正交试验法优选复方白芍肠康颗粒提取工艺

陈锋，严常开，张进

(1.湖北中医药大学 药学院，湖北 武汉 430065；2.马应龙药业集团股份有限公司，湖北 武汉 430064)

正交试验法优选复方白芍肠康颗粒提取工艺

陈锋1，2，严常开2*，张进2

(1.湖北中医药大学 药学院，湖北 武汉430065；2.马应龙药业集团股份有限公司，湖北 武汉430064)

目的：优选复方白芍肠康颗粒提取工艺。方法：以芍药苷含量及干膏率为评价指标，通过正交试验考察加水量、煎煮时间、煎煮次数对水提工艺的影响；以厚朴酚含量及干膏率为评价指标，通过正交试验考察乙醇提取分数、乙醇用量、提取时间和提取次数对醇提工艺的影响。采用HPLC测定芍药苷、厚朴酚的含量。结果：最佳水提工艺为10倍量水，提取2次，每次1.5h；芍药苷提取量为24.28mg·g-1，干膏率为34.05%；最佳醇提工艺为8倍量60%乙醇，提取2次，每次1.5h；厚朴酚提取量为13.07mg·g-1，干膏率为19.71%。结论：优选的提取工艺稳定可行，为复方白芍肠康颗粒的合理开发提供参考。

芍药苷；厚朴酚；复方白芍肠康颗粒；溃疡性结肠炎；正交试验；提取工艺

白芍肠康汤为临床经验方，由白芍、厚朴、吴茱萸、延胡索、甘草等11味药组成，具有健脾益气、清热利湿、泻火解毒、厚肠止泻之功，主治溃疡性结肠炎。近年来，在精神、饮食和环境等各种因素的影响下，溃疡性结肠炎在我国的发病率明显增加，该病发病机制尚未明确，其具有易癌变、迁延难愈等特点，现已成为影响现代人生活质量的重要病症。目前，尚无特效药上市。白芍肠康汤自今已有二十多年的临床应用经验，疗效确切、安全性高。但汤剂存在剂量大、携带不便等不足，本研究拟将其研制成颗粒剂，以提高患者服药的依从性，便于服用、携带和贮存[1-3]。为保证复方白芍肠康颗粒中各有效成分充分溶出，根据各药味的理化性质及药理作用[4-9]，确定方中白芍等药味水提，厚朴等药味醇提，采用正交试验优选提取工艺。

1 仪器与试药

SPD-20A型高效液相色谱仪(日本岛津)；StarsoriusBP211D、BS210S型电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)；热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；KQ3200E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

本实验所用药材均由安徽亳州提供，符合2010年版《中华人民共和国药典》一部相关规定；芍药苷、厚朴酚对照品(中国药品检定研究院，批号分别为110729-200412，110736-200628)；甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1干膏率的测定

精密吸取浓缩液10mL，置已干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105℃烘箱中干燥至恒重，精密称重，计算干膏率。

2.2芍药苷的含量侧定

2.2.1色谱条件Ultimate®XB-C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脱程序依次为0～8minA∶B为19∶81；8～35minA∶B为50∶50；(35～36minA∶B为100∶0；36～45minA∶B为19∶81；流速为1.0mL·min-1；柱温为25℃；检测波长为230nm；进样量为10μL，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

2.2.2对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度为122.96μg·mL-1的芍药苷溶液，摇匀备用。

2.2.3供试品溶液的制备 取水提浓缩液适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称重，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4方法学考察 精密量取芍药苷对照品溶液1、3、5、7、9mL至10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别按上述2.2.1色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：Y=14663X-1174.1，r=0.9999，表明芍药苷在12.30～110.67μg·mL-1线性关系良好。

精密度试验测得芍药苷峰面积值的RSD为1.8%，表明仪器精密度良好。

重复性试验测定芍药苷含量的RSD为1.1%，表示本方法重复性好。

稳定性试验显示，24h内供试品溶液中芍药苷含量的RSD为0.9%，表明供试品溶液在24h内稳定性较好。

取同一水提浓缩液6份适量，精密称定，分别精密加入芍药苷对照品1.9326mg，计算平均回收率为98.7%，RSD为0.9%。

2.3厚朴酚的含量测定

2.3.1色谱条件 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-水(78∶22)；流速为1.0mL·min-1；柱温为35℃；检测波长为294nm；进样量为10μL，理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。

2.3.2对照品溶液的制备 取厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度为160.70μg·mL-1的厚朴酚溶液，摇匀，即得。

2.3.3供试品溶液的制备 取醇提浓缩液适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称重，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4方法学考察 精密量取厚朴酚对照品溶液0.5、1.5、2.5、3.5、5、7.5mL至10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别按上述2.3.1色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。得厚朴酚回归方程：Y=16313X-19117，r=0.9993，表明厚朴酚在8.04～120.53μg·mL-1线性关系良好。

精密度试验测得厚朴酚峰面积值的RSD为0.8%，表明仪器精密度良好。

重复性试验测定厚朴酚含量的RSD为0.9%，表示本方法重复性好。

稳定性试验显示，24h内供试品溶液中厚朴酚含量的RSD为0.2%，表明供试品溶液在24h内稳定性较好。

精密称取同一醇提液6份，分别精密加入厚朴酚对照品0.4821mg，计算平均回收率为100.23%，RSD为0.8%。

2.5正交试验优选

2.5.1水提工艺 按1/4处方量称取水提药材各9份，每份合计282.75g，进行水回流提取，按L9(34)正交表进行试验，得提取液，浓缩(药材∶水提液=1∶3)，备用。选择煎煮时间、煎煮次数、加水量为考察因素，以芍药苷提取量和干膏率为评价指标[10-11]，因素水平见表1，试验安排及结果见表2，方差分析见表3～4。

