微小RNAs在糖尿病肾病中的意义评价

洛阳职业技术学院（471300）王玉霞 王慧敏 申绯翡

中国人民解放军96531部队医院（471300）崔华胜

1 资料和方法

糖尿病是一种“富贵病”，随着饮食习惯的改变，具有较高的发病率，易对机体产生弥漫性的损伤，伤害全身多个系统，产生较多的并发症[1]。由于长期注射胰岛素及服用其他的降糖药物，其中极易损伤人体肾脏，促使糖尿病患者并发肾病。糖尿病肾病（diabetic nephropathy，简称DN），又名为糖尿病肾小球硬化症[2]。患者的早期症状并不是很明显，易与其它病症混淆，一旦发现临床已难以控制，易进展为肾功能衰竭甚至死亡。目前针对DN患者的临床治疗以控制血糖和血压为主要方式，但是其临床疗效欠佳，虽然可以延缓病情的进展，但不能终止病情的进展。因此，为了更好地明确糖尿病肾病的进展情况，本文旨在糖尿病肾病患者的临床诊断过程中，评价应用微小RNAs的临床意义，为DN患者的临床治疗奠定基础，详细报道如下。

1.1 一般资料 选择2013年6月～2014年12月期间收治的诊断为糖尿病肾病患者39例，作为本研究的试验组。其中，男性和女性患者各23例和16例；患者年龄49～75岁，平均年龄（56.12±4.76）岁。同时抽取来我院体检的健康人39例，以此作为本研究的对照组，患者年龄在48～73岁之间，平均年龄（55.8±9.2）岁。对比两组患者的一般资料，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 采集标本 所有患者的采血于清晨空腹状态下进行，抽取2mL的外周静脉血，1小时内离心，取上层液离心5min，再吸取上层液置于-80℃，以备检测。

1.2.2 miRNA芯片制备：采用 miRNA TaqMan Low Density Array芯片对所有患者的血清样本进行分析。

1.2.3 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)：①提取总RNA；②合成cDNA；③PCR。

1.3 统计学>方法 采用SPSS17.0软件对所有研究数据进行统计学处理，各项测定指标结果的显著性检验采用T检验，以P＜0.05差异显著，具有可比性。

附表 两组患者血清中miRNA的表达水平

2 结果

2.1 miRNA的筛选 通过检测基因芯片发现，在试验组患者中，表达升高的基因共有158个，表达降低的基因共有150个，根据基因的表达水平从中筛选出miR-150-5p、miR-155-5p、miR-30e-5p和miR-3196作为本研究的后续实验。

2.2 两组患者血清中miRNA的表达水平 通过qRT-PCR检测两组患者血清中miRNA的表达水平发现，四种miRNA在试验组患者血清中的表达水平显著高于正常健康人的对照组，差异显著，有统计学意义(P＜0.01)，详情见附表。

2.3 分析血清中miRNA的表达水平与患者临床参数相关性 通过分析试验组患者血清中miRNA的表达水平与患者临床参数相关性发现，miR-155-5p和 miR-150-5p与患者的eGFR呈明显的正相关，但是与患者的尿蛋白排泄率呈负相关（P＜0.05）。

3 讨论

在糖尿病患者的并发症中，约有20%～40%的DN患者。DN的病因较为复杂，其肾为DN的主要病位，病情的日益发展可逐渐累及心、脾、肝等其他脏器[3]。在DN的临床治疗中，现有的治疗方案仅仅延缓了患者进展为肾衰竭，但是无法逆转病情的进展。因此，完全阐明DN的发病机制，干预其发病的关键环节，提出治疗的新靶点，防止病情的恶化，有利于患者良好的预后[4]。

微小RNAs是广泛存在于动植物体内的单链非编码RNA，共包含21～24个核苷酸[5]。其通过结合互补的非编码区的碱基，抑制或是降解mRNA，从而调控基因的表达水平。近些年，多项研究表明在DN的发生发展过程中，微小RNAs是治疗的新靶点。

在本研究中，通过qRT-PCR检测了两组患者血清中miRNA的表达水平发现，四种miRNA在试验组患者血清中的表达水平显著高于正常健康人的对照组，差异显著，有统计学意义(P＜0.01)。进一步分析其与试验组患者临床参数相关性发现，miR-155-5p和miR-150-5p与患者的eGFR呈明显的正相关，但是与患者的尿蛋白排泄率呈负相关（P＜0.05）。这是因为miR-30e-5p和miR-3196在DN的早期病变中起重要的调控作用。此外，miR-150-5p和miR-155-5p在DN患者的血清中呈高表达，与患者的eGFR和尿蛋白排泄率密切相关，可作为DN进展的预测指标。

综上所述，在糖尿病肾病患者的临床诊断过程中，应用微小RNAs准确诊断患者病情的轻重程度，早期诊断价值高，应广泛推广。