STAT-5和Livin在喉癌组织中的表达及临床意义

李树华蒋振华　王杰



STAT-5和Livin在喉癌组织中的表达及临床意义

李树华1蒋振华1王杰1

目的 探讨STAT-5和Livin在喉癌组织及正常组织中的表达及其与临床病理学特征的关系，探讨STAT-5和Livin在肿瘤细胞凋亡中的作用机制。方法 选取绵阳市中心医院2012年5月～2014年5月手术切除的喉癌组织、正常黏膜组织各48例，采用SP免疫组化法检测STAT-5与Livin的表达情况。应用SPSS17.0软件包对结果进行统计学分析。结果 STAT-5蛋白和Livin蛋白主要在胞质中表达。STAT-5蛋白在喉癌组组中阳性表达率为81.25%，在正常组织中阳性表达率为20.83%，两组比较有显著性差异（P＜0.01）；Livin蛋白在喉癌组组中阳性表达率为77.08%，在正常组织中阳性表达率为16.67%，两组比较有显著差异（P＜0.01）。STAT-5与Livin在喉癌组织中的蛋白表达与喉癌的部位差异无统计学意义，（P＞0.05），而与肿瘤的临床分期、临床病理分级及淋巴结转移的差异有显著统计学意义（P＜0.05）。STAT-5蛋白与Livin蛋白在喉癌组中表达呈正相关（P＜0.05）。结论 STAT-5蛋白与Livin蛋白表达喉癌的发生、发展中发挥重要的作用。我们认为STAT-5蛋白表达可能上调Livin蛋白表达，从而细胞凋亡抑制增强，加速肿瘤的发生、发展。

STAT-5，Livin，喉癌组织，免疫组化.

1四川绵阳市中心医院耳鼻咽喉科（621000）

喉癌在我国东北地区发病率最高，多发于50～70岁男性，但由于近年来烟草消费的低龄化，喉癌的发病年龄有降低趋势。女性吸烟人数的增加也使女性喉癌发病率不断增加。喉癌的发病有明显的地域性特点。2008年WHO统计我国喉癌发病率男性为2.2/10万，女性为0.5/10万，死亡率男性1.2/10万，女性为0.4/10万。细胞凋亡与肿瘤的发生、发展有着密切的关系，现已成为肿瘤研究的热点。信号转导和转录激活因子（signal transducers and activators of transcription，STAT）是一类影响基因转录的胞质蛋白家族。近年来研究发现，STAT-3、STAT-5在多种肿瘤细胞中都有过表达，是肿瘤细胞自分泌循环中重要的信号转导和转录激活因子。凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis proteins，IAPs）是近年来细胞凋亡研究中备受瞩目的一类蛋白家族，其中Livin是最新发现的凋亡抑制蛋白，在细胞凋亡中有较强的抑制作用。STAT-5和Livin在喉癌组织中的共同表达研究未发现。本文采用SP免疫组化方法检测STAT-5和Livin在喉癌及正常组织中的表达情况，并探讨其在肿瘤细胞凋亡中的作用机制。

资料与方法

1一般资料

收集绵阳市中心医院2012年5月～2014年5月手术切除的喉癌组织、正常黏膜组织各48例。正常组织:取自肉眼见原发灶外距癌组织边缘20mm以外的喉黏膜，并经病理诊断为正常的喉黏膜，均为首次手术，术前均经病理证实为鳞癌，均未进行放、化疗等肿瘤学治疗。详细记录患者年龄、性别、肿瘤部位、分期、分化及转移情况等。48例喉癌患者中，男性35例，女性13例；年龄38～70岁，平均56岁；按UICC（1997）分类：声门上型31例，声门型17例；按2002年国际抗癌联盟（UICC）的TNM分期方案：T1期8例，T2期10例，T3期16例，T4期14例；按病理分化程度：高分化14例，中分化19例，低分化15例；有淋巴结转移的26例，无淋巴结转移的22例。

2主要实验试剂

兔抗人STAT-5多克隆抗体（购自武汉博士德生物工程公司）兔抗人Livin多克隆抗体（武汉博士德生物工程公司），兔抗人Caspase-3多克隆抗体（武汉博士德生物工程公司）；SP免疫组化染色即用型快速免疫组化MaxVisionTM试剂盒（福州迈新生物技术有限公司）；DAB显色剂（北京中杉金桥生物技术有限公司）。

