外周血T细胞亚群检测在恶性肿瘤中的应用及临床意义研究

张国泰安市肿瘤防治院检验科，山东泰安　271000

外周血T细胞亚群检测在恶性肿瘤中的应用及临床意义研究

张国
泰安市肿瘤防治院检验科，山东泰安271000

目的 分析外周血T细胞亚群测定在恶性肿瘤患者中的临床应用价值及及意义。方法 随机收集该院2014年1月—2016年1月收治的患恶性肿瘤的100例患者进行研究，且将其分为研究组。同时选取同期于该院进行健康体检的100名正常人群作为对照组进行对照研究。通过流式细胞术分别对两组研究对象的外周血T细胞亚群水平进行检测，主要包括T淋巴细胞（CD3+细胞）、辅助性T细胞（CD4+细胞）、抑制性T细胞（CD8+细胞）、CD4+/CD8+细胞等水平。结果 研究组患者的CD3+细胞（57.31±7.76）%，显著低于对照组（72.34±6.78）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。研究组患者的CD4+细胞（35.75±7.47）%，显著低于对照组（45.23±5.49）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。研究组患者的CD8+细胞（33.98±8.46）%，显著高于对照组的（28.37±6.17）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。研究组患者的CD4+/CD8+细胞（0.93±0.49），显著低于对照组（1.57±0.59），差异有统计学意义（P＜0.05）。结论外周血T细胞亚群检测可作为评估恶性肿瘤患者治疗及预后情况的重要参考，值得进一步推广应用。

外周血；T细胞亚群；恶性肿瘤；临床价值

［Abstract］Objective To analyze the clinical application value and significance of T lymphocyte subsets in patients with malignant tumor.Methods Random selection 100 patients with malignant tumor in our hospital were collected from January 2014 to January 2016 called study group.100 healthy checking people were selected as control group.To compare and test the two groups of subjects peripheral blood T cell subsets levels by using of flow cytometry respectively,including T lymphocytes（CD3+cells,helper T cells（CD4+）cells,inhibition of T cells（CD8+cells,CD4+/CD8+cell levels.Results The CD3+cells（57.31±7.76）%in the study group were significantly lower than control group（72.34±6.78）%,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The CD4+cells（35.75±7.47）%in the study group were significantly lower than control group（45.23±5.49）%,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The CD8+cell（33.98+8.46）% of the study group was significantly higher than that of the control group（28.37±6.17）%,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The CD8+CD4+/cells（0.93±0.49）in the study group were significantly lower than control group （1.57±0.59）,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion The detection of T lymphocyte subsets in peripheral blood can be used as an important reference for the evaluation of treatment and prognosis of patients with malignant tumor,and it is worth of promotion.

［Key words］Peripheral blood；T cell subsets；Malignant tumor；Clinical value

恶性肿瘤主要发生于机体免疫功能较低时，且会导致患者机体的免疫功能进一步受损，而免疫功能受损又是导致患者的肿瘤出现转移的重要因素之一［1］。相关研究表明，T细胞亚群等细胞免疫在肿瘤的发生、发展、抗肿瘤中均发挥着非常重要的效果［2］。为了分析恶性肿瘤患者与健康体检人群外周血T细胞亚群的差异性，旨在为恶性肿瘤患者的免疫生物学反应提供参考，该研究随机收集该院2014年1月—2016年1月间收治的患恶性肿瘤的100例患者及同期的100名健康体检人群进行临床研究，通过流式细胞术分别对两组研究对象的外周血T细胞亚群水平进行检测，现总结报道如下。

1　对象与方法

1.1研究对象

随机收集该院收治的患恶性肿瘤的100例患者进行研究，且将其分为研究组。入选标准：①所有患者均经临床病理检查明确诊断，且均经相关临床检查明确诊断；②均无合并其他严重免疫性疾病者；③患者及家属均签署知情同意书，且自愿参与该研究。研究组中，男性患者61例，女性患者39例；最低年龄31岁，最高年龄67岁，平均年龄（54.16±10.76）岁；肿瘤分类：胃癌患者25例，肺癌患者22例，肝癌患者13例，恶性淋巴瘤患者14例，乳腺癌患者11例，结直肠癌患者15例。同时选取同期于该院进行健康体检的100名正常人群作为对照组进行对照研究，其中男性对象58名，女性对象42名；最低年龄26岁，最高年龄73岁，平均年龄（55.93±13.67）岁。两组患者的性别、年龄等基线资料对比，差异均无统计学意义（P＞0.05），存在临床可比性。

