胶体金免疫层析法快速诊断牛布鲁氏菌病

杨登勇

（平塘县农村工作局贵州 平塘 568300）

胶体金免疫层析法快速诊断牛布鲁氏菌病

杨登勇

（平塘县农村工作局贵州 平塘 568300）

目的：分析胶体金免疫层析法快速诊断牛布鲁氏菌病的价值。方法：选取健康牛血清30份与布鲁氏菌病牛血清30份，采用胶体金免疫层析法对布鲁氏菌病牛与健康牛进行对比测试，在不同血清用量的检验方式下，明确最佳血清用量，建立快速诊断牛布鲁氏菌病的方式。结果：胶体金免疫层析法在牛布鲁氏菌病临床检验中应用的最佳血清用量为10μl，检测敏感度为90%（27/30），特异性为96.67%（29/30）。结论：胶体金免疫层析法在快速诊断牛布鲁氏菌病中的应用价值较为突出，具有敏感性较高、特异性较强的特点，血清用量较小，实际检验的方式较为便利，建议广泛推广和应用。

胶体金免疫层析法；快速诊断牛布鲁氏菌病；血清检验

布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌属的细菌侵入机体，诱发传染变态反应性的人畜共患传染病。近些年来，牛布鲁氏菌病的发病几率呈现出逐年递增的趋势，加强对疾病检验方式的研究，有助于降低布鲁氏菌病的传播几率，保证社会的稳定与经济的快速发展。近些年来，随着医疗卫生事业的不断发展，胶体金免疫层析法逐渐在布鲁氏菌病实践检验中得到应用，为了深入研究胶体金免疫层析法的实践应用价值，文章选取健康牛血清30份与布鲁氏菌病牛血清30份，采用胶体金免疫层析法对布鲁氏菌病牛与健康牛进行对比测试，现总结内容如下。

1 材料与方法

1.1 实验试剂

氯金酸（AuCI3HCI.4H2O）采用上海试剂一厂的产品，硝酸纤维素膜（NC）采用上海医药工业研究院的产品。牛血清白蛋白Sino-American Biotechnology Co产品；金萄菌A蛋白（SPA）中国生物技术集团公司产品[1]。使用实验室培养的牛种布鲁氏菌抗体抗原，采用浙江学院研制的DIGFA诊断试剂以及中国预防医学科学院流行病学微生无研究所研制的SAT诊断试剂[2]。

1.2 血清样本

病牛血清样本、健康牛血清来自于平塘县动物疫病预防控制中心。

1.3 方法

取实验室培养的牛种布鲁氏菌菌体进行实验研究，大致1万亿个牛种布鲁氏菌菌体，融入到生理盐水10ml中，超声粉碎、冰冻和冷藏后，高速离心取上清液，测量蛋白浓度为200μg/mL[3]。采用Frens柠檬酸钠还原法制备胶体金，结合Horisbeger方法，标记胶体金蛋白。在加样孔中融入带检血液，渗入之后，融入生理盐水100μL，3min后观察结果。检测线与质控线如果都出现红色，则表明为阳性，如果检测线没有颜色，质控线变成红色，代表为阴性[4]。分别取布鲁氏菌病病牛和健康牛血清5μL、10μL与20μL进行测试，结合yonden指数明确最佳血清用量[5]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件实施数据的计算与整理，计数资料采用x2进行检验，采用%表示，p＜0.05则代表差异对比具有统计学意义。

2 结果

2.1 胶体金免疫层析法检验不同血清用量牛布鲁氏菌病的敏感性与特异性分析

在不同剂量5μL、10μL与20μL病牛血清与健康牛血清检验中，在检测血清用量为5μL的时候，阳性率为83.33%；在检测血清用量为10μL的时候，阳性率为90%；在检测血清用量为20μL的时候，阳性率为86.67%，胶体金免疫层析法在牛布鲁氏菌病临床检验中应用的最佳血清用量为10μL。详见表1。

2.2 GICA、DIGFA与SAT检测牛布鲁氏菌病敏感性、特异性对比

GICA检测牛布鲁氏菌病的敏感性为90%，特异性为96.67%，DIGFA检测牛布鲁氏菌病的敏感性为86.67%，特异性为93.33%，SAT检测牛布鲁氏菌病的敏感性为90%，特异性为93.33%，三组之间的差异对比不具有统计学意义（p＞0.05）。详见表2。

3 讨论

当前我国常用的牛布鲁氏菌病检测方式为试管凝集试验方式（SAT），实践检验效果比较突出，但是由于这种方式操作行为较为繁杂，故而存在着检验速度较慢的问题[6]。胶体金免疫层析法是近些年来新兴的一种标记方式，逐渐在病毒检验、细菌与寄生虫病免疫检验中得到广泛应用。

表1 胶体金免疫层析法检验不同血清用量牛布鲁氏菌病的敏感性与特异性分析

表2 GICA、DIGFA与SAT检测牛布鲁氏菌病敏感性、特异性对比

在本次实践研究中，GICA检测牛布鲁氏菌病的敏感性为90%，特异性为96.67%，DIGFA检测牛布鲁氏菌病的敏感性为86.67%，特异性为93.33%，SAT检测牛布鲁氏菌病的敏感性为90%，特异性为93.33%，三组之间的差异对比不具有统计学意义（p＞0.05）。结合数据对比结果能够看出，胶体金免疫层析法的实践应用价值比较突出，实践检出率与敏感性较高，可以作为一种有效的牛布鲁氏菌病实践检验方式，及时检验、明确诊断，为牛布鲁氏菌病的有效控制奠定良好的基础。

同时，在本次实践研究中，不同剂量5μL、10μL与20μL病牛血清与健康牛血清检验中，在检测血清用量为5μL的时候，阳性率为83.33%；在检测血清用量为10μL的时候，阳性率为90%；在检测血清用量为20μL的时候，阳性率为86.67%，胶体金免疫层析法在牛布鲁氏菌病临床检验中应用的最佳血清用量为10μl。基于数据对比结果能够看出，在少用量的血清中，胶体金免疫层析法能够实现快速、有效的牛布鲁氏菌病检验，具有较高的试剂敏感性与特异性特点。胶体金免疫层析法相较于DIGFA与SAT检验方式，血清用量较少，操作方式较为便利，在牛布鲁氏菌病实践检验中应用的价值比较突出，能够在牛布鲁氏菌病诊断、流行病学调查或者是现场诊断中应用，是一种有效的牛布鲁氏菌病检验方式，有助于牛布鲁氏菌病的全面防治。

综上所述，胶体金免疫层析法在快速诊断牛布鲁氏菌病中的应用价值较为突出，具有敏感性较高、特异性较强的特点，血清用量较小，实际检验的方式较为便利，建议广泛推广和应用。

[1]董浩，孙雨，王晓英，等.虎红平板凝集试验和胶体金免疫层析法诊断布鲁氏菌病效果的比较[J].畜牧与兽医，2016，03（48）：121～122.

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[4]钱红，石峰，陈创夫，等.伯氏疏螺旋体外膜蛋白OspA胶体金免疫层析法快速检测技术的建立[J].中国病原生物学杂志，2014，12（9）：1075～1078+1083.

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1004-7344（2016）16-0166-02

2016-5-20