3主要步骤

所有标本均经10%甲醛固定24小时，常规石蜡包埋，4μm连续切片，脱蜡，染色前用微波炉进行抗原修复，PBS冲洗，DAB显色，苏木精复染，操作严格按照说明书进行。

4结果判断标准

与1位病理医师一起独立观察每张切片中随机检测5个视野，STAT-5蛋白与蛋白Livin蛋白均主要在胞质中表达，故阳性标准细胞的胞质染色应呈棕黄色。根据肿瘤细胞染色程度及阳性细胞百分率进行评分，两者之和为总分：0～2分为阴性（－），2～4分为阳性（+）4～6分（包括4）为强阳性（++）。

5统计学处理

采用SS17.0软件进行统计学分析，该实验数据为定性资料，组间比较采用χ2检验。

实验结果

1STAT-5蛋白与Livin蛋白的表达在细胞质较为明显（图a、b、c、d）。

图a：STAT-5蛋白在喉癌组织中表达（sp*400）

图b：STAT-5蛋白在正常组织中的表达（sp*400）

图c：Livin蛋白在喉癌组织中表达sp*400）

图d：Livin蛋白在正常组织中表达（sp*400）

STAT-5蛋白在喉癌组组中阳性表达率为81.25%，在正常组织中阳性表达率为20.83%，两组比较有显著性差异（P＜0.01）；Livin蛋白在喉癌组组中阳性表达率为77.08%，在正常组织中阳性表达率为16.67%，两组比较有显著差异（P＜0.01）（见表1）。

表1　STAT-5蛋白与Livin蛋白在喉癌组织及正常组织中的表达

2STAT-5蛋白与Livin蛋白在喉癌组组中表达水平与临床病理特征的关系（见表2）

STAT-5与Livin在喉癌组织中的蛋白表达与喉癌的部位差异无统计学意义，（P＞0.05），而与肿瘤的临床分期、临床病理分级及淋巴结转移的差异有显著统计学意义（P＜0.05）。

表2　STAT-5蛋白与Livin蛋白在喉癌组织中表达与临床病理参数间的关系

3STAT-5蛋白与Livin蛋白在喉癌组中表达呈正相关（P＜0.05）。（见表3）

表3　STAT-5蛋白与Livin蛋白在喉癌组组中表达的相关性分析

讨论

信号转导和转录激活因子（signal transducers and activators of transcription，STAT）是Fu等于1992年在研究干扰素诱导基因转录时首次鉴定的一个胞质蛋白家族，能影响细胞增殖、分化、凋亡［1］。STAT家族蛋白分子由大小750～850个氨基酸组成，其结构和功能的保守区域包括N-端的保守序列氨基端（NH2）、卷曲螺旋区（CCD）、DNA结合区（DBD）、连接区、SH2结构域和C-端的转录活性区（TAD）。SH2结构域是STAT中最保守也是最重要的片段，参与STAT的氨基酸磷酸化并在STAT二聚体的形成中发挥重要作用［1］。迄今为止，已发现6个哺乳动物中的STAT相继被克隆。STAT-5是近年来新发现的STAT家族中重要的成员之一，被认为是细胞增殖促进因子和凋亡抑制因子。STAT家族活化主要经JAK/STAT途径。细胞因子受体与配体结合后形成二聚体，使与受体藕联的另一类激酶JAK活化后，可募集细胞质内STAT，使其发生磷酸化，从而激活STAT，激活状态下可参与肿瘤的发生、发展［2］。

凋亡抑制蛋白 （Inhibitor of apoptosis proteins，IAPs）是近年来细胞凋亡研究中备受瞩目的一类蛋白家族。Lin等［3］在人胎肾互补DNA文库中分离得到一种新发现的凋亡抑制蛋白。文献报道，Livin蛋白在多种肿瘤细胞中呈高表达，如黑色素瘤、肺癌、膀胱癌等［4，5］。Crnkovic-Mertens等［6］利用siRNA术干扰宫颈癌Hela细胞中内源性Livin表达，发现它可有效抑制Hela细胞生长，同时发现其放射线、肿瘤坏死因子α等的敏感度增加，表明Livin可能在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用。

