BCL2、BCL6、MUM1蛋白表达及其与弥漫性大B细胞淋巴瘤预后的关系

车江雁，王宝宏（.潍坊医学院，山东潍坊26000；2.潍坊市人民医院，山东26000）

BCL2、BCL6、MUM1蛋白表达及其与弥漫性大B细胞淋巴瘤预后的关系

车江雁1，王宝宏2△（1.潍坊医学院，山东潍坊261000；2.潍坊市人民医院，山东261000）

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）组织中MUM1、BCL2和BCL6蛋白的表达及其与DLBCL临床病理特征及预后的关系。方法收集山东省潍坊市人民医院2010年2月至2014年2月80例有完整临床和随访资料的新确诊DLBCL患者的病理组织标本，应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中BCL2、BCL6和MUM1蛋白的表达，分析其相互关系及其与DLBCL临床病理特征及预后的关系。结果80例DLBCL患者肿瘤组织中BCL2、BCL6及MUM1 3种蛋白的阳性表达率分别为36.2%（29/80）、65.0%（52/80）、77.5%（62/80）。MUM1阳性组、阴性组患者平均生存期分别为35.4、51.7个月；BCL2阳性组、阴性组患者平均生存期分别为35.7、47.2个月；BCL6阳性组、阴性组患者平均生存期分别为54.5、35.1个月。MUM1阴性组、BCL6阳性组患者预后相对较好，差异有统计学意义（P＜0.05），而BCL2与DLBCL患者预后的关系尚不确切。结论MUM1、BCL2及BCL6蛋白表达情况为DLBCL的临床治疗和预后分析提供了重要信息，但目前对其作用机制尚缺乏了解，值得深入研究。

DNA结合蛋白质类；原癌基因蛋白质c-bcl-2；淋巴瘤，B细胞/病理学；免疫组织化学；预后

弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuselargeBcelllymphoma，DLBCL）是一种大B细胞弥漫增生性恶性肿瘤，是非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin′s lymphoma，NHL）中最常见的组织学类型，占新诊断病例的30%～40%［1］。DLBCL的形态学、免疫表型、分子遗传学和临床表现极具异质性，其传统治疗方案是以利妥昔单抗和蒽环类药物为基础的免疫化学疗法，一些相关方案可以治愈60%～70%的患者［2］。尽管如此，患者对治疗的反应及预后仍存在较大差异，仍有较多患者对治疗反应差，易复发、转移或进展，预后不良［3］。近年来，国际预后指数（international prognostic index，IPI）评分已广泛用于对DLBCL患者的预后评估，但是临床研究发现，IPI评分相同的患者预后不尽相同［4］。近年来，BCL2、BCL6和MUM1等蛋白与DLBCL的发生及其与临床预后的关系备受关注，然而分子遗传学异常与临床预后的关系存在争议，了解其发病机制并寻找更好的治疗方法成为当前研究的热点。本研究分析了BCL2、BCL6和MUM1 3种蛋白在80例DLBCL患者肿瘤组织中的表达，并对患者进行跟踪随访，从而为临床治疗及预后分析提供重要及客观的依据。

1　资料与方法

1.1资料

1.1.1资料来源收集山东省潍坊市人民医院2010 年2月至2014年2月80例有完整临床和随访资料的新确诊DLBCL患者的病理组织标本进行研究。

1.1.2试剂MUM1、BCL2、BCL6兔抗人单克隆抗体［一抗（ab32072、ab45413、ab203619、ab126593）］由艾美捷科技有限公司（Abcam公司）提供，羊抗兔多克隆抗体［二抗（BA1125）］由武汉博士德生物工程有限公司提供。

1.2方法

1.2.1染色方法

1.2.1.1石蜡切片的制备与苏木精-伊红（hematoxylineosin staining，HE）染色组织标本经10%多聚甲醛固定，石蜡包埋，进行4 μm厚切片。将切片放入苏木精中染色10～30 min，之后用自来水流水冲洗15 min，将切片放入1%盐酸乙醇分化液中褪色，用5%伊红乙醇染液对比染色2～5 min，HE染色完毕，切片室温留存以进行观察。

1.2.1.2免疫组织化学染色制备的组织标本经过脱蜡、水化后，采用Elivision法进行免疫组织化学染色。MUM1、BCL2、BCL6作为阳性对照，三羟甲基氨基甲烷缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.2.2结果判定根据DLBCL标本中肿瘤细胞内出现清晰定位的棕褐色或棕黄色颗粒来判断其阳性表现。BCL2、BCL6及MUM1 3种已知标志物应用定性判断，BCL2以定位于细胞膜和细胞质出现特异着色大于30%为阳性；BCL6和MUM1为细胞核着色大于30%为阳性。

