PCOS患者雄激素受体基因和性激素结合蛋白基因情况观察*

马娟周俊田贵聪石华

PCOS患者雄激素受体基因和性激素结合蛋白基因情况观察*

马娟①周俊①田贵聪①石华①

目的：研究观察多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）患者的雄激素受体基因和性激素结合蛋白基因的情况。方法：选取2014年11月-2015年7月本院接诊的62例PCOS患者为观察组，同一时期由于生殖系统发生异常导致不孕的62例患者为对照组。提取所有患者血液标本的DNA进行基因扩增、琼脂糖凝胶、毛细管电泳等检测，观察研究PCOS患者的雄激素受体和性激素结合蛋白基因的情况。结果：观察组SHBG-TAAAA基因型多态性与胰岛素抵抗的研究中，发现9/9基因型的分布在胰岛素抵抗和非胰岛素抵抗两组中存在统计学差异（P＜0.05）；观察组中，短重复组在高雄激素血症组的分布为52.94%，在雄激素正常组分布为42.86%；而长重复组在高雄激素血症组的分布为61.76%，在雄激素正常组的分布为39.29%，两组数据比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：雄激素受体基因和性激素结合蛋白基因与PCOS相关，可对PCOS的检查指标、PCOS防治、及早诊断起重要作用。

多囊卵巢综合征； 雄激素受体基因； 性激素结合蛋白基因

First-author's address：Longgang District Second People's Hospital of Shenzhen City，Shenzhen 518000，China

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）属于妇科领域中比较复杂内分泌代谢疾病，主要由于女性体内过高的雄性激素及性激素平衡导致不能正常排卵的常见疾病，该病不但会对女性的内分泌功能造成严重影响，更加增大了女性发生心血管疾病、糖尿病、宫内肿瘤及其他妇科疾病的风险，严重影响多数女性患者的健康［1］。所以，近几年来，关于研究多囊卵巢综合征（PCOS）患者的雄激素受体基因（AR）与性激素结合蛋白基因（SHBG）的相关性在国内外不断发展，但是，这两基因与该病的具体关系，至今无一结论［2］。所以，本研究对PCOS患者中雄激素受体基因（AR）、性激素结合蛋白基因（SHBG）的情况进行研究观察，为临床研究工作提供有力的依据。

1　资料与方法

1.1一般资料 选取2014年11月-2015年7月本院接诊的62例PCOS患者为观察组，对照组为同一时期由于生殖系统发生异常导致不孕的62例患者。PCOS患者均符合“中华医学会妇产科学分会内分泌学组及欧洲人类生殖和鹿特丹标准”［3］。对照组为生理期正常且非内分泌性不孕患者，年龄20～36岁，平均（29.4±3.8）岁；观察组患者年龄21～35岁，平均（31.7±2.4）岁。纳入标准：（1）所有患者均同意参与该研究，签署知情同意书；（2）患者自身没有其他内分泌系统的疾病；（3）无严重的器官功能障碍；（4）半年之内及以上未用过激素类药物；（5）无糖尿病等病史。

1.2方法

1.2.1PCOS与雄激素受体基因（AR） 所有研究对象进行3 mL静脉血的抽取，再次加入枸橼酸钠进行抗凝，将其存贮在-80 ℃的恒温箱中。将蛋白酶K和200 μL的血液样本置于离心管中混合均匀，随后加入缓冲剂反向混合。在55 ℃环境中，放置混合液10 min，在此期间进行5～8次反向混合，液体变为清亮时为标准。再加入无水乙醇，充分的均匀混合再加吸附柱［4］。经过离心、4次漂洗后，静置于室温5 min。在无污染的离心管中，加入缓冲剂，静置离心。收集溶液，测定DNA纯度。对AR目的基因应用PCR技术扩增，对PCR的产物监测。鉴定CAG序列的多态性和重复次数［5］。

1.2.2PCOS与性激素结合蛋白基因（SHBG） 经过采样、提取DNA、扩增SHBG、PCR的产物检测、分析毛细管电泳序列进行鉴定TAAAA序列多态性和重复次数［6］。

1.3统计学处理 采用软件SPSS 13.0统计学软件分析数据，计量资料以（）表示，比较采用t检验，计数资料比较采用 χ2检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1PCOS与AR的关系