1.2研究方法

1.2.1仪器及试剂仪器选用Beckman Eepics XL型流式细胞仪、溶血素、流式试剂盒CD45-FITC/CD4-RD1/ CD8-ECD/CD3-PC5及CD3-FITC/CD16CD56-ECD。试剂选用Cy标记的鼠抗人 CD3和CD4单克隆抗体、FITC标记的鼠抗人CD8单克隆抗体、PE标记的鼠抗人CD16和CD56单克隆抗体。

1.2.2测定方法通过直接免疫荧光标记全血溶血法［3］检测两组对象外周血中淋巴表面抗原的表达情况，具体操作包括：抽取两组对象的空腹静脉血2 mL，放入具有抗凝剂的试管中，分别取经标记过的10 μL单克隆抗体CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5及CD3-FITC/CD16CD56-ECD放入试管中，再加入100 μL抗凝过的外周全血，摇匀，于室温下进行染色15 min，且行同型对照。然后加入溶血素FACS 450 μL，摇匀后置于室温避光下10 min，然后行溶血处理；细胞洗涤，常规进行1 500 rpm/5 min低速离心后去除上清液，加1 mL PBS，混匀后重复1次洗涤操作；再加入1mL PBS重选细胞，混匀，制成单细胞悬液。最后放置于流式细胞仪中进行测定，每个样品中检测的细胞需超过5 000个，通过软件对细胞中各个标记细胞的比例进行计算。检测指标包括T淋巴细胞（CD3+细胞）、辅助性T细胞（CD4+细胞）、抑制性T细胞（CD8+细胞）、CD4+/CD8+细胞等水平。

1.3统计方法

对该研究所得数据进行详细记录并构建数据库，以SPSS 20.0统计学软件进行处理和分析，计量资料采用t检验进行分析，以均值±标准差（±s）来表示，当P＜0.05时，则为差异有统计学意义。

2　结果

2.1恶性肿瘤患者与健康人群的外周血T细胞亚群水平对比

研究组患者的CD3+细胞（57.31±7.76）%，显著低于对照组（72.34±6.78）%，差异有统计学意义（t=14.5856，P=0.0000）。研究组患者的CD4+细胞（35.75±7.47）%，显著低于对照组（45.23±5.49）%，差异有统计学意义（t= 10.2261，P=0.0000）。研究组患者的CD8+细胞（33.98±8.46）%，显著高于对照组的（28.37±6.17）%，差异有统计学意义（t=5.3577，P=0.0000）。研究组患者的CD4+/CD8+细胞（0.93±0.49），显著低于对照组（1.57±0.59），差异有统计学意义（t=8.3448，P=0.0000）。见表1。

表1　恶性肿瘤患者与健康人群的外周血T细胞亚群水平对比（±s）

表1　恶性肿瘤患者与健康人群的外周血T细胞亚群水平对比（±s）

组别CD3+细胞（%）CD4+细胞（%）CD8+细胞（%）CD4+/CD8+细胞研究组（n=100）对照组（n=100）t P 57.31±7.76 72.34±6.78 14.5856 0.0000 35.75±7.47 45.23±5.49 10.2261 0.0000 33.98±8.46 28.37±6.17 5.3577 0.0000 0.93±0.49 1.57±0.59 8.3448 0.0000

2.2不同性别、年龄的恶性肿瘤患者的外周血T细胞亚群水平对比

不同性别、年龄的恶性肿瘤患者的外周血T细胞亚群水平对比，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

表2　不同性别、年龄的恶性肿瘤患者的外周血T细胞亚群水平对比（±s）

表2　不同性别、年龄的恶性肿瘤患者的外周血T细胞亚群水平对比（±s）

调查内容　分类CD3+细胞（%）CD4+细胞（%）CD8+细胞（%）CD4+/CD8+细胞性别年龄（岁）男（n=61）女（n=39）31～41（n=32）42～53（n=30）54～67（n=28）58.52±9.41 58.16±9.15 58.74±10.36 57.78±9.16 58.03±8.46 33.41±8.42 34.16±9.24 33.75±6.49 33.95±8.42 34.09±8.31 33.72±7.62 32.94±6.75 32.74±8.12 33.14±7.86 33.34±9.26 0.97±0.39 0.96±0.42 0.98±0.36 0.99±0.32 0.96±0.38

