HPLC测定天地从容酒中松果菊苷的含量

周海燕，田壮，李聪，郭凯，肖苏萍

(1.中国中药公司，北京 100195；2.国药控股北京有限公司，北京 100077)

·健康产业·

HPLC测定天地从容酒中松果菊苷的含量

周海燕1*，田壮1，李聪2，郭凯1，肖苏萍1

(1.中国中药公司，北京100195；2.国药控股北京有限公司，北京100077)

目的：建立天地从容酒的质量控制方法。方法：采用HPLC法，以C18为色谱柱，流动相为甲醇-0.1%甲酸，梯度洗脱；体积流量为1.0mL·min-1；检测波长为330nm；柱温为35℃。结果：松果菊苷在0.0255～0.612mg·mL-1范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系，r=0.9999；平均回收率为100.59%，相对应的RSD为1.90%；该方法精密度、重复性、稳定性均良好，RSD均小于2.1%。结论：该法简便准确，重现性好，灵敏度高，可用于天地从容酒中松果菊苷含量的质量控制。

HPLC；松果菊苷；天地从容酒

天地从容酒是中国中药公司的自主研发产品，选用管花肉苁蓉、西洋参、枸杞子、黄精、红花为原料，以清香型白酒为酒基，经渗漉法提取、调配、静置、低温陈酿、微孔过滤、灌装等主要工艺加工制成的保健酒。经动物功能试验证明，具有缓解体力疲劳的保健功能。主要原料管花肉苁蓉，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效，开始收载于2005年版《中国药典》作为肉苁蓉正品使用[1]。管花肉苁蓉分布于新疆南疆，资源比较丰富，易人工种植，目前已成为市场上肉苁蓉的主流品种；作为药食两用品在新疆南疆地区使用具有悠久历史，尤其是作为补肾壮阳药应用十分广泛，在传统滋补方中出现的频率仅次于人参，被称为“沙漠人参”[2]。肉苁蓉的主要活性成分是苯乙醇苷类化合物，而松果菊苷(echinacoside，ECH)在此类化合物中含量最大[2-4]。研究表明，ECH具有较好的神经保护的作用，有抗衰老、提高记忆力、调控细胞凋亡等功效，并兼有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、保护肝脏、提高免疫的作用[5-6]。本文选择管花肉苁蓉中的松果菊苷作为含量测定的指标成分，建立高效液相色谱法监控保健酒质量的方法，为天地从容酒的质量控制及保健酒研发提供参考。

1 仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪(waters2695，美国)；二极管阵列检测器(waters2998PDA，美国)；TB-215D电子分析天平(美国丹佛)。

1.2试药

天地从容酒(批号分别为20140201、20140202、20140203)；松果菊苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号111670-201304)。甲醇为色谱纯(美国，fisher公司)，其他试剂均为分析纯，水为纯净水。

2 方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验[7]

色谱柱：C18色谱柱(AgilentZORBAXSBC18250mm×4.6mm，5μm)；流动相：以甲醇为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；流速：1.0mL·min-1；检测波长：330nm；柱温：35℃；进样量：10μL。理论板数按松果菊苷峰计算应不低于3000。

表1 流动相梯度洗脱比例

2.2对照品溶液的制备

取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL含0.51mg的溶液。

2.3供试品溶液的制备

精密量取天地从容酒5mL，置50mL棕色容量瓶，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性样品溶液的制备

按本品处方比例称取除肉苁蓉外的其余中药适量，依照制备工艺制成缺肉苁蓉的阴性样品，按2.3方法制备阴性样品溶液。

2.5线性关系考察

取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇分别稀释成浓度为0.0255、0.051、0.102、0.204、0.306、0.408、0.51、0.612mg·mL-1，摇匀。分别精密吸取上述溶液，按2.1项下色谱条件测定峰面积，以松果菊苷峰面积为纵坐标(Y)，对照品浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，得松果菊苷回归方程为Y=13007779X-210261，r=0.9999。结果表明，松果菊苷在0.0255～0.612mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.6专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按2.1色谱条件进行测定，记录色谱图。在此色谱条件下松果菊苷与其他峰达到基线分离，阴性对照溶液没有干扰，专属性强。对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液色谱图见图1-3。

