不同冷冻稀释液的配方对辽宁绒山羊精子活率的影响

张桐炜，谷　建

(辽宁省营口市动物疫病预防控制中心，辽宁 营口 115000)



不同冷冻稀释液的配方对辽宁绒山羊精子活率的影响

张桐炜，谷建

(辽宁省营口市动物疫病预防控制中心，辽宁 营口 115000)

为了使辽宁绒山羊精液在冷冻保存时具有更好的活性，本实验采用一步稀释法，通过检测精子活率的方法比较六种冷冻稀释液。筛选出了适合辽宁绒山羊精液冷冻的最佳基础冷冻稀释液配方(100mL)：Tris 3.44g，柠檬酸1.83g，果糖1.26g，卵黄15%，甘油5%。

辽宁绒山羊；精液；冷冻稀释液；配方；筛选

辽宁绒山羊主要分布在辽宁东部山区以及辽东半岛地区，是在特定的历史和地域条件下，经过长期自然选择和人工选育所形成的绒肉兼用型绒山羊品种。具有体格大、抗逆性强、产绒量髙、绒纤维细长、绒毛比例高、绒毛洁白、手感柔软等优良品质[1]。并且续山羊品种具有稳定的遗传特性，携带有其他续山羊品种所没有的独特基因，是培育优质高产，改良低产绒山羊的宝贵遗传资源。辽宁绒山羊是我国重点保护的家养动物品种，是我国政府明令禁止出口的少数几个品种之一[2]。

羊精液的冷冻保存不仅能提高种公羊的利用率，而且能降低繁殖成本，对人工授精技术的推广应用，对养羊生产的发展都产生了巨大的推动作用[3]。

1　实验材料

试验动物：辽宁绒山羊种公羊7只，该7只种公山羊为3～5岁发育良好、体格健壮、性机能旺盛。

主要试剂：果糖，海藻糖，蔗糖，Tris(三羟甲基氨基甲烷)，柠檬酸为进口分装；甘油，葡萄糖，乙二醇，DMSO，乳糖，EDTA，柠檬酸钠，青霉素，链霉素，维生素E，SOD(过氧化物歧化酶)，FITC-PSA(异硫氰酸荧光素豌豆凝集素)，罗丹明123，PI(碘化丙啶)，卵黄(新鲜鸡蛋)

实验器材：电子天平、OLYMPUS CH20显微镜、精细管程序冷冻仪(型号TSM-140MS，富士平工业株式会社)等。

2　试验方法

2.1精液的准备

用假阴道法采精，采精后立即观察精液外观性状并在光学显微镜下检查精液质量，只有精液颜色正常，有云雾状，精子活力在90%以上时，才用于实验。

2.2精子活率的测定

取1滴待检查精液稀释后，置于载玻片上，上覆盖玻片，借助光学显微镜放大200～400倍，用基础稀释液作为稀释剂(见表1)，以保持正常运动，计数四角及中央五个方格中的非直线运动精子数(包括死精子，摆动旋转运动的精子)，然后把计数板放入90℃保温箱内大约3～5min，杀死全部精子后在显微镜下计出全部精子数。活率=(总精子数-非直线运动的精子数)/总精子数×100%。

表1　六种基础稀释液配方

2.3结果与分析

经过SPSS V13.0软件分析后，对数据进行显著性检验。结果见表2。

表2　6种不同配方稀释液精子解冻后活率

注：同列数据后标注的不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同小写字母表示差异不显著(P>0.05)

实验结果表明，在所选用的6种冷冻稀释液中。E组稀释液解冻后精子活率，均显著高于A、C、F组的稀释液(P<0.05)。与B、D组稀释液相比效果不显著(P>0.05)，但各项指标都相对高于B、D组稀释液。因此筛选出E组冷冻稀释液，作为辽宁绒山羊精液冷冻稀释液的配方。

3　讨论

本实验通过比较6种冷冻稀释液对精液冷冻解冻后活率，初步筛选出山羊细管冷冻基础稀释液E(100mL)：Tris 3.44g，柠檬酸1.83g，果糖1.26g，卵黄15%，甘油5%。

[1] 姜怀志，韩迪，郭丹，等.辽宁绒山羊的若干种质特性[J].中国草食动物,2010(6):72-75.

[2] 杨秋凤，刘兴伟，杨咏梅,等.辽宁绒山羊年龄与续毛生产性能的关系[J].中国草食动物,2008(8):28-30.

[3] 王超，周庆雨.山羊精液冷冻过程中影响因素分析[J].畜牧与兽医,1995,27(1)：11-13.

2015-12-31

张桐炜(1983-)，助理兽医师，本科，研究方向：预防兽医学。

S814.3

A文章编号：2095-9737(2016)04-0019-01