CX43蛋白在子宫内膜息肉中的表达及意义

赵金燕，薛　翔，陈　庆，卢晓宁，符生鱼，段　钊

(西安交通大学第二附属医院妇产科，陕西西安　710004)



◇临床研究◇

CX43蛋白在子宫内膜息肉中的表达及意义

赵金燕，薛翔，陈庆，卢晓宁，符生鱼，段钊

(西安交通大学第二附属医院妇产科，陕西西安710004)

目的探讨CX43蛋白在子宫内膜息肉(EP)中的表达及意义。方法随机选取存档石蜡标本共79例，为2011年1月至2013年5月于西安交通大学第二附属医院妇产科就诊的EP及因其他子宫内膜疾病诊刮患者的术后病检组织，其中病例组共44例EP组织(其中增殖期18例，分泌期15例，绝经后11例)，对照组共35例正常子宫内膜组织(其中增殖期12例，分泌期12例，绝经后11例)。采用免疫组化法检测CX43蛋白在正常子宫内膜及EP绝经前、后期的表达情况，并分析与临床指标的关系。结果对照组及EP组中CX43蛋白的表达可见于子宫内膜腺上皮细胞及腺体周围的间质细胞中。EP组CX43蛋白阳性率较对照组降低，差异有统计学意义(P<0.05)。CX43蛋白在增殖期和分泌期EP中的阳性率相近，在绝经后EP中的阳性率较绝经前降低，但差异均无统计学意义(P>0.05)。EP中CX43蛋白的阳性表达与高血压及息肉数目无相关性。结论CX43蛋白在EP中的表达降低，在EP发生发展过程中可能起着重要作用。

CX43；高血压；子宫内膜；免疫组织化学；子宫内膜息肉；绝经

子宫内膜息肉(endometrialpolyps,EP)是妇女常见的妇科疾病之一。大部分EP来源于子宫内膜基底层，典型的病理结构为密集的纤维组织(间质)及较大且壁厚的血管和形状、大小不规则的腺体。目前EP的确切病因尚不清楚，影响其发生发展的危险因素包括年龄、高血压、肥胖及他莫昔芬等药物的使用等[1-3]。EP的临床症状包括异常子宫出血(包括绝经后)[4-5]、少数的不孕症[6]和极罕见的恶变。目前国内外对EP发病机制的研究较多，大多认为其与子宫内膜局部雌、孕激素受体数量异常，以及血管发生、细胞增殖/凋亡相关细胞因子的异常表达和服用某些药物密切相关。近年的研究表明，子宫内膜干细胞存在于子宫内膜基底层，对子宫内膜组织的生理性修复有一定的作用。而国内外对EP的发生发展与子宫内膜干细胞相关因子异常表达的相关机制的研究报道较少。而CX43蛋白是细胞间隙连接蛋白家族中的一员，对细胞的新陈代谢、内环境的稳定及增殖、分化、凋亡等许多生理过程发挥着重要的调节作用。有研究发现，在人类子宫组织中CX43的异常表达与多种疾病的发生发展有着密切联系，如子宫肌瘤、子宫内膜异位症、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌等。本研究检测EP中CX43蛋白的表达并分析其与EP形成的高危因素之一的高血压的关系，评价CX43蛋白在EP发生发展中的意义。

1材料与方法

1.1主要试剂兔抗人CX43多克隆抗体(克隆号：3512，CellSignaling公司)；即用型非生物素免疫组织化学超敏EliVisionTMplus(KIT-9901)检测试剂盒(EliVisionplusPolyerHRP(Mouse/Rabbit)IHCKit)[试剂A：增强剂(PolymerEnhancer)，试剂B：酶标记的羊抗鼠/兔IgG]。1.2资料来源及标本采集选取2011年1月至2013年5月存档石蜡标本共79例，为在西安交通大学第二附属医院妇产科就诊的子宫内膜疾病EP患者宫腔镜(Olympus公司)手术后及因子宫内膜疾病做诊刮的患者术后子宫内膜病检组织，其中病例组取EP组织共44例(其中增殖期18例，分泌期15例，绝经后11例)，对照组取正常子宫内膜组织共35例(其中增殖期12例，分泌期12例，绝经后11例)。

