保健食品中二氢吡啶类硝苯地平快速检测卡的研制

姚世平　刘光中　姚洪涛*　周　轶　李心乐　刘春秀

保健食品中二氢吡啶类硝苯地平快速检测卡的研制

姚世平①刘光中①姚洪涛①*周轶①李心乐①刘春秀①

目的：研制一种快速测定降压类保健食品中化学成分硝苯地平含量的检测卡。方法：采用浸泡吸附法处理降压类保健食品，提取出硝苯地平滴加到检测卡上反应形成橙红色醌式结构物，依据反射光谱原理，采用食品中危害因子及非法添加药物智能化综合检测仪测定灰阶色度值，以标准曲线法定量。结果：采用针对性的样品前处理方式去除了多种干扰因子，其线性范围在2.5～60.0 mg/g，其回归方程：Y=11.53X+300.9，相关系数为0.998，检出限为2.5 mg/g，相对标准偏差为2.56%，加标回收率为95%～110%。硝苯地平检测卡与液质联用色谱仪AB Tripletof 4600进行对同一样品加标检测对比，快速检测方法与标准方法检测结果一致。结论：所研制的硝苯地平检测卡操作简便、准确性高，检测成本低，是快速分析降压类保健食品中硝苯地平含量的定量检测卡。

降压；保健食品；硝苯地平；试纸；快速

［First-author’s address］ Beijing Biochem Company， Beijing 100020， China.

降压类保健食品中化学成分硝苯地平在不知情时患有冠心病、心绞痛或心肌梗塞的高血压患者持续多次服用后，易引起舌根麻木、头痛、心悸以及窦性心动过速等不良反应。国家食品药品监管总局办公厅2016年发布“总局办公厅关于开展保健食品等三类食品非法添加非法声称问题专项治理工作的通知（食药监办食药监三［2016］68号）”中指出，抽样检验保健食品时重点检验硝苯地平等非法添加药物［1］。

目前，检测硝苯地平（C17H18N2O6）的方法多为高效液相色谱法、液-质联用法、薄层色谱法以及质谱法［2］。诸多方法检测耗时长、操作复杂且对人员专业素质要求高，仅限于实验室检测，几乎不可能在一线现场广泛开展。因此，急需研制一种便携、操作简便及检测成本低的，适合现场快速检测降压类保健食品中非法化学成分鉴定的产品［3-4］。本研究研制一种快速测定降压类保健食品中化学成分硝苯地平含量的检测卡，操作简便，适合在监管一线推广使用。其采用浸泡吸附法处理样品，再将样品处理液滴加到硝苯地平检测卡上，硝苯地平与显色体系反应生成橙红色，可通过目测与标准色阶图谱定性，又可与食品中危害因子及非法添加药物智能化综合检测仪进行定量分析［5-6］。

1　材料与方法

1.1仪器与试剂

（1）仪器设备。DZF6053型真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）；AT261型精密电子天平（METTLER TOLEDO，瑞士）；UB-7型酸度计（德国赛多利斯股份有限公司）；ZQ2000型微电脑自动斩切机（上海金标生物科技有限公司）；XH-C型涡旋混匀器（金坛市自塔新宝仪器厂）；BK-IMT-IV型食品中危害因子及非法添加药物智能化综合检测仪（北京倍肯恒业科技发展股份有限公司）；AB Tripletof 4600型液质联用仪（美国AB公司）。

（2）试剂材料。硝苯地平（100338-201404，中国食品药品检定研究院）、氢氧化钠、碳酸氢钠、烷基糖苷、脂肪醇醚硫酸盐、无水乙醇以及活性炭均属国药集团化学试剂有限公司，分析纯。水为超纯水；材质为定性滤纸。

1.2硝苯地平标准溶液

硝苯地平标准溶液的配制：①准确称取10 g硝苯地平定溶于100 ml丙酮中，得到100 mg/ml硝苯地平的储备液；②准确称取5 g氢氧化钠用双蒸水定容至100 ml，记为5%氢氧化钠溶液；③准确称取10 g烷基糖苷双蒸水定容至100 ml，记为10%烷基糖苷溶液；④准确称取4 g碳酸氢钠双蒸水定容至100 ml，记为4%碳酸氢钠溶液；⑤准确称取2 g脂肪醇醚硫酸盐双蒸水定容至100 ml，记为2%脂肪醇醚溶液；⑥试剂显色剂1由5%氢氧化钠溶液与10%烷基糖苷溶液组成；⑦试剂显色剂2由4%碳酸氢钠溶液和2%脂肪醇醚溶液组成［7-9］。

1.3试纸研制

准确裁取定性滤纸长8 cm，宽8 cm充分浸泡到试纸显色剂1中10 min，将硝苯地平检测试纸基材放在温度为60 ℃的干燥箱中，烘干30 min后晾凉；将硝苯地平检测试纸基材放入试剂显色剂2中浸泡5 min；将浸泡后的硝苯地平检测试纸基材放在温度为-55 ℃低温真空干燥箱中干燥3 h，得到硝苯地平检测试纸。将处理好的试纸按照2 cm×0.4 cm裁剪成小条贴在底板上，制备成硝苯地平检测卡，铝箔袋密封保存，检测卡结构如图1所示。

