HPLC法测定决明降脂片中大黄酚、橙黄决明素的含量

天津市宝坻区药品检验所（301800）王海凤

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：LC-2010CHT(日本岛津)；AG135型电子天平。大黄酚对照品（批号：110796-201520，含量99.2%）、橙黄决明素对照品（批号：111900-20150，含量97.5%）中国药品生物制品检定所，样品(市售)；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：phenomenex C185μm×250 mm×4.6 mm；以乙腈为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B。按附表规定进行梯度洗脱；柱温：30℃；检测波长：284 nm；流速：1.0ml/min；进样量10μl。

2.2 对照品溶液的制备 对照品溶液：取大黄酚对照品15mg、橙黄决明素对照品10mg，分别置50ml量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）定容，得贮备液。取

1ml置10ml量瓶制成每1ml含大黄酚30μg、橙黄决明素20μg的混合对照溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，加稀盐酸30ml，置水浴上加热水解l小时，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液使溶解，转移至25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液5、10、15、20、25μl测定，以进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。橙黄决明素Y=71455X+5224，r=0.9999，在0.10～0.50μg范围内线性关系良好；大黄酚Y=4441092.00x+3196.40，r=0.9997，在0.15～0.75μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，橙黄决明素峰RSD=0.86%；大黄酚峰RSD=0.91%，结果表明精密度良好。

2.6 稳定性试验 分别精密吸取同一供试品溶液10μl，于0、2、4、8、12、24 h 注入液相色谱仪，大黄酚峰面积的RSD=0.98%，橙黄决明素峰面积的RSD=0.76%。表明供试品在24h内基本稳定。

附表 梯度洗脱表

2.7 重复性试验 取同一供试品6份，按“2.3”的方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件进行测定。结果大黄酚的平均含量为0.316mg/片，RSD=1.02%，橙黄决明素的平均含量为0.462mg/片，RSD=0.95%。表明该方法重复性良好。

2.8 回收率试验 精密称取已知含量的供试品6份，分别精密加入一定量对照品制备供试品溶液，依次进样测定，计算加样回收率。结果大黄酚和橙黄决明素的加样回收率分别为99.3%，100.7%，RSD分别为1.16%，1.68%。

2.9 样品含量测定 取3批样品，按“2.3”方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，测定这三批供试品中大黄酚平均含量为0.331 mg/片，橙黄决明素的平均含量为0.458mg/片。

3 小结

溶剂和检测波长的筛选根据《中国药典》（2015版）中药材及饮片决明子项下大黄酚和橙黄决明素的含量测定中规定选择无水乙醇一乙酸乙酯(2∶1)作为样品溶剂，检测波长为284nm，故采用无水乙醇一乙酸乙酯(2∶1)作为溶剂；检测波长为284nm。

上述色谱条件下，高效液相色谱法测定决明降脂片中大黄酚、橙黄决明素的含量，线性关系良好，精密度高，稳定性好，准确可靠，故该高效液相色谱法可以用于决明降脂片中大黄酚、橙黄决明素的定量分析。