病例纳入标准：患者手术前 3 月内未接受过任何激素的治疗；均未妊娠及哺乳；月经周期正常，未曾行卵巢切除术；未接受非甾体抗炎药治；无其他妇科相关疾病，如纤维瘤、子宫肌瘤、子宫腺肌症；无严重心肺疾病、肝肾功能不全等合并症及伴发其他脏器恶性肿瘤。

收集并分析患者的年龄、产次、高血压及糖尿病等重要危险因素等情况。

1.3免疫组化法检测CX43的表达及结果判定采用免疫组化链霉素抗生物素-过氧化物酶(SP)法分析CX43蛋白在正常子宫内膜及EP的表达情况。将蜡块5μm厚连续切片，常规脱蜡水化，组织抗原修复，将切片放入枸橼酸盐缓冲液(pH6.0，)中煮沸2min，自然冷却。用PBS(pH7.4)冲洗3次，滴加30mL/LH2O2，室温(15～28 ℃)下孵育20min以阻断内源性过氧化酶的活性。蒸馏水冲洗3次，PBS冲洗3次。滴加动物非免疫性血清，室温下孵育20min。除去血清后滴加一抗CX43(1∶75稀释)，4 ℃过夜。室温平衡30min，PBS冲洗3次。滴加二抗(生物素标记的羊抗鼠/兔IgG)，37 ℃水浴30min。PBS冲洗3次。滴加链霉菌抗生物素-过氧化酶溶液(试剂D)，37 ℃水浴20min。PBS冲洗3次。常规DAB显色、苏木素复染、脱水、透明、封片。

由2位病理科医生采用盲法读片，阳性染色结果判定标准：CX43主要以胞质出现棕黄色颗粒者为阳性细胞，每张切片随机选择5个高倍视野(×400)，计数视野下所见阳性细胞并记录所占百分比的平均值，阳性结果判定方法：0分(阳性细胞数不到10%)；1分(阳性细胞数占10%到40%)；2分(阳性细胞数占40%到70%)；3分(阳性细胞数超过70%)。染色强度记分为；0分：不着色；1分：黄色；2分：棕黄色；3分：黄褐色。每张切片的评分以这两项者之积表示，<3分为阴性，≥3分为阳性。

1.4病理组织学观察观察各组子宫内膜的病理变化，并按增生期、分泌期及绝经后EP进行分组，分析CX43蛋白的表达与其分期的关系。

1.5分析CX43的表达与临床病理因素的关系观察息肉个数，分析CX43蛋白的表达与高血压及息肉个数的相关性。

1.6统计学处理用SPSS13.0软件进行统计学分析，采用独立样本t检验、χ2检验或Fisher确切概率法对资料进行比较分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1纳入病例的基本特征病例组及对照组在年龄、产次、高血压及糖尿病等重要危险因素的分布差异均无统计学意义(P>0.05，表1)。

2.2CX43蛋白在对照组及EP组中的表达情况显微镜下观察显示，CX43蛋白表达于子宫内膜腺上皮细胞和腺体周围的间质细胞中，阳性染色定位于细胞质，呈棕黄色颗粒状；增生期、分泌期及绝经后EP中CX43蛋白表达阳性率与对照组的相应月经周期相比，均明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；EP增殖期的CX43蛋白表达阳性率(16.67%)和分泌期的阳性率(13.33%)相近，而绝经后EP的CX43蛋白表达阳性率(9.09%)较绝经前EP阳性率(15.15%)降低，但差异均无统计学意义(表2、图1)。