图1　硝苯地平检测卡示意图

1.4实验方法

1.4.1样品前处理

（1）胶囊类样品前处理。取1粒胶囊内容物于检测管中，加入0.1 g提取剂A和1.5 ml提取液B，震荡摇匀2 min，静置10 min，使用0.45 μm微孔滤膜过滤后，取0.25 ml滤液加入样品稀释液C 0.25 ml，即为待检样品处理液，同时做样品空白实验和样品加标回收实验。

（2）茶叶类样品处理。准确称取0.5 g样品于5 ml试管中，加入0.1 g提取剂A和1.5 ml提取液B，震荡摇匀2 min，静置10 min，用0.45 μm微孔滤膜过滤后，取0.25 ml滤液加入样品稀释液C 0.25 ml、即为待检样品处理液，同时做样品空白实验和样品加标回收实验。

（3）将70 μl的待检液滴加到硝苯地平检测卡观察窗上，15 min后上机检测，读取检测结果。

1.4.2标准曲线绘制

移取100 mg/ml硝苯地平的储备液0、2.5 ml、5.0 ml、10.0 ml、20.0 ml、40.0 ml以及60.0 ml分别置于100 ml容量瓶中，以丙酮定容至刻度线。取70 ul滴加到硝苯地平检测卡观察窗，15 min在食品中危害因子及非法添加药物智能化综合检测仪读取灰阶色度值，以硝苯地平浓度（mg/g）为横坐标，灰阶色度值为纵坐标，绘制标准曲线。

1.4.3样品测定

吸取样品待检液70 ul滴加到硝苯地平检测卡上进行测定。

2　结果

2.1试剂显色剂用量影响

按照硝苯地平标准溶液检测卡的测定方法，改变试剂显色剂1和试剂显色剂2中组分体积比制备硝苯地平检测卡，观察其比例变化对灰阶色度值结果的影响。试剂显色液1对检测卡影响较大，当试剂显色剂1体积比例（V5%氢氧化钠：V10%烷基糖苷）由1～20逐渐升高时，硝苯地平显色灰阶色度值由220.4逐渐升高到584.6后进入平缓期后下降，最终确认试剂显色剂1体积比为10∶1，出现最大灰阶色度值为584.6（如图2所示）。

图2　试剂显色剂1体积比变化与灰阶色度值关系图

当试剂显色剂2体积比例为V4%碳酸氢钠：V2%脂肪醇醚，由0.25～6逐渐升高时，硝苯地平浓度为10.0 mg/g显色后灰阶色度值由473.2升高至569.4，最后平缓降低至521.9，经多次实验确定试剂显色剂2体积比为2∶1时，显色的灰阶色度值最大为569.4（如图3所示）。

图3　试剂显色剂2体积比变化与灰阶色度值关系图

2.2浸泡时间影响

按照硝苯地平标准溶液检测卡的测定方法，对比改变2次浸泡时间，硝苯地平检测卡灰阶色度值的变化。将试剂显色剂1浸泡时间由5 min、6 min、8 min、10 min、20 min及30 min后进行对比，浸泡时间0～10 min，灰阶色度值419.4逐渐升高至575.3，浸泡时间在10～30 min之间时灰度色阶值在575.3～570.4区间，数值相对平稳，故试剂显色剂1的浸泡时间应该是10 min（如图4所示）。

图4　试剂显色剂1浸泡定性滤纸时间变化与灰阶色度值关系图

当试剂显色剂2浸泡时间1 min、3 min、5 min、10 min、15 min以及20 min，浸泡时间在1～5 min时，灰阶色度值由520.1升高至573.9，在10～20 min后灰阶色度值由577.4缓慢升高至586.3。通过数据对比显示，试剂显色液2浸泡最佳时间为5.0 min（如图5所示）。

图5　试剂显色剂2浸泡定性滤纸时间变化与灰阶色度值关系图

2.3第一次烘干温度及烘干时间影响

将第一次浸泡的试纸分为5份，分别在37 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃及80 ℃的5个温度下烘干1 h，在第二次浸泡时间及烘干温度、烘干时间不变的情况下，对比上述5个温度点烘干后的硝苯地平检测卡与浓度为10.0 mg/g的硝苯地平显色后的灰阶色度值。其结果在第一次烘干时间为1 h时，烘干温度为60 ℃时，达到最大灰阶色度值为567.21（如图6所示）。

图6　第一次烘干时间与灰阶色度值关系图

2.4第二次烘干温度及烘干时间影响

将第一次烘干完的试纸基材再次浸泡，在-55 ℃、

25 ℃、37 ℃、50 ℃及60 ℃的5个温度下烘干2 h，对比上述5个温度点烘干后的硝苯地平检测卡与浓度为10.0 mg/g的硝苯地平显色后的灰阶色度值。在-55 ℃的低温真空干燥时有最大灰阶色度值为530.66（如图7所示）。

