中草药制剂对草鱼生长和非特异性免疫效应的研究

姜志勇　王智勇　李志斐

（1.广东省海洋与渔业技术推广总站　　广州　510222）（2.惠州市惠城区水生动物防疫检疫站　　惠州　516001）（3.中国水产科学研究院珠江水产研究所　　广州　510380）

中草药制剂对草鱼生长和非特异性免疫效应的研究

姜志勇1王智勇2李志斐3

（1.广东省海洋与渔业技术推广总站广州510222）
（2.惠州市惠城区水生动物防疫检疫站惠州516001）
（3.中国水产科学研究院珠江水产研究所广州510380）

在基础饲料中分别添加0.5g/kg、1.0g/kg和1.5g/kg的中草药制剂，配制成3种试验饲料，以基础饲料为对照组饲料，每个处理设3个平行组，对体重为16克左右的草鱼进行为期60天的饲养试验，每20天取样一次，以相对增重率、成活率为指标，探讨了中草药对草鱼生长的影响；以血清中的溶菌酶（LZM）、一氧化氮合酶（NOS）、碱性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）活性为指标，探讨了中草药制剂对草鱼非特异性免疫效应的影响。结果表明，饲料中添加“中草药制剂”可以显著提高草鱼的相对增重率，降低饲料系数（P＜0.05）。试验组草鱼血清中的LZM、NOS、AKP和SOD等活性均高于对照组。因此，中草药制剂具有显著促生长、提高机体抗应激以及增强机体免疫能力的作用，建议在实际养殖生产中，添加量为1.0g/kg较为合适。

中草药制剂；草鱼；生长；免疫

草鱼（Ctenopharyngodon idella）作为传统淡水养殖品种，在我国具有悠久的养殖历史，是内陆居民的重要食用鱼类之一，我国年产量在400多万吨。随着草鱼养殖规模的不断扩大，病害频繁发生，其防病抗病的研究也日趋重要。开发新的免疫增强剂成为草鱼研究的重点。

中草药具有药源丰富、成本低廉、作用广泛、低毒、副作用小、不易产生抗药性等特点，且其中某些成分不仅有抗菌作用，而且有免疫作用，能改善机体的免疫状态，提高自身抗菌能力，同时还可明显地提高鱼类的生产性能，从而增加了养鱼的经济效益，充分显示了中草药在防治鱼病上的优势。近几年来，中草药已被广泛用于水生动物养殖中，并且在预防疾病、加速生长、提高生产性能和改善水产品品质等方面取得了明显的效果。蔡中华等研究了黄连、大黄、无花果及花粉对鲤非特异性免疫功能的影响，其结果显示，除无花果外，黄连、大黄及花粉都对鲤鱼的非特异性免疫功能有增强的作用。王景华报道，在鲤的饲养过程中添加茯苓多糖，有助于降低其死亡率。大量的应用结果表明，中草药饲料添加剂作用主要有：增进食欲，促进日增重和提高水产动物的饵料利用率；增强机体免疫功能，提高抗病，抗应激能力；改善水生动物的肉质；增强水生动物的繁殖性能；用于人工配合饲料的防霉防腐，保鲜效果显著。本文研究了一种中草药制剂对草鱼生长和免疫功能的影响，以期通过刺激草鱼自身免疫系统，从而提高机体防御能力而达到防治疾病的目的。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1中草药制剂

中草药添加剂由中国水产科学研究院珠江水产研究所养殖与营养研究室研制。中草药添加剂主要成分是大蒜素30%、板蓝根15%、黄芪15%、甘草10%、金银花10%、杜仲5%、首乌散10%等，辅助添加了维生素C和维生素E。按上述比例混合粉碎，100目过筛后均匀拌饲使用。