2.1.1两组AR-CAG片段重复多态的分布状况 统计分析研究对象的AR-CAG，重复数范围在11～33。两组患者的重复数主要集中在21、22、23。观察组患者所占的比例分别为：28.03%、32.49%、30.84%；对照组患者所占的比例分别为：29.85%、36.66%、28.75%，两组数据比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。

2.1.2AR-CAG重复多态性分布情况 按照两组患者的AR-CAG重复多态性分布，22作为分据点，分为长、短两重复组。短重复组（n≤22）在观察组、对照组中的比例分别为48.39%（30例）、51.61% （32例）；长重复组（n＞22）在观察组、对照组中的分布分别为51.61%（32例）、48.39%（30例），两组数据比较差异均无统计学意义（P=0.684、0.497）。

2.1.3观察组患者高雄激素血症与AR-CAG的重复多态性关系 根据观察组患者血清中睾酮的浓度值，以0.7 ng/mL为界线点，将其分为高雄激素血症组34例和雄激素正常组28例。观察组中，短重复组在高雄激素血症组的分布为52.94%（18例），在雄激素正常组分布为42.86%（12例）；而长重复组在高雄激素血症组的分布为61.76%（21例），在雄激素正常组的分布为39.29%（11例），上述数据比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。

2.1.4观察组患者胰岛素抵抗与AR-CAG的重复多态性关系 根据血清中的胰岛素水平，以空腹血清胰岛素水平60 pmol/L作为参考，将观察组患者分为胰岛素抵抗组（＞60 pmol/L）36例和非胰岛素抵抗组（≤60 pmol/L）26例。短重复组中胰岛素抵抗组分布比例为56.67%（17例），非胰岛素抵抗组分布比例为43.33%（13例），比较差异无统计学统计意义（P＞0.05）。长重复组中胰岛素抵抗组分布比例为59.38%（19例）、非胰岛素抵抗组的分布为40.63%（13例），比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 PCOS与SHBG的关系

2.2.1比较两组患者的SHBG-TAAAA分布情况 通过琼脂糖凝胶电泳检测、毛细管电泳序列分析，能够检测出SHBG-TAAAA的13种基因型，两组SHBG-TAAAA基因型的分布情况比较差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2.2观察组患者SHBG-TAAAA重复多态性与胰岛素抵抗的关系 根据以上的分组方式，观察组患者分别分为胰岛素抵抗组（n=36）和非胰岛素抵抗组（n=26）。两组患者的9/9基因型分布情况比较差异有统计学意义（P＜0.05）；其他分布比较差异均无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表1　两组患者SHBG-TAAAA基因型分布情况的比较 例（%）

续表1

表2　胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组的SHBG-TAAAA基因型分布情况的比较 例（%）

续表2

3　讨论

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）的致病机制比较复杂，导致该病发生的主要原因为内分泌不平衡和卵泡发育出现异常引起的。胰岛素抵抗和高雄激素血症属于内分泌失调病理基础，而且卵泡发育发生停滞会减少成熟卵泡的生成量减少，或者成熟卵泡的排出发生障碍［7-8］。最近几年来，许多临床研究表明其与雄激素受体基因（AR）、性激素结合蛋白基因（SHBG）、卵泡发生异常及内分泌失调有密切联系。

雄激素受体影响着雄激素的发挥作用，所以AR的表达会在雄激素活性中起着关键性作用。在机体的各个器官中雄激素均会有所表达，生殖器官中该激素的表达达到最高［9］。编码AR的基因主要位于Xq11-12位点上，其中含7个内含子、8个外显子。且种族及地域性对CAG产生不同的影响，例如在欧洲在8～39，美洲在8～30。近年来研究表明，地域相同但不同种族的人CAG的多态性有着明显差异［10-12］。所以，AR基因表达也有相对稳定性。随着CAG重复次数的增长，AR基因的转录活性会减弱。

性激素结合蛋白在机体中可起到特异运输功能，能把雄激素和雌激素送达到器官。且SHBG编码基因主要位于17p13-12位点，且重复序列（TAAAA）的重复次数与编码基因的转录活性有密切联系［13-15］。性激素被运送各作用器官上，还受血浆SHBG水平的多样性影响，主要通过体液循环，或者直接作用等影响方式。所以，根据近年研究，可以利用血浆中SHBG的水平能够用来判断体内胰岛素水平。