表1子宫内膜息肉组与正常对照组纳入病例的基本特征

Tab.1ThebasiccharacteristicsofthecasesinEPgroupandcontrolgroup

临床特征病例组(n=44)对照组(n=35)P值年龄(岁)45.50±12.01*46.00±13.33*0.384初产妇[n(%)]11(25.0)10(28.6)0.721经产妇[n(%)]33(75.0)25(71.4)宫腔手术史[n(%)]7(15.9)15(42.9)0.008高血压史[n(%)]6(13.6)8(22.9)0.286糖尿病史[n(%)]2(4.5)3(8.6)0.650

*表示中位数±标准差。

表2CX43蛋白在对照组及EP中的表达

Tab.2TheexpressionofCX43proteinincontrolgroupandEPgroup

分期例数CX43蛋白的表达阴性(%)阳性(%)P值增生期 正常内膜124(33.33)8(66.67)0.009 EP1815(83.33)3(16.67)分泌期 正常内膜125(41.67)7(58.33)0.037 EP1513(86.67)2(13.33)绝经期 正常内膜114(36.36)7(63.64)0.024 EP1110(90.91)1(9.09)

图1CX43蛋白在对照组及EP组中的表达

Fig.1TheexpressionofCX43proteininEPgroupandcontrolgroup(×400)

A和a、B和b、C和c3组图分别表示增殖期、分泌期及绝经后对照组与EP组中CX43蛋白的表达，阳性染色均定位在胞质。

2.3CX43蛋白表达与高血压及息肉数目的相关性对照组和EP组CX43的阳性表达与高血压无明显相关性，与息肉的数目亦无明显相关性(P>0.05，表3、表4)。

表3对照组及EP组CX43的表达与高血压的关系

Tab.3RelationshipbetweenCX43expressionandhypertensionincontrolgroupandEPgroup

CX43表达高血压阳性阴性P值对照组阳性4180.734对照组阴性49EP组阳性240.130EP组阴性434

表4EP组中CX43的表达与息肉数目的关系

Tab.4RelationshipbetweenCX43expressionandthenumberofpolypsinEPgroup

CX43表达EP息肉数目(个)≥321P值阳性312阴性234110.859合计26513

3　讨　　论

目前发现的人类间隙连接蛋白有20多种，其中CX43分布最广、研究最多。间隙连接细胞间通讯(GJIC)是以细胞间的间隙连接为通道进行细胞间信息和物质交换。CX43蛋白是GJIC基本单位之一，是进行细胞间信号和物质通讯的基础。CX43蛋白的异常表达，可直接影响细胞、组织及器官的功能状态。在正常子宫组织中，CX43表达水平的升高，为子宫肌细胞收缩的控制及子宫内膜组织细胞间的信号传递提供了低电阻通道，使小分子物质很容易通过间隙连接的通道，保证了子宫肌细胞及子宫内膜组织细胞群在代谢及行为上的协调性。而其异常表达与EP、子宫内膜异位症、不孕症、子宫肌瘤、宫颈癌、子宫内膜癌等多种妇科疾病的发生、发展有着密切联系。本研究采用免疫组化法观察CX43在绝经前后EP中的表达情况并分析了可能影响CX43的表达的危险因素。GRANOT等[7]对子宫内膜中CX43基因及蛋白的瞬间表达的研究显示，CX43蛋白和基因在子宫内膜中的表达随着月经周期中LH、FSH及孕激素的分泌变化而变化，但CX43蛋白与基因的表达在相同时间里的表达水平并不一致；在增殖中晚期(月经周期的第8天及12天)，CX43蛋白有较高水平的表达，尤其是在月经周期的第8天，而在分泌中晚期(月经周期的第21天及25天)CX43蛋白的表达下降，尤其是在第21天的表达几乎消失。本研究中CX43蛋白在增殖期EP中的阳性率较分泌期EP中的阳性率较高(阳性率分别为16.67%和13.33%)，但差异无统计学意义，在绝经期EP中CX43蛋白的阳性率只有9.09%。这提示CX43在EP中的表达可能受一定激素水平的影响，而不同时期的EP疾病本身可能与其表达也有一定关联。SCHLEMMER等[8]用免疫组化和Westernblot法分析了正常子宫内膜间质及上皮、IA期、Ⅱ期子宫内膜癌细胞系中CX43蛋白表达，结果显示其表达水平为间质细胞系=上皮细胞系>IA期子宫内膜癌细胞系>Ⅱ期子宫内膜癌细胞系，并且CX43表达与子宫内膜癌的肿瘤级别呈负相关。杨灵等[9]研究发现，CX43在正常子宫内膜、不典型增生内膜、子宫内膜癌组织中的阳性表达率明显递减，并且其与有关子宫内膜癌的组织病理分级呈负相关。说明在子宫内膜癌形成过程中或发生早期可能由于CX43的表达受抑制，使GJIC功能失活或缺失。细胞与细胞之间的信号及物质传递出现异常，导致细胞增殖失调，为子宫内膜癌的形成提供了一条异常通路。本研究中EP组CX43 的阳性率较正常子宫内膜组中的阳性率显著降低，绝经后EP较绝经前EP中CX43的阳性率亦降低，提示CX43的表达减少可能在EP的形成中发挥着一定的作用。高血压是EP发生的可能危险因素之一，但本研究显示EP的CX43表达与高血压及息肉的数目等因素无相关性。有关CX43调控EP的相关机制仍需进一步大样本研究。

