不同采收期枳实促胃肠动力作用及其辛弗林含量的比较研究

2016-10-17 10:14邓敏芝邓可众吴华强
中国民族民间医药 2016年17期
关键词:枳实采收期小肠

邓敏芝 邓可众 陈 虹 吴华强 熊 英

江西中医药大学,江西 南昌 330004



不同采收期枳实促胃肠动力作用及其辛弗林含量的比较研究

邓敏芝邓可众陈虹吴华强熊英*

江西中医药大学,江西南昌330004

目的:比较不同采收期枳实促胃肠动力作用及辛弗林含量的差异。方法:使用不同采收期枳实的提取物对正常小鼠连续灌胃7d,测定在体小肠碳末推进率和胃残留率;利用HPLC测定辛弗林的含量。结果:不同采收期枳实中辛弗林含量以及对正常小鼠的小肠推进作用均存在一定差异,但辛弗林含量的高低与小肠推进作用并不呈线性相关。结论:枳实促胃肠动力可能是其中多种成分协同作用的结果,枳实药材宜增加相关活性成分分析建立多指标质量控制方法。

枳实;辛弗林;胃肠动力;不同采收期

枳实来源于芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培变种或甜橙C.sinesisOsbeck 的干燥幼果[1],江西是枳实的道地产区之一,而江西新干县、樟树等道地产区资源调查表明,江枳实的基源植物主要为酸橙。目前,中国药典以辛弗林含量作为枳实药材质量控制的定量指标。文献分析不同品种如酸橙和甜橙、不同产地如江西、四川、湖南及福建枳实药材中的辛弗林含量差异较大[2],炮制方法和采收时间也有显著影响[3],且随着果实的逐步发育成熟,辛弗林的含量呈降低趋势[4-5]。关于辛弗林含量测定方法的文献研究也屡见报道,如2D-HPLC[6]、固相萃取-HPLC等[7]。枳实为常用理气类中药,研究表明枳实水煎液和辛弗林能促进正常小鼠小肠推进[8-9],枳实还可改善功能性消化不良大鼠的胃排空[10]。

采收时间是影响中药材质量的重要因素之一,酸橙在每年春季5月初开花,5月中下旬至6月下旬自然脱落的幼果作为药材枳实,至7月初果皮尚绿时的未成熟果实则当作枳壳药用;部分植株在秋季可二次开花结果,其幼果也被当作枳实销售。不同采收期枳实药材的大小较为悬殊,从小到大依次称为鸡眼枳实、鹅眼枳实、小片、中片及大片。这些枳实均在市场上销售、使用,然在在药效方面是否存在显著性差异尚未见文献报道,秋季枳实中的成分和药效等各方面亦无相关研究。本实验观察不同采收期枳实对在体小鼠小肠碳末推进率和胃残留率的差异,并结合HPLC测定相应的辛弗林含量进行对比分析,为制定适宜采收期及完善质量标准提供依据。

1 仪器与材料

1.1药材2014年采集于江西省樟树市昌傅镇下余村,1~4号分别为5月下旬、6月中旬、6月下旬及10月中旬采收,经鉴定为芸香科植物酸橙C.aurantiumL.的幼果。

1.2动物清洁级昆明种小鼠50只,体重 20~25 g,雄性,由江西中医药大学阳明实验动物中心提供,许可证号:SCXK(赣)2011-0001。1.3仪器Agilent 1260 高效液相色谱仪(G1311C四元泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G4212B DAD检测器、Agilent 1260LC化学工作站,美国Agilent Technologies公司),METTLER TOLEDO XS3DU百万分之一电子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)。

2 小肠推进及胃排空作用的实验方法与结果

2.1药物的制备分别称取枳实药材适量,粉碎为中粉,加入适量蒸馏水,水煎煮提取2次,每次30min,合并滤液并浓缩,制成每1mL相当于1g原药材的提取液。

2.2给药及指标测定50只小鼠随机分为5组,每组10只,即4个枳实样品组和空白对照组。样品组小鼠按4g/Kg分别给予不同产地枳实提取物,空白组给予等体积生理盐水。连续灌胃给药7d,每日1次。末次给药后,动物禁食12h,小鼠灌胃给予炭末混悬液0.5mL (2%CMC-Na和5%炭末),20min后处死动物,剖腹取出上端自幽门、下端至回盲部的肠管,铺直后测量幽门至回盲部全长(小肠总长度)及幽门至炭末前沿的距离(炭末推进长度),计算小肠推进百分率;结扎上述小鼠的胃贲门和幽门,取滤纸拭干后称全重,然后沿胃大弯剪开胃体,洗去胃内容物后用滤纸拭干,称取胃净重,胃全重和胃净重差值为胃内残留物重,并计算与所灌炭末混悬液质量的百分比为胃残留率。

2.3统计学方法数据采用SPSS 22.0统计软件进行统计分析,计量资料采用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。

2.4结果由表1可知,样品组碳末小肠推进率均大于空白组,其中1、3号枳实组的小肠推进率与空白组比较有统计学差异(P<0.05)。不同采收期枳实的碳末小肠推进率同样存在一定差异性,1号和2号、4号之间存在存在统计学差异(P<0.05)。所有样品组的胃残留率和空白组比较均无统计学差异(P>0.05)。

表1 不同采收期枳实对正常小鼠小肠推进作用、胃排空的影响 ±s)