1.1.2试验用鱼

试验所需要的草鱼取自佛山市南海区通威水产养殖有限公司，暂养1周后开始试验。挑选体质健壮、外观无明显症状、规格整齐的个体用于试验。

1.1.3试验地点

试验在中国水产科学研究院珠江水产研究所健康养殖基地进行。

1.1.4试验条件

试验是在2.0×2.0×1.0m的水泥池中进行，试验期间水深0.8m。试验用水为经过沙滤的天然池塘水，经过沙滤后直接放入养殖池中。试验期间水温为21.5～28.0℃。绝大多数时间在25℃左右。试验整个过程连续充气，上午溶解氧维持在4.0mg/L，下午维持在6.0mg/L左右。

1.2试验方法

试验以中草药制剂添加水平为试验因子，采用单因素梯度法。添加量设3个水平，分别为0组（对照）、A组（0.5kg/T）、B组（1.0kg/T）和C组（1.5kg/T）。每组设3个平行。每个重复25尾鱼。每种饲料随机投喂3个水泥池。生长试验和免疫试验各自单独进行。基础饲料配方见表1。

表1试验基础料配比

1.3日常管理

试验期间日投饲率为3%～5%，具体根据鱼的摄食情况，每天进行调整。每天分2次投喂，分别在上午8：00-9：00和下午16：00-15：00。每天收集残饵和污物一次，每周换水一次，换水量为30% ～50%。

1.4生长指标

试验共60天。试验结束时每个平行逐尾记数鱼的尾数计算成活率，并称量全部体重。

相对增重率=（末重-初重）/初重×100%；

饵料系数=摄食饲料的重量/鱼体重增加量；

成活率=收获尾数/放养尾数×100%。

1.5非特异性免疫指标的测定

分别在试验开始后的第20天、40天和60天，每个水泥池取3尾鱼尾部静脉取血。室温静止1小时后，于4℃冰箱过夜，4000r/min离心5分钟，取上清液标记后放在-20℃冰箱待测。

选用超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合酶（NOS）和溶菌酶（LZM）作为非特异性免疫指标。SOD、AKP、LZM和NOS活性采用试剂盒测定，试剂盒购自南京建成生物研究所。具体测定步骤按说明书进行。

1.6数据处理

所有数据均采用SPSS统计软件进行分析处理，利用方差分析（ANOVA）来检验各组之间的显著性。

2　结果与讨论

2.1添加“中草药制剂”对草鱼生长情况的影响

在饲料中添加“中草药制剂”饲喂草鱼对其生长情况的影响结果列于表2。由表2可见，饲料中添加“中草药制剂”投喂60d，均能显著提高相对增重倍数（P＜0.05），对成活率的影响以及饲料系数有一定的影响，表现各个试验组与对照组存在显著差异（P＜0.05），但是各个试验组之间没有显著差异。综合相对增重率、成活率以及饲料系数来看，B组效果最好。

表2试验结果

2.2添加中草药制剂对草鱼非特异性免疫情况的影响

表3　中草药制剂对草鱼几种酶活力的影响

超氧化物歧化酶是重要的抗氧化酶之一，具有催化超氧化物阴离子自由基O2-的歧化反应，清除自由基，阻止自由基引起连锁反应，对机体起保护作用。从表3可看出，饲料中分别添加不同浓度的“中草药制剂”，投喂草鱼20d后，各试验组组织液中超氧化物歧化酶活性与对照组相比有明显差异，且B组与其他两试验组也存在差异；投喂40d后，超氧化物歧化酶活性著高于基础料组，与20d时的情况基本一致；至60d时，虽然各试验组和对照组之间还存在差异，但相互之间的差异不再显著。

NOS可以催化L-精氨酸产生NO，NO能作用于微生物的关键代谢酶，从而抑制代谢酶的活性或使其失活而发挥抗微生物的作用，还可以和氧自由基作用生成强氧化剂达到杀灭微生物的作用。从表3可看出，饲料中分别添加不同浓度的“中草药制剂”，投喂草鱼20d后，各试验组组织液中NOS活性与对照组相比有明显差异；投喂40d后，NOS活性著高于基础料组，且C组与其他两组之间存在显著差异；至60d时，各试验组和对照组之间还存在差异，C组与其他两组之间同样存在显著差异。

