麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测及影响因素分析

李淑杰 靳凤珍

【摘要】目的：为了了解适龄儿童接种麻疹、风疹、脊髓灰质炎疫苗后IgG抗体产生情况，评价该地区不同人群免疫规划工作质量和水平，及时发现解决免疫规划工作中存在的问题。方法：根据《呼伦贝尔市儿童免疫效果监测实施方案》，2013年、2014年分别对莫力达瓦达斡尔族自治旗（以下简称莫旗）21个乡镇的0～15岁适龄儿童进行了麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体的检测，利用酶联免疫吸附试验（间接ELISA）法。结果：2013年共检测4763人，2014年共检测3553人，麻疹IgG阳性率2013年是84.1%，2014年是73.0%；风疹阳性率2013年91.7%，2014年87.6%；脊髓灰质炎阳性率2013年85.4%，2014年88.7%。经过x2检验，2013年麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测结果阳性率各年龄组均有差异，2014年麻疹、风疹IgG抗体阳性率各年龄组有差异，脊髓灰质炎IgG抗体阳性率各年龄组无差异。讨论：差异存在的主要原因是两年的抽样数量差距大，还有样品采集和处理、试剂的使用、方法的选择、环境温湿度的控制、仪器的使用、人员操作技术、样品采集的对象的免疫史不同也是主要影响。在以后的抽样、样品处理、方法的选择、实验的操作等加强管理和合理安排，提高专业人员业务技能、做好实验室的内部质量控制，确保检测结果的准确可靠；计划免疫医生查遗补漏，加强疫苗的接种的及时率和覆盖率，减少或杜绝少种和漏种的现象发生。

【关键词】IgG抗体；检测；麻疹；风疹；脊髓灰质炎；酶联免疫吸附试验

1 研究资料与方法

使用ELISA麻疹/风疹/脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）。

1.1 样品的采集

用一次性采血针采集末梢血（手指血或耳垂血）用一次性采血管吸取20ul，加到预先盛有180ul的生理盐水带盖的离心管中，待血球自然沉降到管底后便可直接取上清液检测。

1.2 实验步骤

按照麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂盒使用说明书的检测方法进行检测。

1.3 仪器

酶标仪Thermo Multiskan MK3型，Wellwash4、MK2洗板机，微量移液器。

1.4 试剂

2013、2014年均使用同一个厂家同一名称的麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测试剂盒，批号不同。

2 结果

麻疹、风疹、脊髓灰质炎病毒IgG抗体通过计算CUT OFF（CO）值判定结果。麻疹a空白孔OD值不大于0.07；b阳性对照A值大于0.5；c阴性对照A值小于0.15，实验成立。风疹、脊髓灰质炎：阴性对照OD值≤0.15，阳性对照OD值≥阴性对照OD的2.1倍，实验成立。所有实验均符合内部质量控制要求，实验全部成立。

经过x2检验，2013年麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测结果阳性率各年龄组均有差异，2014年麻疹、风疹IgG抗体阳性率各年龄组有差异，脊髓灰质炎IgG抗体阳性率各年龄组无差异。2013年和2014年麻疹、风疹、脊髓灰质炎IgG抗体检测结果阳性率均有统计学意义。（按α=0.05水准）。

3 讨论

1）样品数量，样品采集量少，抽样误差较大，阳性率较低，比如2013年0～2岁年龄组，样品量不足300人，这个年龄组的阳性率普遍较低。还有2013年采集样品4763人，2014年采集样品3553人，同比2013年阳性率高于2014年阳性率；2）个体差异，这是主要原因，采集的个体不同，疫苗接种次数不同，2013年儿童麻疹的免疫次数大多是两三次甚至四次，2014年麻疹的免疫次数大部分是一两次，风疹免疫次数2013年大部分两次甚至三次，2014年大部分一两次，甚至有些没有免疫史，免疫次数少或者没有免疫史造成抗体的产生量不足，阳性率也低；3）同一个体不同时间采集，抗体量也不同，随着时间的延长，抗体消减，2012—2014年內蒙古自治区消除麻疹行动方案，力争麻疹2014年发病率控制在1/100万以下，2014年消除麻疹，2012年、2013年对8月龄至14岁以下儿童开展麻疹风疹的疫苗查漏补种，对2013年的抗体检测阳性率的提高有很大作用；4）检测的环境条件，温度控制在18～25℃，湿度控制在30%～80%之间，2013年检测的平均温度23.5℃，湿度68%，2014年平均18℃，湿度69%，2014年的检测室内环境温度较低，影响了酶标记物与样品的结合以及显色剂的显色反应；5）样品的采集和制备，溶血的样品对检测的吸光度有很大影响，溶血样品中的蛋白量增加，吸光度值偏大，造成假阳性，2013年溶血的样品较2014年的溶血的样品数多，假阳性也增加。

综上所述，排除或减少了影响因素，保证使用间接ELISA法检测IgG抗体的结果的准确可靠，应加强实验室的科学管理，在工作中逐步改进设施和实验条件，依据试剂盒和相关操作文件，制定本实验的标准操作规程，严格对实验条件、试剂、人员进行监督和质量控制，减少实验的误差降低不确定度，增加检测数据的可信度；另外疾控机构加强计划免疫的监督和指导，督促防疫工作者经常深入基层调查了解适龄儿童的疫苗接种情况，管理好流动儿童的疫苗接种，定期查遗补漏，尽量做到所有儿童均能按时按程序接种疫苗，以确保抗体水平逐年上升，以切实保证计划免疫儿童有效预防相应传染病，为计划免疫的疫苗接种的效果评价提供依据。

参考文献

[1] 庞红，张泽申，刘红联，等.上海市长宁区外来和本市小学生麻疹风疹水痘IgG抗体水平调查[J].中国疫苗和免疫，2009，（03）.

[2] 胡莹，陆培善，邓秀英，等.江苏省2012年健康人群麻疹风疹腮腺炎IgG抗体水平监测分析[J].中国卫生检验杂志，2013，（12）.

[3] 程静，霍细香，张迟，等.湖北省健康人群麻疹、风疹、腮腺炎人群免疫水平分析[J].中国卫生检验杂志，2011，（11）.