注:与空白组比较,*P<0.05;与2号、4号比较,#P<0.05。

3 HPLC测定辛弗林的方法与结果

3.1色谱条件与系统适用性色谱柱:TSK-GEL ODS(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(25∶75,水中加0.1%磷酸和0.1%SDS);流速:1.0mL/min,柱温:30℃;进样量:20μl;检测波长:275nm;理论塔板数>15000。对照品及样品色谱图见图1。

3.2对照品溶液的制备精密称取辛弗林适量,加甲醇溶解于容量瓶中配制成693.00 μg/mL浓度的对照品溶液。

3.3样品溶液的制备取药材中粉适量,精密称定,按2015版中国药典一部枳实项下含量测定相同方法进行制备[1]。3.4线性关系的考察将配置好的母液稀释成693.00、346.50、173.25、86.63、43.31、21.66、10.83、5.41、2.71μg/mL等一系列浓度梯度的对照品溶液。按照“3.1”项下的色谱条件进样20μl测定,计算峰面积Y与浓度X的线性方程、检测限及定量限,得回归方程:Y=4.2843X+5.2456(r=0.9998),在2.71~693.00μg范围内线性关系良好,检测限为1.31μg/mL,定量限为4.36μg/mL。

3.5精密度试验取对照品溶液,按“3.1”项下色谱条件下连续进样6次,计算辛弗林峰面积的RSD为0.49%,表明精密度良好。

3.6稳定性试验取同一供试品溶液(2014年5月下旬采集于江西新干县,批号:S9),分别于0、2、4、6、8、24 h时进样,结果,辛弗林峰面积的RSD为1.07%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

3.7重复性试验精密称取同一份样品适量6份(批号:S9),按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“3.1”项下色谱条件进样检测,辛弗林含量的RSD为1.95%。表明该方法重复性良好。

3.8回收率试验称取枳实粉末(批号:S9)0.5g 6份,精密加入一定量的辛弗林对照品溶液,按“3.2.2”项下制备供试品溶液,同上分析条件测定含量并计算加样回收率。结果见表2。

表2 回收率试验结果 (n=6)

3.9样品含量测定取不同采收期枳实药材的水提物,按“3.2.2”项下方法平行制备2份供试品溶液,同以上色谱条件进样分析,结果见表3。

表3 样品含量测定结果 (%,n=2)

由含量测定结果可知,不同采收期包括秋季采集江枳实中辛弗林含量均符合2015版药典标准(>0.3%),其中以5月底收集的样品辛弗林含量为最高,随果实生长其中所含辛弗林呈逐步下降趋势,在采收末期6月下旬下降约为一半;药理实验表明枳实的水提物对正常小鼠小肠具有明显的推进作用,对正常小鼠胃排空无明显影响,不同采收期枳实对正常小鼠小肠的推进作用也存在一定的差异性,以5月下旬收集样品的活性最强,6月中旬、下旬收集样品和秋季枳实对正常小鼠小肠的推进作用虽有所减弱,但辛弗林含量最低的6月下旬采集样品的小肠推进作用并非为最弱,二者对比分析,枳实对正常小鼠的小肠推进作用与其中辛弗林含量的变化趋势并不完全呈线性相关。

4 讨论

不同采收期枳实中辛弗林的含量以及对正常小鼠小肠的推进作用均有明显差异,5月下旬收集枳实中辛弗林含量高且活性强,但此时果实极小,直径仅约0.5 cm左右,6月底采收的枳实直径最大,约2~2.5 cm,虽含量最低但活性较好,根据对正常小鼠小肠的推进作用及药材大小分析,枳实在5月下旬或者6月下旬采收较佳。

前期研究及文献报道表明枳实中化学成分除辛弗林外,还含有较多的黄酮类如新橙皮苷、柚皮苷以及香豆素类如马尔敏、水合橙皮内酯,其中,新橙皮苷的含量可高达20%以上[11-12],而且枳实黄酮和香豆素均有胃肠动力作用[13-14]。因此药典标准中枳实药材仅以辛弗林为定量指标的质控标准尚需进一步完善,建议建立生物碱、黄酮以及香豆素类多指标性成分分析的质量评价方法。

[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京:中国医药科技出版社,2015:247.

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(编辑:程鹏飞)

Comparative Study of Synephrine and Gastrointestinal Motility of Aurantii Fructus Immaturus in Different Harvesting Stage

DENG MinzhiDENG KezhongCHEN HongWU HaqiangXIONG Ying*

Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004,China

Objective Study on effects of different harvesting stage on synephrine and gastrointestinal motility of Aurantii Fructus Immaturus. Methods The mice were administered with aqueous extract of Aurantii Fructus Immaturus for 7 days, then gastric residue rate and small intestine advancing rate were detected; The content of synephrine were measured by HPLC. Results Aurantii Fructus Immaturus at different collecting times has different amounts of synephrine and the small intestinal propulsive function. Furthermore, the relationship between content of synephrine and the small intestinal propulsive function is not co-linear. Conclusion The pharmacological action possible is the results of many bioactive ingredients together and more bioactive ingredients in Aurantii Fructus Immaturus should be used as the index of quality control.

Aurantii Fructus Immaturus; Synephrine; Gastrointestinal Motility; Different Harvesting Stage

2016-06-16

国家自然科学基金资助项目(81260621)。

邓敏芝(1990-),女,汉族,硕士研究生,主要从事中药品质评价。E-mail:dmzsunflower@163.com

熊英(1975-),女,汉族,副教授,博士,主要从事中药活性成分研究。E-mail:jzxiongying@126.com

R284.1

A

1007-8517(2016)17-0014-04

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