AKP是巨噬细胞内溶酶体的标志酶，是溶酶体的重要组成部分，已经有研究结果证明，在甲壳动物血细胞进行吞噬和包围化的免疫反应中，会伴随有AKP的释放。从表3可看出，饲料中分别添加不同浓度的“中草药制剂”，投喂草鱼20d后，B、C组组织液中AKP活性与对照组相比有明显差异，并且两者之间也存在显著差异，但A组和对照组之间差异不显著；投喂40d后，AKP活性与20d时情况相似；至60d时，A、B组和对照组之间还存在差异，但C组与对照组相比差异不显著。

LZM在引发和维持机体防御免疫的过程中起着重要的作用。它在机体免疫过程中除了溶解细菌细胞壁外，还可诱导和调节其他免疫因子的合成与分泌。从表3可看出，饲料中分别添加不同浓度的“中草药制剂”，投喂草鱼20d后，各试验组组织液中LZM活性与对照组相比有明显差异；投喂40d后，LZM活性著高于基础料组，且A组与其他两组之间存在显著差异；至60d时，各试验组和对照组之间还存在差异，但两两之间不存在显著差异。

3　讨论

3.1中草药添加剂对草鱼生长性能的影响

在草鱼基础饲料中添加一定量的中草药添加剂能显著提高草鱼的相对增重率、提高成活率、降低饲料系数。研究表明，中草药含有多种营养成分和生物活性物质，通常有多糖、氨基酸、蛋白质、油脂、酶、色素、维生素、有机酸、鞣质、生物碱、黄酮、甙类、无机盐等，以及一些未知的促生长活性物质，作为饵料添加剂，有补充营养、促进生长的作用。段贤彩用辣蓼草、松针等组方，在饲料中添加l%饲喂草鱼、鲤鱼，成活率从30%～50%提高到70%～80%，亩产量增加了200%；韩如政在l龄和2龄鲤饵料中分别添加0.4%的复方中草药，可提高18%的生长速度，饵料系数降低18.2%～24%。与本次试验结果相一致。

3.2复方中草药对草鱼肝脏六种酶活力的影响

抗生素虽然在抵抗疾病能力等方面具有一定的效果，但也存在很大的副作用，它不仅破坏免疫力，而且会造成一定的环境负效应，中草药等无残留、无污染且又能增强免疫力的“绿色”药物逐渐被广泛开发和应用。它主要是通过促进机体免疫器官发育、增加非特异性免疫和特异性免疫等途径来增强机体的免疫力。机体非特异性免疫功能状态直接反映出机体的抗逆能力强弱。超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合酶（NOS）和溶菌酶（LZM）可作为非特异性免疫功能强弱的评价指标。梁拥军等在基础饲料中添加0.5%、1.0%、2.0%复方中草药饲养宝石鲈，结果表明，添加1.0%复方中草药可显著提高宝石鲈肝脏中SOD、溶菌酶和过氧化氢酶活性。刘红柏等研究认为，1.0%与2.0%黄芪水煎剂可显著提高史氏鲟肝脏中的NO含量。刘红柏等研究了6个复方和5个单方中草药对施氏鲟血浆和肝脏中酶指标的影响，认为三黄粉、甘草复方方剂能显著性增加施氏鲟血浆和组织样中NOS的含量。本试验用添加了一定量复方中草药的饲料饲喂草鱼，测定其血清中超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合酶（NOS）和溶菌酶（LZM）四种酶活性的影响，结果显示，复方中草药可以不同程度提高草鱼血清中相关酶的活力。试验结果表明，在基础饲料中添加一定量的复方中草药制剂，可以提高草鱼的非特异性免疫功能。

4　结语

4.1饲料中添加中草药制剂能显著提高草鱼溶菌、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶和一氧化氮合酶的活性，提高机体抗病能力。

4.2饲料中添加中草药制剂，可以提高草鱼的生长速度。

4.3从本次试验来看，饲料中中草药制剂的适宜添加量为1.0g/kg。

（略）

资金项目：广东省海洋渔业科技推广专项（项目编号：B20140C01）资助。