医科大学附属无锡市人民医院检验科，江苏无锡 214023)



·论著·

自制电化学发光检测 N末端B型利钠肽原室内质控品及应用评价

薛一峰，黄建荣

(南京医科大学附属无锡市人民医院检验科，江苏无锡 214023)

目的探讨制备电化学发光检测N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)室内质控品的方法。方法收集NT-proBNP检测结果较高的冠心病患者血清及NT-proBNP正常者血清，分为低值组和高值组。进行预期靶值及批内重复精度测定、批内天间不精密度测定、稳定性试验，并与罗氏公司原厂质控品比较，评估自制室内质控品与原厂质控品检测结果的偏倚是否在可接受范围内。结果自制NT-proBNP质控品日内重复性和稳定性良好、不精密度符合临床检测标准，在控范围明显小于罗氏公司提供的质控允许范围，可满足室内质控要求。结论自制NT-proBNP室内质控品可以替代进口原配质控品。

N末端B型利钠肽原；室内质控品；检测

N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)作为心力衰竭(HF)的标志物，已被广泛应用于HF的诊断、鉴别诊断与病死评估中，对HF、心肌梗死等疾病的预后、危险度分级、手术时机选择也有较高的判断价值，其临床应用也逐渐拓展到治疗领域[1-2]。临床验证NT-proBNP是目前管理HF的最佳生化指标，其检测结果为临床诊疗提供客观依据[3-5]。目前临床上用于NT-proBNP的检测方法多为电化学发光法，其中Cobas E601 采用电化学发光技术、生物素-链霉亲和素技术及二维条码技术，具有高敏感性和特异性、可检测范围宽、检测速度快、标记物稳定无污染、结果准确稳定、操作简便、自动化程度高等诸多优点，精密度和稳定性均可适合临床需求。自2009年该科使用Roche 公司的Cobas e601全自动电化学发光分析仪进行NT-proBNP检测，现探讨自制NT-proBNP室内质控品，并对其稳定性、重复性进行评价，报道如下。

1　材料与方法

1.1仪器与试剂Roche 公司的Cobas e601全自动电化学发光分析仪及其配套NT-proBNP试剂、室内质控品。

1.2自制质控品

1.2.1收集多份NT-proBNP检测结果较高的住院冠心病患者血清及NT-proBNP正常者血清，要求无溶血、无黄疸、无脂浊，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒均阴性，初步定值，分为低值组和高值组。

1.2.2参照文献[6-7]的方法将2份血清于65 ℃灭活10 h，1 500 r/min 离心10 min，取上清液，并加入5‰的叠氮钠防腐，分装到1 mL的Eppendorf管中，每支0.5 mL，保存于-80 ℃冰箱。

1.7统计学处理采用SPSS 17.0 统计软件进行数据分析，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.12种自制不同浓度的NT-proBNP质控品日间重复性检测不同浓度的NT-proBNP质控品日间重复性良好。见表1。

表1　　2种不同浓度NT-proBNP质控品日间重复性检测(n=20，pg/mL)

2.22种自制不同浓度的NT-proBNP质控品批内天间不精密度检测22 d不精密度符合临床检测标准。见表2。

表2　　2种不同浓度NT-proBNP质控品批内天间不精密度检测(n=22，pg/mL)

2.32种不同浓度的NT-proBNP质控品稳定性检测分别以1～4个月的累积、SD作为中心线，观测1～4个月积累和SD的走势图，未发现明显的数据呈连续上升或下降趋势，同时也未发现有数据升高或降低超过±2SD。见表3。

表3　　2种不同浓度NT-proBNP质控品稳定性检测(pg/mL)

2.4自制质控品与罗氏原厂质控物比较罗氏公司的质控物以靶值±18%为允许范围，而自制质控物的在控范围，经计算得出为靶值±8.3%～±8.9%，自制质控品的在控范围明显小于罗氏公司提供的质控允许范围，说明完全可以满足室内质控要求。经过4个月的评估,自制NT-proBNP质控品具有良好的重复性和稳定性,在-80 ℃能较长时间保持稳定。见表4。

表4　　自制质控品与罗氏原厂质控品靶值及在控范围比较(pg/mL)

3　讨　　论

自有关学者从猪脑内分离得到B型利钠肽(BNP)和首次在人类血浆中发现NT-proBNP以来，大量基础和临床研究迅速推动其在临床中的应用。包括BNP和NT-proBNP在内的利尿肽家族在维持人体循环系统的容量、渗透压、压力稳态方面起着重要作用，也是近年来最受关注的心血管功能性标志物[8]。BNP和NT-proBNP有相同的生物学来源，但生物学效应和临床意义不完全相同。心肌细胞受刺激后产生含134个氨基酸的B型利钠肽原前体(Pre-proBNP)，随后形成含108个氨基酸的BNP前体(proBNP)，后者在内切酶的作用下裂解生成2个产物，即BNP和NT-proBNP[9]。BNP由第77～108个氨基酸残基组成，半衰期短(22 min)，抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统和肾上腺素活性，体外稳定性差，具有强力的利钠、利尿、扩血管和降压作用；NT-proBNP由第1～76个氨基酸残基组成，半衰期较长(2 h)，无生物活性，体外的稳定性长(> 48 h)。当心肌受到牵张刺激时将两者同时释放入血液循环中，NT-proBNP浓度相对较稳定，有效检测时间长，血液中含量较高(比BNP 高约16～20 倍)，临床检测多针对相对容易的NT-proBNP[10]。临床检测NT-proBNP大多采用电化学发光免疫分析法，是免疫分析未来发展方向。