本项实验采用免疫组织法在蛋白水平上研究STAT-5和 Livin在喉癌组织中的表达情况及STAT-5在喉癌组组中的表达与临床病理特征的关系。我们得出实验结果如下：STAT-5蛋白和Livin蛋白主要在胞质中表达。STAT-5蛋白在喉癌组组中阳性表达率为81.25%，在正常组织中阳性表达率为20.83%，两组比较有显著性差异（P＜0.01）；Livin蛋白在喉癌组组中阳性表达率为77.08%，在正常组织中阳性表达率为16.67%，两组比较有显著差异（P＜0.01）。STAT-5与Livin在喉癌组织中的蛋白表达与喉癌的部位差异无统计学意义，（P＞0.05），而与肿瘤的临床分期、临床病理分级及淋巴结转移的差异有显著统计学意义（P＜0.05）。STAT-5蛋白与Livin蛋白在喉癌组中表达呈正相关（P＜0.05）。实验表明：STAT-5蛋白与Livin蛋白在喉癌的发生、发展中发挥重要的作用。我们认为STAT-5蛋白表达可能上调Livin蛋白表达，从而细胞凋亡抑制增强，加速肿瘤的发生、发展。

正常细胞的增殖和凋亡存在动态平衡，维持机体内环境稳定，而细胞凋亡功能异常将导致肿瘤的发生、发展。本研究证实STAT-5蛋白与Livin蛋白在喉癌组中表达存在正相关性，有望通过研究某种基因药物，阻断STAT-5的表达，抑制Livin的表达，加速细胞凋亡，降低肿瘤疾病的发生、发展，具体相关作用机制仍需进一步研究。

1曹兵.STAT蛋白靶向肿瘤治疗研究进展［J］.国际肿瘤学杂志，2007，34（9）:651-653.

2BromberJ，DarnellJE.TheroleofSTATsin transcriptional control and their impact on cellarfuction［J］. Oncogene，2000，19:2468-2473.

3Lin SH，Deng G，Huang Q，et al.A novel member of the inhibitor of apoptosis rotein family.Biochem Biophys Res Commun，2000，279（3）:820-831.

4Vucic D，Stennicke HR，Pisabarro MT，et al.ML-IAP，a novel inhibitor of apoptosis that is preferentially expressed in human melanomas［J］.Curr Biol，2000，10（21）:1359.

5Gazzaniga P，Gradione A，Giuliani L，et al.Expression and prognostic significance of livin，surviving and other apoptosis related genes in the progression of superficial bladder cancer［J］.Ann Oncol，2003，14（1）:85.

6Crnkovic-Mertens I，Semzow J，Hoppe-Seyler F，et al. Isoformspecific silencing of the Livin gene by RNA interferencedefinesLivinbetaaskeymediatorof apoptosis inhibition in HeLa cells［J］.J Mol Med，2006，84 （3）:232-240.

（收稿:2015-04-15）

Expression of STAT-5 and Livin in laryngeal carcinoma and its clinical significance

LI Shuhua，JIANG Zhenhua，WANG Jie
Department of Otolaryngology，Mianyang Municipal Central Hospital，Sichuan，621009，China

Objective to explore the expression of STAT-5 and Livin in laryngeal carcinoma tissue and normal tissue and its relationship with clinicopathological features，and to study of STAT-5 and Livin in tumor cell apoptosis mechanism.Method to select the laryngeal carcinoma and normal mucosa in 48 cases during May 2012 and May 2014 year in the Mianyang City Central Hospital surgical，to adopt SP immunohistochemical method for detecting the expression of STAT-5 and Livin.SPSS17.0 software package for statistical analysis of the results.Results the expression of STAT-5 and Livin in the cytoplasm.the expression of STAT-5 protein in laryngeal Cancer Group is 81.25%，the expression in normal tissues is 20.83%，there are significant differences in the two groups（P＜0.01）；the positive expression rate of Livin protein in laryngeal cancer is 77.08%，in the positive expression rate in normal organization is 16.67%，two group compared has significantly differences（P＜0.01）.the of protein expressions STAT-5 and Livin in laryngeal cancer organization have differences no statistics meaning with laryngeal cancer of parts，（P＞0.05），and have significantly statistics meaning with the tumor of clinical staging，and clinical pathology grading and the lymph nodes transfer of differences（P＜0.05）.the expression of STAT-5 was positively correlated in laryngeal Cancer Group（P＜0.05）.Conclusion the expression of Livin protein and STAT-5 plays an important role in the development in laryngeal carcinoma.We believe that the expressions of Livin protein and STAT-5 protein are likely to increase，thus apoptosis inhibitionenhanced，and accelerate the tumor onset and development.

STAT-5；Livin，Carcinoma；Immunohistochemistry

王杰，主任医师.Email:416833285@qq.com

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.02.003