1.2.3治疗及随访80例患者采用利妥单抗、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱联合泼尼松（R-CHOP）方案治疗，随访4～60个月。

1.3统计学处理应用SPSS18.0统计软件进行数据分析，各阳性组与阴性组间比较采用χ2检验；总生存期（overall survival，OS）和无进展生存期（progression-free survival，PFS）分析采用Kaplan-Meier法；单因素生存曲线比较采用Log-rank检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1临床资料和特征80例DLBCL患者中男49例，女31例；男女比例为1.6∶1；中位年龄53岁。肿瘤发生于淋巴结内46例，淋巴结外34例。原发于淋巴结46例，胃8例，大肠7例，小肠7例，扁桃体4例，腮腺2例，睾丸、乳腺、胰腺、甲状腺、肾、中枢神经系统各1例。根据Ann Arbor分期，Ⅰ～Ⅱ期50例，Ⅲ～Ⅳ期30例。乳酸脱氢酶（LDH）正常（＜240 U/L）44例，升高（≥240 U/ L）36例。IPI评分低于3分51例，≥3分29例。见表1。

2.2形态学表现46例原发于淋巴结DLBCL组织标本多呈弥漫性生长，正常淋巴结结构多不存在，肿瘤细胞增大，呈圆形或卵圆形，细胞质呈嗜酸或嗜双色性，细胞核增大、偏位，可见一个或多个核仁，嗜酸或嗜碱性（图1A箭头所指），R-S细胞较为典型，核分裂象易见（图1B箭头所指），多数病例为一致的大B细胞形态；22例胃肠DLBCL组织标本主要表现为弥漫浸润性生长，破坏黏膜和腺体（图1C箭头所指）；其余病例组织标本表现较不典型。

表1　DLBCL组织中3种蛋白表达情况及其与临床病理特征的关系［n（%）］

图1　DLBCL肿瘤组织标本HE染色结果（400×）

2.3免疫组织化学法检测结果BCL2为细胞膜和细胞质着色（图2A），BCL6（图2B）和MUM1（图2C）为细胞核着色。BCL2、BCL6及MUM1 3种蛋白的阳性表达率分别为36.2%（29/80）、65.0%（52/80）、77.5%（62/80），3种蛋白表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

图2　BCL2、BCL6及MUM1蛋白的免疫组织化学染色结果（400×）

2.43种蛋白表达与DLBCL患者生存期分析80例患者中死亡28例。BCL2阴性组与阳性组患者平均生存期分别为47.2、35.7个月；BCL6阴性组与阳性组患者平均生存期分别为35.1、54.5个月；MUM1阴性组与阳性组患者平均生存期分别为51.7、35.4个月。BCL2表达与DLBCL患者OS具有相关性（P=0.001），阴性组患者预后较阳性组好，差异有统计学意义（P＜0.05），而与PFS无关（P=0.548）；BCL6表达与DLBCL患者OS及PFS均具有相关性（P=0.001、0.002），阳性组患者预后较阴性组好，差异有统计学意义（P＜0.05）；MUM1表达与DLBCL患者OS及PFS均具有相关性（P=0.001），阴性组患者预后较阳性组好，差异有统计学意义（P＜0.01）。见图3、表2。

图3　BCL2、BCL6、MUM1阴性组和阳性组患者OS与PFS Kaplan-Meier生存曲线比较

表2　DLBCL组织中3种蛋白表达与生存期的多变量分析

3　讨　论

本研究通过检测80例DLBCL患者肿瘤组织中BCL2、BCL6和MUM1 3种蛋白的表达情况对患者临床特征进行了比较，并对预后进行分析。BCL2、BCL6及MUM1蛋白阳性表达率分别为36.2%、65.0%和77.5%，3种蛋白表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；MUM1阴性组和BCL6阳性组患者预后相对较好（P＜0.05），而BCL2与DLBCL患者预后的关系尚不确切。

