不同干燥方法对大黄9种活性成分含量的影响研究△

胡会娟，刘佳，刘金玉，田野，刘永刚，关锰，李莉，魏胜利，4*

(1.北京中医药大学 中药学院，北京 100102；2.中国医药保健品有限公司，北京 100061；3.北京市中药研究所，北京 100035；4.中药材规范化生产教育部工程研究中心，北京 100102)

不同干燥方法对大黄9种活性成分含量的影响研究△

胡会娟1，刘佳1，刘金玉1，田野1，刘永刚2，关锰2，李莉3，魏胜利1，4*

(1.北京中医药大学 中药学院，北京 100102；2.中国医药保健品有限公司，北京 100061；3.北京市中药研究所，北京 100035；4.中药材规范化生产教育部工程研究中心，北京 100102)

目的：比较切片阴干、切片晒干、个子阴干、个子熏干和4种温度(50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃)烘干对大黄药材质量的影响，为大黄产地加工选用合理的干燥方式、提高药材质量和经济效益奠定理论和技术基础。方法：采用HPLC分别测定酚酸类、二蒽酮苷类及游离蒽醌类成分的含量，并以方差分析比较评价。结果：总游离蒽醌含量，只有个子阴干、个子熏干、切片晒干、切片阴干和80 ℃烘干处理达到了《中华人民共和国药典》2015版规定的0.20%；番泻苷A含量，以个子阴干处理最高，切片阴干方式次之，60 ℃烘干最低，但均高于16版《日本药局方》规定的0.25%。结论：个子阴干所需时间过长，切片晒干是目前适宜的加工方法。

唐古特大黄；干燥方式；产地加工；药材质量

1 前言

大黄来自于掌叶大黄RheumpalmatumL.、唐古特大黄RheumtanguticumMaxim.ex Balf.或药用大黄RheumofficinaleBaill.的干燥根及根茎[1]，是一种常用的大宗中药材，不仅国内需求量大，还出口至日本等国家。大黄主要含有蒽醌类、鞣质类、多糖类等活性成分，现代药理研究表明其具有抗病毒、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗真菌和抗过敏、抑制血管增生、促智和泻下等作用[2]。

大黄根及根茎粗壮，在生产中自然干燥困难，通常在产地按照传统的熏干或者阴干方式需3～4个月的时间才能完全干燥。而在甘肃、四川等大黄栽培主产区，大黄采收期在秋季，由于采收后即刻进入冬季，为了防止大黄受冻产生糠芯影响品质，多采用柴草熏干和干燥设备烘干的方式干燥。有关大黄干燥方法对药材质量的影响已有报道，宋平顺等[3]通过比较总蒽醌类成分发现传统的熏法中蒽醌类成分含量最高，晾法次之；唐文文等[4]通过比较总蒽醌类和酚酸类成分发现大黄适宜的干燥方法是45℃恒温烘干或晒干；代婉莹等[5]通过比较总蒽醌类成分发现微波干燥方法可用于大黄产地加工规模化大生产。但是上述研究在干燥工艺参数和成分种类上尚缺乏系统性。

本研究通过系统比较切片阴干、切片晒干、个子阴干、个子熏干和4种温度(50℃、60℃、70℃、80℃)烘干对大黄药材9种活性成分含量影响，探索能提高大黄药材质量并且时间高效的干燥方法，为大黄产地加工中干燥方式和干燥参数的确定奠定理论和技术基础。

2 材料与方法

2.1材料和试剂

实验用大黄采自四川省若尔盖县团结村，原植物标本经北京中医药大学魏胜利副教授鉴定为唐古特大黄RheumtanguticumMaxim.ex Balf.，凭证标本存放于北京中医药大学。本实验所用材料为6年生唐古特大黄的根及根茎。

儿茶素、没食子酸、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品购自成都普非德生物技术有限公司，番泻苷A、番泻苷B购自中国药品生物制品检定所，纯度均大于98%。

2.2大黄样品干燥处理

为保证每个干燥处理下的样品具有可比性，本实验共选取9株大黄，将每株大黄的根茎和最粗部位的根分别纵切为平均的6份，确保每份对应一个干燥处理(分别为切片阴干、切片晒干和50℃、60℃、70℃、80℃4个温度参数烘干处理)；在此9株大黄根和根茎中，每株选取两段根(长9～12cm，直径4～6cm)和两块根茎(直径7～10cm，厚度3～4cm)，确保每份根段和根茎块对应一个干燥处理(个子阴干、个子熏干)共计72份样品。

2.3大黄HPLC分析

2.3.1仪器及设备 Agilent1200高效液相色谱仪(包括四元泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器)色谱柱：Agilent ZQRBA SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；KQ5200D超声清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)；RE52CS型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；FW100型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。

2.3.2色谱条件 流动相为0.05%的磷酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱程序如下：0～10min，5% B～11% B；10～30min，11% B～15% B；30～45min，15% B～17% B；45～60min，17% B～22% B；60～75min，22% B～36% B；75～90min，36% B～60% B；90～105min，60% B；105～110min，60% B ～5% B；流速1.0mL·min-1；检测波长254nm；柱温40℃；进样量10μL。(图1)[6]