表1 复方白芍肠康水提工艺正交试验因素水平(n=3)

表2 复方白芍肠康水提工艺正交试验分析(n=9)

表3 水提工艺芍药苷含量方差分析

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00。

表4 水提工艺干膏率方差分析

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00。

由直观分析表可知，各因素对芍药苷提取、干膏率影响次序一致，均为C>A>B；每个因素三个水平之间的趋势为A2>A3>A1，B2>B3>B1，C3>C2>C1，得提取工艺为A2B2C3。由方差分析结果表明，C因素对提取效果的影响差异有统计学意义(P<0.01)，而A和B因素差异无统计学意义(P>0.05)。从大工业生产和节能降耗等全面综合考察，最终确定最佳提取工艺为A2B2C2，即10倍量水，提取2次，每次1.5 h。

2.5.2 醇提工艺 在预试验基础上，按1/4处方量称取醇提药材各9份，每份合计175.5 g，进行乙醇回流提取，按L9(34)正交表进行试验，因素水平见表5，得提取液。回收乙醇，浓缩(药材∶醇提液=1∶3)，备用。选择乙醇体积分数、提取次数、提取时间、乙醇用量为考察因素，以厚朴酚提取量和干膏率为评价指标[12-13]，结果见表6，方差分析见表7～8。

表5 复方白芍肠康醇提工艺正交试验因素水平(n=3)

表6 复方白芍肠康水提工艺正交试验分析(n=9)

表7 醇提工艺厚朴酚含量方差分析

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00。

表8 醇提工艺干膏率方差分析

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00。

由直观分析表可知，各因素对厚朴酚提取量、干膏率的影响次序不同，厚朴酚提取量为D>C>B>A，最佳工艺为A1B2C2D3；干膏率为D>C>A>B，最佳工艺为A1B3C3D3；以A因素为误差项对厚朴酚进行方差分析，结果表明，D因素对厚朴酚提取量影响差异有统计学意义(P<0.01)，C因素差异有统计学意义(P<0.05)，而B因素差异无统计学意义(P>0.05)。以B因素为误差项对干膏率进行方差分析，结果表明，D因素对干膏率影响差异有统计学意义(P<0.05)，A、C因素差异无统计学意义(P>0.05)。从大工业生产和节能降耗等全面综合考察，最终确定最佳提取工艺为A1B2C2D2，即8倍量60%乙醇，提取2次，每次1.5 h。

2.6验证试验

按优选的工艺条件制备3批样品，进行验证试验，结果表明，芍药苷质量分数为24.28mg·g-1，RSD为0.90%，干膏率为34.05%，RSD为1.47%；厚朴酚质量分数为13.07mg·g-1，RSD为1.91%，干膏率为19.71%，RSD为1.96%。与正交试验结果吻合，证明最佳提取工艺合理、稳定可行。

3 讨论

本方由11味药组成，剂型为颗粒剂，本文针对方中每位药的主要有效成分，依据其性质分别使用不同的溶剂进行提取。其中，白芍、厚朴为处方中的君药。此外，据文献报道[6-7]，厚朴酚与和厚朴酚是厚朴的主要药效成分，而厚朴中厚朴酚对水浸应激等所致溃疡有抑制效果，并对组胺所致十二指肠痉挛有一定的抑制作用。白芍所含的芍药苷是其主要有效成分，具有镇痛、解痉、抗炎、抗溃疡等药理作用。故选择以厚朴酚、芍药苷的含量及干膏率作为本工艺筛选的指标性成分。结果表明工艺稳定可行，适合工业化生产。

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OptimizationofExtractionTechnologyforFufangBaishaochangkangGranulesbyOrthogonalDesign

CHENfeng1,2，YANChangkai2*，ZHANJin2

(1.CollegeofPharmacy,HubeiUniversityofChineseMedicine,Wuhan430065，China；2.MayinglongPharmaceuticalGroup,Wuhan430064，China)

Objective：To optimize extraction technology of Fufang Baishaochangkang Granules.Methods：Taking content of paeoniflorin and dry extract rate as evaluation index, orthogonal test was employed to investigate effects of the amount of water, extraction time and times on water extraction process.With contents of magnolol and dry extract rate as evaluation index, orthogonal test was adopted to optimize ethanol extraction process with ethanol concentration, ethanol amount, extraction time and times.Content of paeoniflorin and magnolol were determined by HPLC.Results：Optimum water extraction conditions were as follows: decocted twice with10times the volume of water1.5h per time.Extracting amount of paeoniflorin was24.28mg·g-1, dry extract rate was34.05%.Optimal alcohol extraction conditions were as follows: extracted twice with8times the amount of60% ethanol for1.5h each time; Extracting amount of magnolol was11.14mg·g-1, dry extract rate was19.71%.Conclusion：The optimized extraction process was stable and feasible which could provide a reference for rational development of Fufang Baishaochangkang Granules.

Paeoniflorin；magnolol；Fufang Baishaochangkang Granules；ulcerative colitis；orthogonal design；extraction process

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.024

2015-12-04)

*

严常开，主任药师，研究方向：药物新制剂、新剂型及新技术研究；E-mail:yanchangkai@sohu.com