HPLC法测定复方青蒿安乃近片中青蒿素的含量

天津市宝坻区药品检验所（301800）王海凤 李季静

复方青蒿安乃近片是由安乃近、马来酸氯苯那敏、青蒿、马鞭草、羌活、南板蓝根、葛根、毛冬青、石膏组成的复方制剂，主要用于发热、鼻塞、咽喉肿痛、咳嗽、四肢酸痛及流行性感冒引起的症状。现代药理研究表明青蒿具有抗菌、消炎、镇咳和祛痰的作用[1]。为更好地控制该制剂的质量，采用HPLC法测定青蒿素的含量，为该制剂的质量控制提供了依据。

1 仪器、试剂及试药

HPLC LC-2010CHT(日本岛津)高效液相色谱仪；电子天平AB265-S(梅特勒)。乙醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯；青蒿素购自中国药品生物制品检定所，批号：100202-201505。

2 实验方法与结果

2.1 色谱分析条件 色谱柱：phenomenex C185μm×250 mm×4.6mm；流动相：甲醇-0.01mol／L磷酸二氢钠/磷酸氢二钠缓冲液(60∶40)；流速：1.0ml/min，检测波长：260nm，柱温：25℃，进样量5μl。

2.2 标准曲线测定 精密称取青蒿素对照品25.01mg，置25ml量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，摇匀分别精密吸取上述溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0m1分别置10ml量瓶中，补充乙醇至1ml，加4.0ml0.2%氢氧化钠溶液摇匀，于50℃水浴中反应30min。冷却至室温，加0.4%冰醋酸至刻度，摇匀，精滤。分别精密量取上述对照品溶液各5μ1，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行实验。色谱图见附图1，结果见附表1。

附图1 青蒿素对照品HPLC图谱

附图2 样品含量测定HPLC图谱

以进样量A(μ g)为横坐标，测得的峰面积积分值C为纵坐标绘制标准曲线，得一过原点的直线，回归方程为：A=3536372.091C+84117.6,r=0.9994；结果表明，在此色谱测定条件下，青蒿素在进样量为0.1012～2.024μg范围内，其色谱峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.3 供试品溶液的制备 取本品数片，研细，精密称定10g，加入75%乙醇100ml，密塞，精密称定，45℃水浴加热回流1.5h，取出样品，振摇、冷却,称定重量，用75%乙醇补足减失的重量，过滤，精密量取滤液0.5ml置10ml量瓶中，补充乙醇至1ml，加4.0ml0.2%氢氧化钠溶液摇匀，于50℃水浴中反应30min。冷却至室温，加0.4%冰醋酸至刻度，摇匀，精滤，即得。

2.4 精密度试验 取同一批号复方青蒿安乃近片样品溶液，连续进样5次，按上述拟定的色谱方法测定样品中青蒿素的含量，结果见附表2。由上述结果可以看出，此方法测定本品中青蒿素的含量，仪器精密度较好。

2.5 重复性试验 平行取6份样品(同一批号复方青蒿安乃近片样品)，按供试品溶液制备方法制得，并按上述拟定的色谱方法测定样品中青蒿素的含量，结果见附表3。由上述结果可以看出，此方法测定本品中青蒿素的含量，重复性良好。

2.6 回收率试验 取已知含量的本品(2.012/片)1g，共取6份，精密称定，分别精密加青蒿素对照品溶液(浓度为1.0g/m1)，按上述拟定的供试品溶液的制备方法制备。按上述拟定的青蒿素含量测定方法测定，计算6次平均回收率为98.39%，RSD值为1.09%。结果表明用此方法测定样品中青蒿素含量的方法专属性强。

2.7 样品含量测定 按照“2.3供试品溶液制备方法”进行制备，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，进样，按上述色谱条件测定，结果测得样品每片青蒿素的含量均大于2.0mg，色谱图见附图2。

附表1 青蒿素含量测定线性关系试验结果

附表2 复方青蒿安乃近片中青蒿素含量测定精密度试验结果

附表3 复方青蒿安乃近片中青蓠素含量测定重复性试验结果

3 讨论

青蒿素是我国科学工作者从青蒿中分离出来的含有过氧桥的新型倍半萜内酯，其化学结构完全不同于喹啉类药物，具有速效、高效和低毒的抗疟性能，对凶险型疟疾和抗氯喹株的患者疗效更为显著[2]。国内对于青蒿素的提取也进行了大量研究,借鉴前期研究基础和相关文献报道[3]。综合考虑安全性、低毒性、廉价性和环保性，本文选用了乙醇作为提取溶剂。

由于青蒿素仅在紫外区203nm处有较弱的末端吸收，但与碱反应后，产生一化合物(Q292)，该物质在292nm处有最大吸收，然而，由于反应后有无机碱存在，易损坏色谱柱，不适宜直接进样测定。但化合物Q292在pH5.58～6.04条件下，又可定量地转化为化合物Q260，该物质在260nm处有最大吸收，可以用于做HPLC测定[4]。本文经大量试验探索建立了复方中青蒿素含量HPLC的测定方法，研究结果表明，本方法简便，准确，重复性好，可应用于生产过程中的质量控制。