急性髓细胞白血病免疫分型及骨髓、血常规综合研究

郭　斌，谢　宁，刘　文，李　英，李君安

(川北医学院附属医院检验科，四川南充 637000)



·论著·

急性髓细胞白血病免疫分型及骨髓、血常规综合研究

郭斌，谢宁△，刘文，李英，李君安

(川北医学院附属医院检验科，四川南充 637000)

目的探讨骨髓细胞形态学、外周血液学和免疫分型对急性髓细胞白血病诊疗的临床意义。方法显微镜检查骨髓细胞形态学，全自动血细胞分析仪检测外周血相关参数，流式细胞计数仪分析白血病细胞免疫标志物，并对所有数据进行统计分析。结果外周血细胞约85%的患者提示异常或幼稚细胞的存在，不同类型白血病其白细胞总数变化差异明显(M1～2、M5以增高为主，M3以减低为主)；多数患者是贫血和血小板减少，但程度不同；白细胞分类中，仪器无法分类鉴别急性粒细胞和急性单核细胞，淋巴系统免疫标志物CD7、CD10和CD2可交叉表达于髓系白血病，对治疗和预后有临床作用。结论外周血相关参数的检测对白血病的早期筛查、鉴别诊断、预后判断均有临床意义，而免疫标志物检测是骨髓细胞形态学诊断和分型的补充和支持，且异常敏感标志物的差异表达跟预后密切相关，可显著提高白血病的诊治率。

急性髓细胞白血病；骨髓细胞形态；外周血；免疫分型

白血病由于原始细胞形态学上的相似性，单一的骨髓细胞显微镜检查的诊断率约为80%，且无法进行早期筛查和预后判断。全自动血液分析仪和流式技术扩大了其对细胞所属种类的识别能力，特别是对异常及原幼细胞的早期筛查具有良好的预见作用[1]。随着单克隆抗体技术及流式细胞术的发展应用，能更准确地鉴别白血病细胞所属系别来源并判断分化程度，对临床治疗及预后有重要的临床意义[2]。为探讨综合分析骨髓细胞形态学、外周血液学和免疫标志物对白血病诊疗的临床价值，现对72例急性白血病进行检测分析和数据统计，报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料检测2014年1月至2015年6月该院初诊的72例患者的骨髓及外周血标本，男41例，女31例，年龄2～84岁。所有患者均经外周血常规、骨髓形态学、细胞组织化学染色及免疫分型确诊为急性白血病，其中急性粒细胞白血病(M1～2) 100 例，急性早幼粒细胞白血病(M3) 55例，急性单细胞白血病(M5) 105例。

1.2方法

1.2.1骨髓细胞形态学检验抽取患者骨髓涂片，采用瑞氏染色，并于油镜下分类计数200个细胞，骨髓涂片必要时做过氧化物酶染色(POX)、过碘酸-雪夫染色(PAS)、特异性脂酶染色(AS-DCE)和醋酸萘酚酯酶染色(NAE/NaF)等细胞化学染色。

1.2.2血液常规检验抽取患者外周血液，EDTA-K2抗凝，使用全自动血液分析仪XE-5000(配套试剂)对标本进行检测，在综合分析结果数据、仪器异常细胞报警提示和白细胞散点图的基础上，对外周血推片染色并进行显微镜复查异常细胞。

1.2.3白血病细胞免疫表型分析应用FACS-Calibur流式细胞仪(488 nm氩离子为激发光源)对每一例标本进行直接免疫荧光法检测，设置对照管和试验管，分别加入标本100 μL，3种荧光标记抗体各20 μL，室温避光孵育约15 min，再加入2 mL红细胞溶解液，震荡后置室温10 min，离心后弃上清液，采用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次，加入15 mL PBS，上机待检。以膜表面抗原大于20%为阳性。所有检测单克隆抗体、透膜剂、PERM、溶血素等试剂均购自BD公司。

1.3统计学处理应用Microsoft Excel 2007统计软件进行数据分析，计数资料以百分比表示。

2　结　　果

2.1外周血细胞检测结果

2.1.1血常规检测结果急性髓细胞白血病(AML)M1～2患者外周血以白细胞增高(75%)、贫血(100%)及血小板减低(75%)为主，少数患者红细胞和血小板正常；M3患者外周血以白细胞减低(64%)、贫血(100%)及血小板减低(82%)为主，少数患者白细胞增高，血小板正常；M5患者外周血以白细胞增高(66%)、贫血(90%)及血小板减低(95%)为主，少数患者白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HB)和血小板(PLT)正常。见表1。

2.1.2白细胞分类仪器可提示急性白血病约85%的患者存在异常或幼稚细胞，散点图也异常，其中M1～2患者有85%粒系比例减低，70%单核比例增高；M3患者中63%粒系比例减低，81%单核比例增高；M5患者中85%粒系比例减低；71%单核比例增高。见表2。

表1　　AML患者血常规检测结果(阳性例数/检测例数)

表2　　AML患者WBC分类结果(阳性例数/检测例数)

2.1.3贫血程度检测结果M1～2、M3、M5患者中均出现不同程度贫血，且极重度贫血所占比例均较高，其中M1～2极重度贫血为50%，M3为100%,M5为57%。见表3。

2.2免疫分型结果M1～2 主要表达的抗原阳性为CD117、HLA-DR、CD13，M3为CD33、CD15、CD64，M5 为CD13、CD117、CD33、HLA-DR；髓系抗原在淋巴系白血病中可出现交叉表达的是CD13、CD33、CD117，淋巴系抗原在髓系白血病的交叉表达为CD7、CD10、CD2(表达量大于20%为阳性)。见表4。

表3　　AML患者贫血程度检测结果(阳性例数/检测例数，g/L)