3　讨论

随着近年来人们物质文化生活水平的不断提高和饮食生活习惯的不断变化，恶性肿瘤患者的发病例数亦在逐渐增加，严重影响了广大患者的身体生命健康及生活质量。恶性肿瘤患者的病情进展时，患者机体的免疫功能下降是导致肿瘤细胞转移的主要因素［4-5］。恶性肿瘤患者机体的免疫系统主要通过免疫应答来对肿瘤细胞的生长和发展进行抑制，而T淋巴细胞接到的细胞免疫是肿瘤免疫的主要方向，T淋巴细胞异常可导致患者机体中的肿瘤细胞避开机体免疫的监视进行增殖分化。恶性肿瘤患者的发生、发展过程中，其分泌的可溶性免疫抑制因子会阻止CD4+T细胞的出现及成熟，而诱导出现CD8+T细胞，进而导致患者的CD4+/CD8+比值和NK细胞所占的比例降低［6-7］。

杨德芬［8］研究表明，恶性肿瘤组患者的CD3+细胞水平（57.41±8.49）%、CD4+细胞水平（35.83±7.52）%均相对较低，且与正常人群的 CD3+细胞水平（72.28± 7.01）%、CD4+细胞水平（45.12±5.53）%比较差异有统计学意义，加强对外周血T细胞亚群的监测可为患者的肿瘤进展、治疗及预后情况作出一定的预测，以便临床进行针对性的预防治疗，进而有效提高疗效。该次研究结果显示，研究组患者的CD3+细胞水平（57.31±7.76）%、CD4+细胞水平 （35.75±7.47）%、CD4+/CD8+细胞 （0.93± 0.49）均显著低于对照组，差异有统计学意义（t=14.5856、10.2261、8.3448，P=0.0000）。研究组患者的CD8+细胞水平（33.98±8.46）%显著高于对照组，差异有统计学意义（t= 5.3577，P=0.0000）。这提示恶性肿瘤患者与健康体检人群的免疫功能存在明显的差异，而恶性不同性别、年龄的恶性肿瘤患者的外周血T细胞亚群水平差异无统计学意义（P＞0.05），这提示患者的免疫紊乱为共性问题，不可因性别、年龄等差异而忽视。

综上所述，外周血T细胞亚群检测可作为评估恶性肿瘤患者治疗及预后情况的重要参考，值得进一步推广应用。

［1］蔡力力,杨波,卢学春,等.免疫功能检测对评估细胞因子诱导的自体杀伤细胞治疗老年血液肿瘤疗效的研究［J］.中国实验血液学杂志,2010,18（5）：1250-1255.

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［4］樊静,任红,张凤春,等.不同TNM分期恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的研究［J］.中国医刊,2011,46（9）：70-71.

［5］沈成龙.辅助性T细胞17相关细胞因子与结肠癌的研究进展［J］.医学研究生学报,2013,26（4）：402-406.

［6］尹震宇,郭美姿,黄明敏,等.80岁以上老年恶性肿瘤患者外周血调节性T细胞检测及其临床意义［J］.实用老年医学, 2011,25（6）：451-453.

［7］任林广,张健,徐广伟,等.肺癌患者外周血T细胞亚群与NK、NKT细胞检测的临床意义［J］.中国实验诊断学,2013, 17（10）：1873-1874.

［8］杨德芬.外周血T细胞亚群检测在恶性肿瘤中的应用及临床意义［J］.海南医学院学报,2013,19（10）：1390-1392, 1395.

Clinical Significance of Peripheral Blood T Cell Subsets Detection in Malignant Tumors

ZHANG Guo
Tai'an Tumour Prevention and Treatment Hospital,Tai'an,Shandong Province,271000 China

R730

A

1674-0742（2016）08（b）－0026-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.23.026

张国（1966.6-），男，山东泰安人，本科，主治医师，研究方向：肿瘤、结核病相关临床检验。

2016-05-16）