近年来，随着临床实验诊断技术和检测水平的提高，全面质量控制越来越受到各方面的关注与重视。包括Cobas e601在内的各种进口全自动电化学发光检测系统在我国应用非常广泛，Cobas e601所需试剂、质控品等各种耗材均需进口，成本较高。而室内质控的目的在于监测检测结果的精密度以提高常批间和批内检测结果的一致性，因此质控物是调查检验分析仪器质量控制和实验室检验结果准确度必不可少的物质，其质量与应用是否得当，直接关系实验室检验结果与检测成绩。临床实验室改进修正法案最终规则的标准493.1256中要求：实验室可使用商品化定值的质控品，其定值是与实验室所使用方法和仪器有关，实验室需要对其定值进行验证。有学者认为实验室不仅可以购买商品化的质控品，也可以用实验室剩余的检测样品制备质控品，国内已有研究表明自制室内质控品可以替代进口原配质控品[11]，本研究也证实。因此，在日常工作中可以尝试自制各种室内质控品，降低运行成本，提高经济效益。

[1]Janda S,Swiston J.Diagnostic accuracy of pleural fluid NT-pro-BNP for pleural effusions of cardiac origin:a systematic review and meta-analysis[J].BMC Pulm Med,2010,78(11):58-59.

[2]赵艳辉，丛洪良．心衰患者血清胱抑素C、嗜铬粒蛋白A与心室重构的关系[J]．天津医科大学学报，2015，21(3)：193-195．

[3]Sokhanvar S,Shekhi M,Mazlomzadeh S,et al.The relationship between serum NT-Pro-BNP levels and prognosis in patients with systolic heart failure[J].Journal of Cardiovascular and Thoracic Research,2011,3(2):57-61.

[4]Lin JF,Hsu SY,Wu S,et al.QT interval independently predicts mortality and heart failure in patients with ST-elevation myocardial infarction[J].Int J Med Sci,2015,12(12):968-973.

[5]Knebel F,Schimke I,Pliet K,et al.NT-ProBNP in acute heart failure:correlation with invasively measured hemodynamic parameters during recompensation[J].J Card Fail,2005,11(5 Suppl):S38-S41.

[6]郑怀竞．临床免疫实验室质量管理[M].北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1997：68．

[7]王翠，王云龙，明亮，等．N端前脑钠肽稳定保存体系的优化[J]．中国免疫学杂志，2015，31(4)：517-521．

[8]LowenthalA,CamachoBV,LowenthalS,et al.Usefulness of B-Type natriuretic peptide and N-Terminal Pro-B-Type natriuretic peptide as biomarkers for heart failure in young children with single ventricle congenital heart disease[J].American Journal of Cardiology,2012,109(6):866-872.

[9]Clerico A,Delme RS,Giannessi D.Measurement of cardiac natriuretic hormones(ANP,BNP and related peptides)in clin-ical practice:The need for a new Generation of immunoassay methods[J].Clin Chem,2000,46(10):1529-1535.

[10]Yeo KJ.Multicenter evaluation cf the Roche NT-proBNP assayand comparision to the Biosite Triage BNP assay[J].Clin Chem Acta,2003(338):107-115.

[11]姜新华，赵燕飞，吴小明，等．自制雌二醇性激素室内免疫质控制品及其性能评价[J]．检验医学，2010，25(5)：403-404．

The comparison and evaluation of the self-developed control products and the internal quality control products detection of NT-proBNP by electrochemiluminescence

XUEYifeng,HUANGJianrong

(DepartmentofClinicalLaboratory,WuxiPeople′sHospitalAffiliatedofNanjingMedicalUniversity,Wuxi,Jiangsu214023,China)

ObjectiveTo investigate the preparation of internal quality control products of NT-proBNP by electrochemiluminescence detection.MethodsThe serum with high and normal levels of NT-proBNP were collected and divided into low-value group and high -value group.The expected target value，inter-batch duplicability,imprecision and the stability within batch were detected.After effective verification,we evaluated the bias between self developed internal quality control products and Roche factory quality control materials by comparative test.ResultsThe repeatability,stability and imprecision of self developed NT-proBNP were all appropriate to internal quality control products and meeting meet the clinical testing standards.The control range was significantly less than that permitted by Roche,so it can meet the internal quality control requirements.ConclusionThe self developed NT-proBNP internal quality control products can replace the imports quality control products.

NT-proBNP;internal quality control products;detection

薛一峰，女，副主任技师，主要从事临床免疫学研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.023

A

1673-4130(2016)19-2718-03

2016-02-18

2016-04-13)