本研究主要对POCS患者的AR进行观察，结果显示，两组患者在CAG重复序列多态性上比较差异无统计学意义（P＞0.05），且所有患者在短重复组和长重复组的分布状况比较差异无统计学意义（P＞0.05）。研究结果也表明PCOS的患病率与CAG重复序列多态性无直接联系，但是也不能排除该基因在PCOS的发病上有潜在因素的可能［16-19］。另外，对62例PCOS患者单独研究，短重复组在高雄激素血症组的分布为52.94%（18例），在雄激素正常组分布为42.86%（12例）；而长重复组在高雄激素血症组的分布为61.76%（21例），在雄激素正常组的分布为39.29%（11例），该结果表明ARCAG的多态性在高雄激素血症发生率上起着重要作用，且短重复组更易引起雄激素血症的发生相比于长重复组。主要原因由于短重复序列会提高雄激素的转录活性，加速了雄性激素的分泌，机体的内分泌发生失衡，更加引起高雄激素血症的发生［20-22］。所以，AR-CAG的多态性也是PCOS发生的另外潜在致病因素。短重复组中胰岛素抵抗组分布比例为56.67% （17例），非胰岛素抵抗组分布比例为43.33%（13例），差异无统计意义（P＞0.05）。长重复组中胰岛素抵抗组分布比例为59.38%（19例）、非胰岛素抵抗组的分布为40.63%（13例），进一步表明胰岛素抵抗与AR-CAG的多态性无直接相关性，可能是由于AR-CAG的多态性是在影响雄激素水平的同时，间接影响胰岛素的分泌。

本研究发现，与国外相关报道的所有患者的SHBG-TAAAA的13种基因型存在明显差异相比，本文并未得出相似结果，这可能与患者的种族、地域不同有关；也可能与该研究的所选取的患者例数有关系，该结论目前还未被认可。在对62例PCOS患者单独研究中发现，9/9基因型的分布在胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组中存在显著性差异（P＜0.05）。该结果可以推断出，PCOS患者的胰岛素抵抗会与9/9基因型TAAAA的多态性有一定的联系。

综上所述，PCOS的发生与AR、SHBG有一定关系，可对PCOS的检查指标、PCOS防治、及早诊断起重要作用。

［1］乔世聪，侯丽辉，王鑫，等.多囊卵巢综合征患者人体测量学指标与中医证型相关性的研究［J］.实用医学杂志，2015，31（1）：147-149.

［2］路炜，卢潭敏.雄激素受体基因和性激素结合蛋白基因与多囊卵巢综合征的相关性研究［J］.中国妇幼保健，2015，30 （22）：3775-3778.

［3］代小燕，邸石，王罡，等.坤泰胶囊对多囊卵巢综合征不孕卵泡质量和激素分泌的影响［J］.中国妇幼保健，2015，30 （31）：5443-5445.

［4］田波，吴艳，李启富，等.FABP2基因Ala54Thr多态性与多囊卵巢综合征的相关性研究［J］.解放军医学杂志，2014，39 （1）：44-47.

［5］林伟，董磊.黄体生成素受体及类固醇激素合成急性调节蛋白在大鼠多囊卵巢综合征模型中的表达［J］.生殖与避孕，2016，36（1）：9-14.

［6］周飞飞，谭季春，王莎莎，等.环境雌激素双酚A与多囊卵巢综合征的相关性研究［J］.中国妇幼保健，2014，29（13）：2049-2051.

［7］甄鑫，颜桂军，孙海翔，等.CYP19 A1基因多态性与多囊卵巢综合征的相关性研究［J］.医学研究生学报，2014，27（6）：596-599.

［8］连方，赵帅.补肾调冲法对多囊卵巢综合征患者抗苗勒氏管激素及卵细胞质量的影响［J］.中国中西医结合杂志，2012，32（1）：9-12.

［9］王芳，蒋玲，邓晓惠，等.多囊卵巢综合征患者血清Apelin水平变化及相关因素分析［J］.中国糖尿病杂志，2012，20 （2）：95-98.

［10］王月恒，邢毅，王玖玲，等.多囊卵巢综合征患者血清内脂素及TNF-α的水平变化及其意义［J］.山东大学学报（医学版），2012，50（2）：94-97，101.