图7　第二次烘干时间与灰阶色度值关系图

2.5线性范围及检出限

按照硝苯地平标准溶液检测卡的测定方法，将浓度水平为0～60.0 mg/g标准溶液70 μl滴加至硝苯地平检测卡观察窗上，即线性范围为2.5～60 mg/g，其线性方程为Y=11.53X+300.9，R2=0.998，对硝苯地平浓度为0、0.5 mg/g、1.0 mg/g、1.5 mg/g、2.0 mg/g、2.5 mg/g及3.0 mg/g各测试50次，检出限为2.5 mg/g，如图8、图9所示。

图8　硝苯地平浓度与灰阶色度值关系图

图9　硝苯地平标准色阶图谱

将添加低中高浓度硝苯地平的样本，进行标准方法与快检方法（检测卡法）比对，检测卡法添加回收率为95%～110%，标准方法添加回收率为90%～100%，故快检方法的结果与标准方法检测结果相符合，见表1［11］。

表1　标准方法与检测卡法检测硝苯地平结果比对 (mg/g)

3　结论

本研究参照2015药典［12］方法，经过工艺改良，率先成功研制了保健类食品硝苯地平快速定量检测卡，弥补了市场保健类食品化学成分快速检测方法的空缺。硝苯地平检测卡与食品中危害因子及非法添加药物智能化综合检测仪配合对降压类保健食品进行定量分析，硝苯地平检测卡的准确度、检测限及加标回收率等同于液-质联用检测方法。硝苯地平检测卡拥有便携、操作步骤简单等优点，并可避免快检过程中容易出现的漏检和误检情况，因此更适合于执法部门现场快速鉴定降压类保健食品中硝苯地平成分。

［1］食品药品监管总局（食药监办食药监三［2016］6号）关于开展保健食品等三类食品非法添加非法声称问题专项治理工作的通知［S］.食品药品监管总局，2016-05-23.

［2］查道仁.HPLC法测定二十五味阿魏胶囊中非法添加卡托普利、氯氮、盐酸异丙嗪、硝苯地平的含量［J］.安徽医药，2014，18（9）：1653-1655.

［3］谢耀轩，梁智渊，刘吉金，等.降压中药制剂中非法添加硝苯地平检测方法的研究［J］.中国当代医药，2010，17（6）：44-45.

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［5］叶丹怡，朱敏.HPLC/MS定性定量检测清脑保心康胶囊中非法添加的硝苯地平［J］.中外食品工艺，2015（1）：11-12.

［6］王铁松，仝禹，郑洁，等.薄层色谱法快速筛查降脂、降压、止咳平喘类中药制剂中的29种添加化学药物［J］.中国药物杂志，2010，45（11）：857-861.

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［8］周艳，单永洋.检查心脑康胶囊中非法添加硝苯地平的方法研究［J］.安徽医药，2010，14（10）：1155-1156.

［9］刘吉金.降压保健品及中成药中非法添加化学成分的快速检测方法研究［J］.中成药，2008，30（1）：144-146.

［10］吴公平，雷玉萍，黎银波，等.辅助降压类保健品中非法添加化学药品的快速筛选方法［J］.中国药业，2010，19（14）：42-43.

［11］国家食品药品监督管理局.药品检验补充检验方法和检验项目批准件2009032［A］.国家食品药品监督管理局，2011-11-08.

［12］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：北京医药科技出版社，2015.

The development of rapid detection card of the second hydrogen pyridine class nifedipine in health food ?

YAO Shi-ping， LIU Guang-zhong， YAO Hong-tao， et al

China Medical Equipment，2016，13（9）:16-19.

Objective: To develop a rapid inspection card to detect chemical composition of nifedipine in health food of antihypertensive class. Methods: The health food of antihypertensive class was disposed by soaking adsorption method to extract the nifedipine drops to the test card orange-red quinoid structure on the reaction. According to theory of reflection spectrum， The harmful factors in food drugs and illegal add intelligent integrated detector to measure color grayscale value with curve method of quantitative standard. Results: The various interference factors were disappeared by the targeted sample pretreatment method， so the test linear was in 2.5 mg/g-60.0 mg/g， the regression equation was Y=11.53X+300.9， the correlation coefficient was 0.998， the detection limit was 2.5 mg/g， the relative standard deviation was respectively 2.56%， and the standard addition recovery was 95-110%. Compared nifedipine test card with liquid chromatograph-MASS AB Tripletof 4600 for the same sample， the results were the same. Conclusion: The development of nifedipine test card is easy to operate， and the accuracy is high and the detection cost is low. It can analyze nifedipine content quickly in the health food of antihypertensive class.

Antihypertensive； Health food； Nifedipine； Test paper； Fast

1672-8270（2016）09-0016-04

R446.1

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.09.005

2016-06-20

①北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 北京 100020

yaohongtao@biochemgroup.net

姚世平，男，（1963- ），硕士，高级工程师。北京倍肯恒业科技发展股份有限公司董事长兼总裁，从事医疗装备、食品安全和药品检测工作。