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(编辑国荣)

TheexpressionandsignificanceofCX43inendometrialpolyps

ZHAOJin-yan,XUEXiang,CHENQing,LUXiao-ning,FUSheng-yu,DUANZhao

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,theSecondAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,Xi’an710004,China)

ObjectiveToexploretheexpressionofCX43proteininendometrialpolyps(EP).MethodsWerandomlyselected79paraffinspecimensofEPdiagnosedattheDepartmentofObstetricsandGynecologyoftheSecondAffiliatedHospital,Xi’anJiaotongUniversity,fromJanuary2011toMay2013afterdilationandcurettageofendometrialtissuesbyhistopathologicalexamination.Theyincluded44casesofEPtissues(18casesinproliferationalphase, 15casesinsecretoryphase,and11casesinpostmenopausalphase)and35casesofnormalendometrialtissuesasthecontrolgroup(12casesinproliferationalphase, 12casesinsecretoryphase,and11casesinpostmenopausalphase).CX43proteinexpressionwasanalyzedinpremenopausalandpostmenopausalEPbyimmunohistochemicalstaining.ResultsThepositiveexpressionofCX43proteininbothcontrolgroupandEPtissueswasfoundinendometrialglandularepithelialcellsandstromacellssurroundingtheglands,principallyinglandularepithelialcells.ThepositiverateofCX43proteinintheEPsignificantlydecreasedcomparedwithcontrolgroupincorrespondingphase(P<0.05).ThepositiverateofCX43proteinintheproliferationalandsecretorystageswassimilar,butitdecreasedinpostmenopausalstagecomparedtopremenopausalphaseofEP,butwithoutsignificantdifference(P>0.05).ThepositiveexpressionofCX43proteininEPhadnocorrelationwithhypertensionandthenumberofpolyps.ConclusionCX43proteinexpressioninendometrialpolypsisreduced,whichmayplayanimportantroleinthedevelopmentofEP.

CX43;hypertension;endometrium;immunohistochemistry;endometrialpolyps;menopause

2016-01-25

2016-04-29

陕西省自然科学基金资助项目(No.2013JM4012)

段钊.E-mail:duanzhao8@163.com

R711

A

10.7652/jdyxb201605016

SupportedbytheNaturalScienceFoundationofShaanxiProvince(No.2013JM4012)

优先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20160803.1407.022.html(2016-08-03)