盾叶薯蓣药材质量标准研究△

康阿龙，汤迎爽，孙文基

(1.解放军第451医院，陕西 西安 710054；2.解放军第323医院，陕西 西安 710054；3.西北大学 陕西省生物医药重点实验室，陕西 西安 710069)

·基础研究·

盾叶薯蓣药材质量标准研究△

康阿龙1*，汤迎爽2，孙文基3

(1.解放军第451医院，陕西 西安 710054；2.解放军第323医院，陕西 西安 710054；3.西北大学 陕西省生物医药重点实验室，陕西 西安 710069)

目的：建立盾叶薯蓣药材的质量标准，为该药材及其制剂的质量控制提供有效方法。方法：采用显微和薄层色谱法鉴别，并对10批药材的水分、浸出物进行检查，采用HPLC对药材中薯蓣皂苷元含量进行了测定。结果：确定了盾叶薯蓣药材的显微特征，建立了TLC鉴别方法，拟定了其水分、浸出物限量。薯蓣皂苷元的进样量在2.36～21.24 μg线性关系良好(r=0.999 9)，平均回收率为97.33%，RSD=1.28%(n=6)。结论：该方法操作简单、重现性好、准确可靠，可较全面地控制盾叶薯蓣药材及其制剂的质量。

盾叶薯蓣；质量标准；TLC；HPLC；检查项；薯蓣皂苷元

盾叶薯蓣为薯蓣科植物盾叶薯蓣DioscoreazingiberensisC.H.Wright的干燥根茎。由于其外形如姜，新鲜时断面显鲜黄至橙黄色，在药材主产地药农均称之“黄姜”，是我国特有的药用植物品种，具有解毒消肿、利湿止痛、活血化瘀功能。用于蜂螫虫咬、风湿腰痛、胸痹心痛、高脂血症、冠心病等的治疗[1]。盾叶薯蓣主要含有甾体皂苷类成分，是主要的甾体激素类药源植物之一，国内多个省都在大量种植，其中陕西是其最优适生地，种植面积较大[2-3]，但目前该药材还未被收入《中华人民共和国药典》(《中国药典》)，没有一个较为全面的质量标准。为了更好地对其进行开发利用，我们从其基原、标本采集着手，较系统地考察了其水分、浸出物；采用TLC建立了其鉴别方法，并建立了显微鉴别特征；采用HPLC测定了薯蓣皂苷元的含量[4]；为该药材及其制剂的质量控制提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

美国热电P4000高效液相色谱仪，UV1000检测器，SEPU3000数据工作站(杭州普惠)，电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司，型号：BT25S，d=0.01 mg；型号：BS210S，d=0.1 mg)。

1.2 材料

黄姜素对照提取物(自制)，薯蓣皂苷元对照品(中国食品药品检定研究院，批号：1539-200001，供含量测定用)；乙腈为色谱纯试剂，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

10份盾叶薯蓣药材均为自购或自采，经西安市食品药品检验所谢志民主任药师鉴定为盾叶薯蓣DioscoreazingiberensisC.H.Wright的干燥根茎，样品信息见表1。

表1 盾叶薯蓣药材样品来源信息表

2 方法与结果

2.1 植物形态

多年生草质藤本。根茎横生，呈鹿角状分枝；表面深棕色，具多数细长而坚韧的须根，茎纤细，缠绕性，无毛，具纵皱纹或浅槽，有时在分枝或叶柄基部两侧微突出，或具短刺。单叶互生，叶盾形；叶片三角状卵形或长卵形，长3～11 cm，宽2～9 cm，边缘浅波状或全缘，基部心形或近截形；常3裂，中央裂片先端渐尖，两侧裂片圆耳状；叶柄略短于叶片。花单生，雌雄异株；雄花序穗状，腋生，有时有分枝；花无柄，常2～3朵簇生，仅1～2朵完全发育；苞片膜质，卵形或三角状卵形；花被片6，卵形，紫红色，雄蕊6；雌花序有花6～8朵，有短柄，花被6裂，雄蕊退化；子房长圆柱形。蒴果有3翅，干后蓝黑色，表面附有白色粉状蜡被；翅半月形，长约2.5 cm，宽1.5 cm，顶端微凹，或近于截形，基部狭圆形。见图1。