图1 标准品松果菊苷色谱图

图2 样品中松果菊苷色谱图

图3 阴性对照溶液色谱图

2.7精密度试验

精密吸取同一供试品溶液10μL(批号：20140201)，按2.1项下色谱条件连续进样6次，计算峰面积的RSD值为1.59%，表明精密度良好。

2.8稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液10μL(批号：20140201)，分别在制备后第0、3、6、9、12、18、32h进样测定，计算峰面积的RSD值为1.41%，表明供试品溶液在32h内稳定。

2.9重复性试验

取同一批号供试品(批号：20140201)，按2.3方法平行制备6份供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定。松果菊苷峰面积的RSD值为2.01%，表明本方法重复性良好。

2.10加样回收试验

精密量取已知含量的同一批号供试品(批号：20140201)6份，每份2.5mL，分别精密加入一定量的松果菊苷对照品溶液。按2.3方法操作，分别吸取供试品溶液各10μL，按2.1色谱条件测定松果菊苷的含量，计算加样回收率，结果见表2。

表2 松果菊苷加样回收试验

2.11样品测定

取天地从容酒样品3批，分别按2.3项下制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，每个批号平行3份，每次进样2次。结果见表3。

表3 天地从容酒3批的检测结果

3 讨论

松果菊苷是苯乙醇苷类化合物，极性较大，易溶于强极性溶剂，本文考察了水、乙醇和50%甲醇3种溶剂对松果菊苷的提取效果。结果表明50%的甲醇提取效果最好，指标成分含量最高。

通过全波长扫面法发现，其最大吸收波长为330nm，这和《中国药典》2015年版一部“肉苁蓉”含量测定项下的一致，故其为本法的检测波长。

本研究建立了HPLC测定天地从容酒中松果菊苷的含量。方法学考察结果表明，本方法专属性强、精密度高、重复性好、简单易行，可用于控制保健酒中松果菊苷的质量检测。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：化学工业出版社，2005：90.

[2] 宋海龙，贾晓光，谢海辉.管花肉苁蓉化学成分研究进展[J].新疆中医药，2010，28(1)：76-78.

[3] 蔡鸿，鲍忠，姜勇，等.不同产地管花肉苁蓉中有效成分的定量分析[J].中草药，2007，38(3)：452-455.

[4] 刘泰然，赵海燕，罗仁才.高效液相色谱法测定保健食品中松果菊苷[J].中国卫生检验杂志，2012，22(10)：2328-2332.

[5] 魏丽丽，陈红，姜勇，等.高效液相色谱测定松果菊苷在脑缺血大鼠血浆和脑组织中的浓度[J].中国药理学通报，2011，27(5)：737-738.

[6] 张英涛，王弘，刘文芝，等.松果菊属药用植物的应用基础研究[J].北京大学学报(医学版)，2004，36(1)：90-93.

[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：135.

DeterminationofEchinacosideinTiandicongrongSpiritbyHPLC

ZHOUHaiyan1*，TIANZhuang1，LICong2，GUOKai1，XIAOSuping1

(1.ChinaNationalTraditionalChineseMedicineCorp.，Beijing100195，China；2.SinopharmGroupBeijingCo.，Ltd.，Beijing100077，China)

Objective：To establish a method for quality control of Tiandicongrong Spirit.Methods：HPLC was performed on C18column at35℃ with detection wavelength at330nm，using methanol-0.1% methane acid as mobile phase at a flow rate of1.0mL·min-1.Results：A good linear relationship is obtained between0.0255mg·mL-1to0.612mg·mL-1of echinacoside (r=0.9999).The recovery is100.59%(RSD=1.90%).Conclusion：A reversed-phase high performance liquid chromatographic method，which is relatively simple，rapid and effective for echinacoside determination in Tiandicongrong Spirit，has been developed.With this method，the peak of echinacoside could be separated completely from other interfering components in the spirit.

HPLC；echinacoside；Tiandicongrong Spirit

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.028

2016-07-05)

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周海燕，副主任药师；研究方向：中药质量评价和新产品开发；E-mail：zhouhaiyan@sinopharm.com