BCL2蛋白为一种抗凋亡蛋白，可调节线粒体、控制细胞色素C和其他凋亡因子的释放，对抑制凋亡具有重要作用［5］。但是有研究发现，BCL2蛋白的表达仅与DLBCL的分型有关，而与患者预后无关［6-7］。本研究结果表明，BCL2阳性表达主要发生于生发中心样 B细胞（GCB）型DLBCL患者，与Ann Arbor分期、年龄、性别等无关（P＞0.05），与低危IPI评分比较，差异有统计学意义（P=0.031），但Kaplan-Meier生存曲线和COX回归分析提示，BCL2的表达与DLBCL患者OS具有相关性（P=0.001），阴性组患者预后较阳性组好，差异有统计学意义（P＞0.05），而与患者PFS无关（P=0.548）。

BCL6是B细胞分化的抑制性基因，其低表达是肿瘤发生的一个重要因素，BCL6基因重排通过一系列调控机制，致使BCL6蛋白表达发生异常变化［8-10］。本研究结果显示，BCL6阳性表达患者多处于Ann Arbor分期的Ⅰ～Ⅱ期，与Ⅲ～Ⅳ期比较，差异有统计学意义（P=0.037），与低危IPI评分、年龄、性别等比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；根据Kaplan-Meier生存曲线和COX回归分析，BCL6的表达与DLBCL患者OS及PFS均具有相关性（P=0.001、0.002），阳性组患者预后较阴性组好，差异有统计学意义（P＜0.05）。

MUM1为一种骨髓瘤相关基因，在免疫系统的发育过程，即淋巴细胞活化和B细胞分化中具有关键性作用，提示DLBCL患者的亚型non-GCB分型［11］。本研究发现，86.7%（26/30）MUM1蛋白阳性患者处于Ann-Arbor分期Ⅲ～Ⅳ期，并且为高危IPI评分患者，二者差异有统计学意义（P=0.016），但与年龄、性别等比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。根据Kaplan-Meier生存曲线和COX回归分析，MUM1的表达与DLBCL患者的OS及PFS均具有相关性（P=0.001），阴性组患者预后较阳性组好。与Hans等［12］研究发现MUM1阳性患者预后较阴性患者差的结果一致。

综上所述，本研究对80例DLBCL患者采用R-CHOP方案治疗，具有临床治疗的一致性，MUM1阴性组和BCL6阳性组患者临床特征和预后均相对较好，而BCL2与DLBCL患者预后的关系尚不确切。对于已经确诊为DLBCL的患者，BCL2、BCL6和MUM1 3种蛋白可以作为生物标志物进行联合分析，对患者的治疗和预后可进行更佳的选择与判断。

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Expressions of BCL2，BCL6 and MUM1 protein and their relationship with prognosis of diffuse large B cell lymphoma

Che Jiangyan1，Wang Baohong2△（1.Weifang Medical University，Weifang，Shandong 261000，China；2.Weifang Municipal People′s Hospital，Weifang，Shandong 261000，China）

ObjectiveTo investigate the expressions of MUM1，BCL2 and BCL6 protein in diffuse large B cell lymphoma（DLBCL）tissue and their relation with the DLBCL pathological characteristics and prognosis.MethodsThe pathological tissue samples in 80 cases of newly diagnosed DLBCL with intact clinical and follow up data in the Weifang Municipal People′s Hospital from February 2010 to February 2014 were collected.The immunohistochemistry technique was used to assess the expressions of MUM1，BCL2 and BCL6 protein in DLBCL tissue，then their mutual relationship and the relation with clinical pathological characteristics and prognosis were analyzed.ResultsThe positive expression rates of BCL2，BCL6，MUM1 protein in 80 cases of DLBCL were 36.3%（29/80），65%（52/80）and 77.5%（62/80）respectively.The average survival time in the MUM1 positive group and negative group were 35.4 months and 51.7 months respectively，which in the BCL2 positive group and negative group were 35.7 months and 47.2 months，which in the BCL6 positive group and negative group were 54.5 months and 35.1 months respectively.The BCL6 positive and MUM1 negative groups showed relatively better prognosis，the difference was statistically significant（P＜0.05）.But the relation between BCL2 and prognosis in the patients with DLBCL was still inexact.Conclusion The expression situation of MUM1，BCL2 and BCL6 protein provides the important information for clinical therapy and prognosis of DLBCL.But it is still a lack of understand on its action mechanism，which is worth deep research.

DNA-binding proteins；Proto-oncogene proteins c-bcl-2；Lymphoma，B-Cell/pathology；Immunohistochemistry；Prognosis

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.01.009

A

1009-5519（2016）01-0025-03

车江雁（1989-），硕士研究生，主要从事血液系统疾病及血液肿瘤的研究。

△，E-mail：77160520@qq.com。

（2015-10-14）