注：(1)没食子酸，(2)儿茶素，(3)番泻苷B，(4)番泻苷A，(5)芦荟大黄素，(6)大黄酸，(7)大黄素，(8)大黄酚，(9)大黄素甲醚A.对照品；B.样品图1 9种活性成分色谱图

2.3.3供试液样品的制备 精密称取大黄粉末(过60目筛)1g，置于具塞三角瓶中，精密加入60%甲醇50mL，称定重量，超声提取1h(200W，40kHZ)，放冷，称重，用60%甲醇补足损失的重量，摇匀，过滤(0.22μm微孔滤膜)，取续滤液，即得酚酸类、二蒽酮苷类和游离蒽醌类供试品溶液[6]。

2.3.4标准曲线的绘制 精密称取没食子酸对照品0.912mg、儿茶素对照品10.4mg共同置于10mL量瓶中，加60%甲醇溶解作为对照品贮备溶液；精密称取番泻苷A对照品8mg、番泻苷B对照品5.3mg共同置于10mL量瓶中，加60%甲醇溶解作为对照品贮备溶液；精密称取芦荟大黄素对照品2.34mg、大黄酸对照品2.46mg、大黄素对照品0.42mg、大黄酚对照品1.65mg和大黄素甲醚对照品1.29mg共同置于10mL量瓶中加甲醇溶解作为对照品贮备溶液。将上述储备液稀释至6个不同浓度，得系列对照品溶液，每个浓度进样2次，取其峰面积平均值为纵坐标，浓度为横坐标，进行回归分析，所得各回归方程见表1。

表1 9种化学成分的回归方程

2.3.5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，按上述色谱条件重复进样5次，记录芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、大黄酸、番泻苷A、番泻苷B、没食子酸、儿茶素的峰面积，计算RSD值。结果显示，9个成分的RSD分别为1.2%、1.9%、1.8%、1.5%、2.5%、2.0%、1.3%、2.1%、1.4%，均小于3%，表明仪器精密度良好。

2.3.6 重复性试验 精密称取大黄细粉5份，每份1 g，按照前面所述样品溶液制备及分析方法进行测定，结果没食子酸、儿茶素、番泻苷B、番泻苷A，以及五种游离蒽醌含量的RSD分别为1.4%、0.6%、2.5%、1.7%、2.9%、2.1%、1.9%、2.6%、2.3%，表明重复性良好。

2.3.7 稳定性试验 精密称取大黄细粉1 g，按照前面所描述的样品溶液制备方法制备，分别于0、2、4、6、8、10、12 h进行测定，结果没食子酸、儿茶素、番泻苷B、番泻苷A，以及五种游离蒽醌含量的RSD分别为1.7%、2.4%、1.7%、2.5%、2.4%、2.8%、3.1%、2.1%、2.9%。2.3.8 加样回收率试验 精密称取大黄样品6份，每份0.5 g，分别精密加入没食子酸、儿茶素、番泻苷A、番泻苷B、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，按照供试品溶液制备方法处理，再按照上述色谱条件进行测定，得没食子酸、儿茶素、番泻苷A、番泻苷B、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的回收率分别为99.2%、97.6%、99.8%、97.7%、98.5%、96.1%、99.2%、101.4%、100.9%，RSD分别为2.0%、2.5%、1.3%、1.2%、2.6%、1.0%、2.7%、1.2%、1.6%。

3 结果与分析

3.1不同干燥处理对干燥时间的影响

不同干燥处理所需时间随着温度的升高而缩短，其中个子阴干、切片阴干、个子熏干所需时间较长，分别为50、30、30d。切片晒干方式所需时间稍短，只要15d；烘干方式所需时间最短，仅仅需要2～3d，能显著的提高大黄的干燥效率。

3.2不同干燥处理对大黄游离蒽醌类成分含量的影响

不同干燥处理对大黄酸和大黄素甲醚和总游离蒽醌含量的影响达到了极显著水平(P<0.01)，对大黄酚含量影响达到了显著水平(P<0.05)。各类成分均以个子阴干含量最高，50℃烘干含量最低(表2)。以《中华人民共和国药典》2015版新规定的总游离蒽醌含量为例，个子阴干样品含量为0.380%，而50℃烘干样品含量仅为0.115%，不同处理间含量相差可达3.32倍(表2)。此外，不同成分随烘干温度升高呈现不同趋势，其中，芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和总游离蒽醌含量均随着烘干温度的上升含量逐渐升高。

3.3不同干燥处理对没食子酸、番泻苷A等4种成分含量的影响 不同干燥处理对2种酚酸类成分和2种二蒽酮苷类成分含量影响均达到了极显著水平(P<0.01)(表3)。其中，没食子酸以个子熏干处理含量最高，切片晒干含量最低；而儿茶素与番泻苷A、番泻苷B则均以个子阴干处理含量最高，50 ℃烘干处理的大黄儿茶素含量最低，60 ℃烘干处理的大黄番泻苷A、番泻苷B含量最低，不同干燥处理大黄番泻苷A含量均能达到16版《日本药局方》所要求的标准。