2.2 药材性状

本品呈近圆柱形，指状或不规则分支状，分支长短不一，直径1.5～3.0 cm。表皮棕褐色，有明显白色圆点状根痕及残留须根。质硬，易折断，断面较平坦，灰白色至黄白色，散有黄白色点状维管束，气微，味苦。见图2。

图1 盾叶薯蓣原植物

图2 盾叶薯蓣药材

2.3 显微鉴别

照《中华人民共和国药典》2010年版(一部)显微鉴别法(附录ⅡC)进行石蜡制片和粉末制片，根据观察对象不同，滴加相应试液，盖片，显微镜下观察并拍照记录。

2.3.1 横切面显微鉴别 黄姜根茎主要由周皮、基本组织和散生在基本组织中的维管束组成，周皮由木栓层、木栓形成层和栓内层组成，木栓层为7～10层排列紧密的厚壁细胞；基本组织为薄壁细胞，近圆形，内含有多数淀粉粒，大型黏液细胞散在，多数含草酸钙针晶束。散生维管束分布于基本组织中。见图3。

注：A.木栓层与皮部(×40)；B.散生维管束(×40)；C.针晶束(×40)。图3 盾叶薯蓣横切面图

2.3.2 粉末显微鉴别 粉末土黄色，淀粉粒较多，多为单粒，少数为复粒；单粒长圆形、椭圆形或肾形，直径5～20 μm，脐点点状或狭缝状，多偏于一侧，草酸钙针晶束较多，针晶长约50～85 μm。可见具缘纹孔、网纹或梯纹导管，偶见棕色块状物。见图4。

注：A.淀粉粒(×40)；B.草酸钙针晶束(×40)；C.导管(×40)；D.棕色块状物(×40)。图4 盾叶薯蓣粉末显微图

2.4 薄层色谱鉴别

取本品粗粉1 g，加70%乙醇20 mL，超声处理15 min，静置30 min，取上清液作为供试品溶液。另取盾叶薯蓣对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取黄姜对照提取物适量，加70%乙醇制成1 mL含5.0 mg的溶液，作为对照提取物溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置过夜后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以E试剂(取1 g对-二甲氨基苯甲醛，加34 mL盐酸使溶解，即得)，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应位置上有相同颜色的斑点。见图5。

注：1、2.黄姜素对照提取物；3.陕西安康样品 4.陕西旬阳样品；5.陕西白河样品；6.陕西铜川样品；7、8.陕西眉县样品；9、10 黄姜素对照提取物。图5 盾叶薯蓣TLC图

2.5 水分检查

照水分测定法(《中国药典》2010年版附录Ⅸ H)第一法烘干法(含淀粉和皂苷类成分，不含挥发油类成分)进行测定，结果见表1。

2.6 浸出物测定

以70%乙醇为溶剂，照浸出物测定法(《中国药典》2010年版附录X A)醇溶性浸出物测定法的热浸法测定，结果见表2。

表2 盾叶薯蓣药材检查项考察结果 (%)

2.7 薯蓣皂苷元的含量测定

盾叶薯蓣主要含甾体皂苷类成分，我们课题组从其总皂苷中分离鉴定了4种成分，分别为黄姜素A、盾叶新苷、薯蓣皂苷、仟细皂苷等，也建立了用高效液相色谱法(蒸发光散射检测器)直接测定黄姜素A的专属性方法，但由于目前对照品量还无法满足日常检验使用，故我们参考文献采用高效液相色谱法进行了薯蓣皂苷元含量测定[4]。

2.7.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(93∶7)；检测波长：203 nm。流速：1.0 mL·min-1；柱温：室温；进样量：10 μL。在此条件下，薯蓣皂苷元对照品色谱峰理论板数大于5000，与相邻色谱峰的分离度良好。对照品与供试品色谱图见图6。

注：A.薯蓣皂苷元对照品；B.供试品；1.薯蓣皂苷元。图6 盾叶薯蓣药材及对照品HPLC图

2.7.2 对照品溶液制备 精密称取经干燥的薯蓣皂苷元对照品6.0 mg，用无水乙醇溶解并定容至5 mL，配制成浓度为1.18 mg·mL-1的对照品溶液，即得。