［11］董智力，韩世愈，李岩，等.游离睾酮指数与伴高雄激素血症的多囊卵巢综合征的相关性研究［J］.哈尔滨医科大学学报，2012，46（2）：144-146.

［12］靳久红.中西医结合治疗肥胖性多囊卵巢综合征的疗效观察［J］.中国妇幼保健，2016，31（1）：187-188.

［13］周晓梅，周燕妮，张小燕，等.8-羟基脱氧鸟苷与多囊卵巢综合征的相关性研究［J］.中国现代医学杂志，2012，22 （16）：48-50.

［14］杭晨，杨炜敏，何善阳，等.多囊卵巢综合征患者血清中蛋白因子的变化及其临床意义［J］.中国病理生理杂志，2013，29（12）：2251-2255.

［15］魏莉娜，李俐琳，方丛，等.控制性卵巢刺激对多囊卵巢综合征患者和正常排卵妇女卵源性因子表达的差异［J］.中山大学学报（医学科学版），2013，34（6）：867-872.

［16］彭红梅，姚元庆.多囊卵巢综合征患者子宫内膜异常增生的诊治［J］.中国实用妇科与产科杂志，2007，23（9）：671-672.

［17］郭银华，谈勇，邹奕洁.补肾促排卵汤对PCOS模型大鼠颗粒细胞芳香化酶的影响［J］.南京中医药大学学报，2016，32 （1）：38-40.

［18］黎小斌，翟家乐，李丽芸，等.灵术颗粒对多囊卵巢综合征患者内分泌及脂代谢的影响［J］.中医杂志，2011，52（1）：31-34.

［19］郑瑞芹，刘晓芹，张建英，等.PCOS患者早期自然流产与子宫内膜雌孕激素受体的关系及中西医结合治疗［J］.中国计划生育学杂志，2011，19（5）：294-297.

［20］贾新转，魏兰，王咏梅，等.PCOS患者卵泡液维生素D水平与IVF周期结局相关性分析［J］.现代预防医学，2015，42 （10）：1904-1906.

［21］李轶，李瑞岐，欧颂邦，等.高雄激素和非高雄激素型多囊卵巢综合征患者血清抗苗勒管激素分泌特点及诊断效能比较［J］.实用妇产科杂志，2014，30（2）：111-115.

［22］郭江虹.多囊卵巢综合征孕妇胎盘类固醇的研究［J］.中国现代医学杂志，2016，26（1）：94-98.

Observation of Androgen Receptor Gene and Sex Hormone Binding Protein Gene in PCOS Patients

MA Juan，ZHOU Jun，TIAN Gui-cong，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（14）：020-023

Objective：To investigate the status of androgen receptor gene and sex hormone binding protein gene in patients with polycystic ovary syndrome（PCOS）.Method：A total of 62 PCOS patients were selected as the observation group from November 2014 to July 2015 in our hospital，the control group were choosed from the same period due to the occurrence of reproductive system abnormalities lead to infertility in 62 patients.DNA gene amplification，agarose gel electrophoresis and capillary electrophoresis were performed to detect the expression of androgen receptor and sex hormone binding protein gene in PCOS patients.Result：SHBG-TAAAA gene type of polymorphic and insulin resistance of the observation group in the study，found that 9/9 genotype distribution in insulin resistance and insulin resistance had a significant difference in two groups（P＜0.05）.In the observation group，the distribution of short repeating group in high androgen blood group was 52.94%，and in normal androgen group was 42.86%，respectively.The distribution of long repetitive group in hyperandrogenemia group was 61.76%，in the distribution of normal androgen group was 39.29%，two group's data had significant differences（P＜0.05）. Conclusion：Androgen receptor gene and sex hormone binding protein gene is associated with polycystic ovary syndrome （PCOS），which may be an important role in the detection of PCOS，PCOS prevention and treatment，and early diagnosis of polycystic ovary syndrome.

Polycystic ovary syndrome； Androgen receptor gene； Sex hormone binding protein gene

广东省医学科学技术研究基金项目（2015122224333594）

①广东省深圳市龙岗区第二人民医院 广东 深圳 518000通信作者：马娟

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.14.005

2016-02-17） （本文编辑：蔡元元）