表2 不同干燥方法大黄游离蒽醌含量 (%)

注：*差异显著(P<0.05)；**差异极显著(P<0.05)。

表3 不同干燥方法大黄酚酸类和二蒽酮苷类成分含量 (%)

注：*差异显著(P<0.05)；**差异极显著(P<0.05)。

4 讨论

4.1不同干燥方法对大黄活性成分含量影响的内在机理

本研究结果表明，个子阴干处理下番泻苷A、番泻苷B百分含量最高，而50℃、60℃烘干处理方式的番泻苷A、番泻苷B百分含量最低，这可能是因为二蒽酮苷类在受热条件下不稳定发生降解和互相转化从而含量有所降低有关[7]。虽然不同干燥处理方式下番泻苷A百分含量存在显著性差异，但是均能达到16版《日本药局方》所要求的0.25%的标准。

4.2产地加工中干燥方法和工艺对于大黄质量再塑至关重要 有研究表明，中药材采挖后的干燥过程是其质量再塑的重要环节，以丹参为例，其所含丹酚酸B在新鲜丹参根中含量甚微，而在后续干燥过程中，随着含水量变化才被不断被合成出来[8]。本研究中也发现大黄所含各类成分也与不同干燥方法息息相关，归纳起来，获得高含量的游离蒽醌、番泻苷A、B宜采用个子阴干或个子熏干方法。

4.3大黄栽培中如何选择经济高效干燥方法

综合番泻苷A、总游离蒽醌来看，以个子阴干处理方式较好，但是个子阴干处理所需时间较长(50d)，并且在实际生产过程中若仅仅采用此方式干燥可能会造成霉变而影响药材外观及质量，相反，切片晒干处理仅仅需要15d，在实际生产过程中不仅能保证药材外观与质量而且能大批量的生产，并且适用于各个大黄主产区。所以切片晒干处理是既能保证较高的番泻苷A和总游离蒽醌百分含量又能提高生产效率产生较高的经济效益的方式。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：22-23.

[2] 傅兴圣，陈菲，刘训红，等.大黄化学成分与药理作用研究新进展[J].中国新药杂志，2011(16)：1534-1538，1568.

[3] 宋平顺，晋小军，赵建邦，等.不同加工方法对掌叶大黄中蒽醌类和酚酸类成分的影响[J].中国现代中药，2012(6)：46-49.

[4] 唐文文，李国琴，宋平顺，等.大黄干燥方法研究[J].中草药，2013(4)：424-429.

[5] 代婉莹，孙维宏，毛淑杰，等.铨水大黄产地加工方法研究[J].中国实验方剂学杂志，2010(8)：90-93.

[6] Ren G X，Li L，Hu H J，et al.Influence of the Environmental Factors on the Accumulation of the Bioactive Ingredients in Chinese Rhubarb Products.[J] PLoS One.2016，11(5)：e0154649.doi：10.1371/journal.pone.0154649.e Collection2016.

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InfluenceonContentsofNineActiveCompoundsbyDifferentDryingMethodsinRhubarb

HUHuijuan1，LIUJia1，LIUJinyu1，TIANYe1，LIUYonggang2，GUANMeng2，LILi3，WEIShengli1,4*

(1.SchoolofChinesePharmacy，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China；2.ChinaMehecoCorporation，Beijing100061，China；3.BeijingInstituteofChineseMedicine,Beijing100035，China；4.EngineeringResearchCenterofGoodAgriculturalPracticeforChineseCrudeDrugs，MinistryofEducation，Beijing100102，China)

Objective：To compare the influences on the quality of the rhubarb by the different drying methods，such as slices dried in the shade，slices dried in the sun，Gezi dried in the shade，Gezi fumigated-drying，baking temperature at 50 ℃，60 ℃，70 ℃ and 80 ℃.This research aims to prepare theory and technological knowledge to choose the appropriate drying method，improving the quality of medicines and economic benefit.Methods：HPLC was used to determinate the content of phenolic acids，dianthrone glycosides and free anthraquinones.Variance analysis was used to evaluate the quality of processed products.Results：In terms of total free anthraquinones，only Gezi dried in the shade，Gezi fumigated-drying，slices dried in the shade slices dried in the sun and，baking temperature at 80℃ were over 0.20% according to the ChP 2015.The sennoside A contents were the highest by Gezi dried in the shade，slices dried in the shade occupied the second range，baking temperature at 60℃ was the lowest.Yet，all samples from different groups were over 0.25% accroding to the JP 16.Conclusion：Compaire with the drying methods of drying by Gezi dried in the shade，the drying methods of slices dried in the sun was easier to promotion..

RheumtanguticumMaxim.ex Balf.；drying methods；habitat processing；medicinal material quality

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.7.021

2016-06-01)

国家自然科学基金项目(31170307;31570331)；国家工信部项目(YC12TY-1QT0007)

*

魏胜利，副教授，研究方向：中药资源定向培育及中药资源综合开发；Tel：(010)84738334，E-mail:wsl7491@126.com