2.7.3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过5号筛)约1.0 g，精密称定，置250 mL圆底烧瓶中，加入含2.5 mol·L-1盐酸的60%甲醇溶液和石油醚(90～120 ℃)各25 mL，于沸水浴中加热回流提取6 h。滤过，滤液移至分液漏斗中，静置分层，待滤液冷却后，分取上层石油醚相，下层再用石油醚萃取3次(每次25 mL)，合并萃取液。减压回收溶剂，真空干燥，再用无水乙醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，0.45 μL微孔滤膜滤过，即得。

2.7.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液2.0、6.0、10.0、14.0、18.0 μL，依次进样，测定薯蓣皂苷元的峰面积。以峰面积对进样量进行回归，得回归方程Y=439 985X-544.4，r=0.999 9，以上结果表明在2.36～21.24 μg薯蓣皂苷元峰面积值与进样量呈良好的线性关系。

2.7.5 样品测定 分别精密吸取对照品溶液5、10 μL，供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪中，计算样品中薯蓣皂苷元的质量百分数，结果见表4。

文献报道的含量均较高[5]，但收集到的10份样品测定值却比较低，原因是多方面的，但高含量种质资源的减少是其主要原因之一，也是当前盾叶薯蓣种植急需解决的问题。考虑到实际状况，暂定为不得少于0.3%。

表4 盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的测定(n=3) (%)

3 讨论

薄层鉴别中，我们参考文献，采用酸水解后磷钼酸显色的鉴别方法[6]，进行了鉴别实验，但由于其专属性较差，含薯蓣皂苷元的同类药材如穿龙薯蓣、黄山药均可检出；再一方面操作过程需要水解，耗时长，未将其收入正文。我们采用黄姜提取物(总皂苷)作为对照，专属性强，色谱信息量大，色谱斑点清晰，可很好鉴定盾叶薯蓣的真伪。

先后比较了甲醇-水系统不同比例、乙腈-水系统不同比例，最终确定流动相为乙腈-水(93∶7)最适合该样品的测定。

该标准的建立，方法简便、结果准确可靠，对盾叶薯蓣药材的开发利用提供了有效的质控依据。

[1] 国家中医药管理局.中华本草：第8册[M].上海：上海科学技术出版社.1999：252.

[2] 丁志遵，唐世蓉，秦慧贞，等.甾体激素药源植物[M].北京：科学出版社，1983：64.

[3] 康阿龙，孙文基，朱朝德，等.盾叶薯蓣引种栽培调查报告[J].中药材，2002，25(7)：8-9.

[4] 钟世安，华怀杰，贺国文，等.反相高效液相色谱法测定盾叶薯蓣中薯蓣皂甙元[J].光谱实验室，2006，23(5)：898-901.

[5] 李子辉，程新奇，万海清.盾叶薯蓣高产的关键制约因素分析[J].中国中药杂志，2001，26(3)：203-204.

[6] 山东省药品监督管理局.山东中药材标准[S].济南：山东友谊出版社，2003：157-159.

StudyonQualityStandardsofDioscoreaezingiberensisRhizoma

KANGAlong1*，TANGYingshuang2，SUNWenji3

(1.Hospital451ofPLA，Xi’an710054，China；2.Hospital323ofPLA，Xi’an710054，China；3.KeylaboratoryofbiologicalmedicineinShaanxi，NorthwesternUniversity，Xi’an710069，China)

Objective：To establish the quality standard of Dioscoreae zingiberensis Rhizoma for providing the effective quality control method of the herb and its preparations.Methods：10 batch the plants were identified by microscopic and TLC methods，the contents of extract and water were determined.The content of diosgenin in Huangjiang was determined by HPLC.Results：The microscopic characteristics of Dioscoreae zingiberensis Rhizoma had been detected.TLC identification method had been established.The content of moisture and extract had been measured.Diosgenin showed a good linear relationship within the range of 2.36-21.24 μg(r=0.999 9)，The average recovery was 97.33%，and the RSD was 1.28%(n=6).Conclusion：This method is simple，accurate and with good reproducibility，particularly suitable for the comprehensive quality control of Dioscoreae zingiberensis Rhizoma and its preparations.

Dioscoreae zingiberensis Rhizoma；quality standards；TLC；HPLC；check items；diosgenin

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.012

2015-03-13)

陕西省中药材标准项目(2010-038)

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康阿龙，主任药师，研究方向：中药材鉴定、分析及医院药学；E-mail：kalong1900@163.com