表4　　髓系细胞免疫表型分型结果(阳性例数/检测例数)

3　讨　　论

骨髓形态学分型在诊断白血病中具有直观、快捷性，结合细胞特殊组织化学染色对诊断的准确率可进一步提高，但也存在不足：(1)属特殊标本，需有严格的适应证，不利于早期筛检。(2)受到检验人员的主观认识和细胞异常表达等影响，约有20%的误诊率。(3)单纯的形态学检查对临床用药和预后评估无指导作用。因此，将外周血液学、形态学和免疫学相结合成为早期诊断、治疗和预后判断白血病的必然趋势[3-5]。

外周血分析显示，无论是AML或急性淋巴细胞白血病，由于细胞对骨髓的侵袭而抑制了红系和巨核系的增殖，导致患者贫血和血小板减少，2项指标可作为早期疾病提示，但不同类疾病其贫血和血小板减少程度不尽相同，有利于疾病鉴别，AML均以极重度贫血为主，最严重的是M3[6]。本组患者均为极重度贫血，但M5患者也有约40%不出现贫血情况，须引起重视。本组全部病例血小板均为减少。

本研究血液分析仪对异常细胞的提示和分类结果表明，仪器对85%的标本有异常报警和提示作用，并可出现散点图异常。不能提示的病例主要为外周血细胞减少，无或极少量异常细胞髓外浸润的情况，有助于复核[7]。本组仪器研究界面的分类统计结果显示，AML的仪器均分类为中性粒细胞减少和单核细胞增高，这可能是由于原始或幼稚细胞核体积较大，侧向荧光强度高，故被分类为单核细胞，因此这对鉴别急性粒细胞和急性单核细胞无指导意义。

本研究免疫分型结果表明，AML的MPO、CD33是主要的普遍表达标志物，在髓系特异性分型中起重要作用，且MPO表达越高说明细胞分化越好，预后较好，当然部分MPO和CD33表达缺失的标本须与其他免疫标志物综合分析。CD34、CD13、CD117和HLA-DR在不同类髓系白血病的表达不同，对比急性粒细胞(M1～2)和急性单核细胞(M5)，CD13、CD117和HLA-DR均高表达，但M5的CD34表达率较低，而单核系CD14、15表达率增高，这可能与细胞分化较成熟而少表达干细胞有关。M3由于白血病为单一的异常早幼粒细胞，其CD34、CD117、HLA-DR和CD13的表达均较低，但特异性地高表达CD33。约60%的M3标本高表达单核细胞CD15和中性粒细胞CD64，对鉴别诊断疾病起到积极作用，其原因有待于进一步研究[8]。本研究对免疫表型交叉表达结果显示，交叉表达是细胞出现的某些抗原缺失、过表达、系列交叉和跨阶段表达等免疫分子异常表达现象，除髓系抗原表达外伴有淋巴细胞抗原表达或淋巴细胞伴髓系抗原表达[9]。这种异质性表现有利于白血病免疫分型的诊断及预后，在微量残留白血病检测中也有较大的临床价值[10]。本组结果提示，髓系白血病可能出现的淋巴系统表达为CD7、CD10和CD2，以CD7最为常见。患者预后观察说明，CD7表达的M1～2患者4个疗程后，无1例达完全缓解，且CD7表达的 AML 13 例患者中7例发病时 WBC>50×109/L，完全缓解率较无交叉表达的患者也明显减低，提示 CD7+AML 预后较差。表达CD7的7例都伴有 CD34表达，提示CD7+AML 细胞可能起源于 CD7+/CD34+多能干细胞或更早期造血阶段的多能干细胞，且对化疗不敏感。

综上所述，白血病具有高度异质性和形态多样性，结合外周血液学、骨髓形态学和流式细胞术免疫分型诊断已成为白血病综合分析的重要手段，可辅助确诊部分特殊类型，提高白血病诊断和分型的准确性，且对初发患者的相关免疫表型，特别是交叉表达情况进行监测，对治疗指导和预后判断均具重要的临床价值。

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Immunophenotyping and bone marrow hematology analysis in acute myelocytic leukemia

GUOBin,XIENing△,LIUWen,LIYing,LIJunan

(DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedHospitalofNorthSichuanMedicalCollege,Nanchong，Sichuan637000,China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance in diagnosis and prognostic judgments of acute myelocytic leukemia with combined detection of morphology,peripheral blood and immune typing of bone marrow cells.MethodsMicroscopic examination of bone marrow cell morphology,automatic blood cell analyzer detection of peripheral blood parameter and flow cytometry analysis of immune markers of leukemia cells,all these datas were analyzed statistically.ResultsPeripheral blood cell analysis showed that instruments may indicate the presence of abnormal or naive cells in about 85% patients,different kinds of leukemia had significant difference in total leukocyte count (majority higher in M1-2,M5; majority lower in M3); while anemia and thrombocytopenia were observed in most patients,but the degree was different; M1-2 and M5 can not be identified by classification of leukocyte by automatic blood cell analyzer,CD7,CD10 and CD2 can cross express in myeloid leukemia,which have a prompt effect with treatment and prognosis.ConclusionDetection of peripheral blood parameters has an important role in early screening,differential diagnosis and prognosis judgment of leukemia,immunological markers detection is the powerful supplement and support for leukemia diagnosis and typing,sensitive markers have close contact with prognosis,which significantly improves the effect of the diagnosis and treatment of leukemia.

acute myelocytic；bone marrow cell morphology;peripheral blood;immune typing

郭斌，男，主管技师，主要从事实验诊断学研究。

，E-mail:xiening19840820@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.020

A

1673-4130(2016)19-2710-03

2016-02-23

2016-04-18)