李淑杰 靳凤珍
【摘要】目的:为了了解适龄儿童接种麻疹、风疹、脊髓灰质炎疫苗后IgG抗体产生情况,评价该地区不同人群免疫规划工作质量和水平,及时发现解决免疫规划工作中存在的问题。方法:根据《呼伦贝尔市儿童免疫效果监测实施方案》,2013年、2014年分别对莫力达瓦达斡尔族自治旗(以下简称莫旗)21个乡镇的0~15岁适龄儿童进行了麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体的检测,利用酶联免疫吸附试验(间接ELISA)法。结果:2013年共检测4763人,2014年共检测3553人,麻疹IgG阳性率2013年是84.1%,2014年是73.0%;风疹阳性率2013年91.7%,2014年87.6%;脊髓灰质炎阳性率2013年85.4%,2014年88.7%。经过x2检验,2013年麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测结果阳性率各年龄组均有差异,2014年麻疹、风疹IgG抗体阳性率各年龄组有差异,脊髓灰质炎IgG抗体阳性率各年龄组无差异。讨论:差异存在的主要原因是两年的抽样数量差距大,还有样品采集和处理、试剂的使用、方法的选择、环境温湿度的控制、仪器的使用、人员操作技术、样品采集的对象的免疫史不同也是主要影响。在以后的抽样、样品处理、方法的选择、实验的操作等加强管理和合理安排,提高专业人员业务技能、做好实验室的内部质量控制,确保检测结果的准确可靠;计划免疫医生查遗补漏,加强疫苗的接种的及时率和覆盖率,减少或杜绝少种和漏种的现象发生。
【关键词】IgG抗体;检测;麻疹;风疹;脊髓灰质炎;酶联免疫吸附试验
1 研究资料与方法
使用ELISA麻疹/风疹/脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)。
1.1 样品的采集
用一次性采血针采集末梢血(手指血或耳垂血)用一次性采血管吸取20ul,加到预先盛有180ul的生理盐水带盖的离心管中,待血球自然沉降到管底后便可直接取上清液检测。
1.2 实验步骤
按照麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂盒使用说明书的检测方法进行检测。
1.3 仪器
酶标仪Thermo Multiskan MK3型,Wellwash4、MK2洗板机,微量移液器。
1.4 试剂
2013、2014年均使用同一个厂家同一名称的麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂盒,批号不同。
2 结果
麻疹、风疹、脊髓灰质炎病毒IgG抗体通过计算CUT OFF(CO)值判定结果。麻疹a空白孔OD值不大于0.07;b阳性对照A值大于0.5;c阴性对照A值小于0.15,实验成立。风疹、脊髓灰质炎:阴性对照OD值≤0.15,阳性对照OD值≥阴性对照OD的2.1倍,实验成立。所有实验均符合内部质量控制要求,实验全部成立。
经过x2检验,2013年麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测结果阳性率各年龄组均有差异,2014年麻疹、风疹IgG抗体阳性率各年龄组有差异,脊髓灰质炎IgG抗体阳性率各年龄组无差异。2013年和2014年麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测结果阳性率均有统计学意义。(按α=0.05水准)。
3 讨论
1)样品数量,样品采集量少,抽样误差较大,阳性率较低,比如2013年0~2岁年龄组,样品量不足300人,这个年龄组的阳性率普遍较低。还有2013年采集样品4763人,2014年采集样品3553人,同比2013年阳性率高于2014年阳性率;2)个体差异,这是主要原因,采集的个体不同,疫苗接种次数不同,2013年儿童麻疹的免疫次数大多是两三次甚至四次,2014年麻疹的免疫次数大部分是一两次,风疹免疫次数2013年大部分两次甚至三次,2014年大部分一两次,甚至有些没有免疫史,免疫次数少或者没有免疫史造成抗体的产生量不足,阳性率也低;3)同一个体不同时间采集,抗体量也不同,随着时间的延长,抗体消减,2012—2014年內蒙古自治区消除麻疹行动方案,力争麻疹2014年发病率控制在1/100万以下,2014年消除麻疹,2012年、2013年对8月龄至14岁以下儿童开展麻疹风疹的疫苗查漏补种,对2013年的抗体检测阳性率的提高有很大作用;4)检测的环境条件,温度控制在18~25℃,湿度控制在30%~80%之间,2013年检测的平均温度23.5℃,湿度68%,2014年平均18℃,湿度69%,2014年的检测室内环境温度较低,影响了酶标记物与样品的结合以及显色剂的显色反应;5)样品的采集和制备,溶血的样品对检测的吸光度有很大影响,溶血样品中的蛋白量增加,吸光度值偏大,造成假阳性,2013年溶血的样品较2014年的溶血的样品数多,假阳性也增加。
综上所述,排除或减少了影响因素,保证使用间接ELISA法检测IgG抗体的结果的准确可靠,应加强实验室的科学管理,在工作中逐步改进设施和实验条件,依据试剂盒和相关操作文件,制定本实验的标准操作规程,严格对实验条件、试剂、人员进行监督和质量控制,减少实验的误差降低不确定度,增加检测数据的可信度;另外疾控机构加强计划免疫的监督和指导,督促防疫工作者经常深入基层调查了解适龄儿童的疫苗接种情况,管理好流动儿童的疫苗接种,定期查遗补漏,尽量做到所有儿童均能按时按程序接种疫苗,以确保抗体水平逐年上升,以切实保证计划免疫儿童有效预防相应传染病,为计划免疫的疫苗接种的效果评价提供依据。
参考文献
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