宫颈细胞DNA 定量分析在宫颈癌筛查中的应用价值

闻　明，田德明，杨小苗，怀建国

(芜湖市第一人民医院　1.妇产科；2.病理科，安徽　芜湖　241001)



·临床医学·

宫颈细胞DNA 定量分析在宫颈癌筛查中的应用价值

闻明1，田德明1，杨小苗2，怀建国2

(芜湖市第一人民医院1.妇产科；2.病理科，安徽芜湖241001)

【摘要】目的：探讨宫颈细胞DNA定量分析在已婚妇女宫颈癌早期筛查中的作用和意义。方法：同时运用细胞DNA定量分析技术与液基薄层细胞学检测(TCT)技术对已婚妇女进行宫颈癌筛查，检查结果阳性的患者给予阴道镜下宫颈活检进行病理确诊。结果：1000例妇女行宫颈细胞DNA定量分析共查出DNA倍体异常者188例(18.8%)，其中DNA异倍体1～2个101例，DNA异倍体≥3个87例，经宫颈活检病理诊断，DNA异倍体者确诊宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ～Ⅲ级共121例，宫颈癌12例，细胞DNA定量分析检测宫颈病变(CIN-Ⅲ及以上)的灵敏度为89.3%，特异度为18.5%，阳性预测值为13.3%，阴性预测值为92.5%；1000例妇女同时行液基薄层细胞学检测，查出异常者共65例(6.5%)，经活检病理诊断，液基薄层细胞学检查异常者确诊宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ～Ⅲ级27例，宫颈癌4例，液基薄层细胞学检测宫颈病变(CIN-Ⅲ及以上)的灵敏度为32.1%，特异度为72%，阳性预测值为13.8%，阴性预测值为88.3%。结论：宫颈细胞DNA定量分析灵敏度高于TCT，有助于宫颈癌及癌前病变的早期发现。

【关键词】子宫颈癌；细胞DNA定量；液基薄层细胞学检测；组织学活检

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2016.04.020

子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，全世界每年约有新发病例50万，我国约14万，占总数的1/3，且年轻化倾向十分明显[1]。由于宫颈癌有一个可逆的、较长的癌前病变期，故而是目前唯一可以早期发现并可能治愈的妇科恶性肿瘤[2]。因此，宫颈癌的防治关键在于及时筛查尽早发现癌前病变。我院2014年开展宫颈细胞DNA定量分析联合液基薄层细胞学检测进行宫颈癌筛查共1000例，研究发现细胞DNA定量分析灵敏度高于TCT，有一定临床应用价值，现总结如下。

1资料与方法

1.1研究对象选取2014年1～12月在我院就诊妇女1000名，年龄20～79岁，受检者均无宫颈疾病史，检查前3 d否认性生活、用药及阴道冲洗史，均自愿进行检查[宫颈细胞DNA定量分析及液基薄层细胞学检测(thinprep cytology test，TCT)]。

1.2研究方法

1.2.1标本采集与制备由经治医师使用宫颈刷在受检者宫颈鳞柱状上皮交界处行单向旋转3圈以上收集脱落细胞，将收集细胞连同采样刷头置入盛有保存液的标本瓶中，由病理科技术人员使用液基薄层细胞制片仪将标本制备成直径2 cm的薄层细胞涂片2张，经95%乙醇固定约15～30 min，1张予以巴氏染色，TCT检测；1张予以Feulgen染色，经细胞DNA定量分析，常规保存标本瓶1年。TCT的细胞保存液为泰普医药有限公司产品，巴氏染色需3 d完成；细胞DNA定量分析细胞保存液为麦克奥迪(厦门)医疗诊断系统有限公司产品，全自动细胞定量分析仪为同一公司产品，做Feulgen染色，需5 d完成。

1.2.2病理检查凡宫颈TCT检测在无明显诊断意义的不典型鳞状细胞(atypical squamous cell of undetermined significance,ASCUS)及以上级别者或DNA定量分析结果提示倍体异常的妇女，均予阴道镜检查，同时于宫颈可疑部位进行4点以上的组织活检，活检病例共228例。病理诊断顺次为正常、炎症、CIN-Ⅰ、CIN-Ⅱ、CIN-Ⅲ(原位癌)及浸润癌，以病理结果为金标准。

1.3统计学方法统计学分析运用SPSS 18.0软件，进行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1细胞DNA定量分析受检细胞与正常细胞的DNA含量进行比较的值为细胞DNA指数(DI)，宫颈正常细胞的DNA指数大多为1，增殖周期为DNA整倍体，没有异倍体峰出现，而肿瘤细胞的DI常≥2.5，增殖周期为非整倍体，如果宫颈有少数DNA异倍体时，DI仍可为1，即形成异倍体单峰，但有大量异倍体出现时，则DI≥2.5，即形成异倍体双峰。因此，进行细胞核DNA含量测定，可用于判断宫颈癌前病变及宫颈癌的客观指标。

本研究中1000例患者共查出DNA倍体异常者188例(18.8%)，DNA 1～2个异倍体101例，DNA≥3个异倍体87例，见图1。

A：正常DNA；b：1个异倍体；c：2个异倍体；d：3个异倍体；e：4个异倍体。

图1宫颈细胞核图像及DI值

2.2TCT使用TBS分类法，1000例患者行TCT，异常者共65例(6.5%)，其中ASCUS 44例，高度鳞状上皮内病变(high squamous intraepithelial lesion,HSIL)11例，低度鳞状上皮内病变(low squamous intraepithelial lesion,LSIL)10例。

2.3病理诊断DNA倍体异常者或TCT异常者均予阴道镜检查及宫颈活检，结果见表1、2。将CIN-Ⅰ级及以上病变均列为阳性，比较DNA异倍体1～2个及≥3个患者活检病理结果，发现前者101位病例中活检病理阳性55例，而后者87位病例中阳性78例，见表3。

表1DNA倍体异常者宫颈活检病理结果

项目正常或炎症CIN-ⅠCIN-ⅡCIN-Ⅲ浸润癌合计例数5573351312188比率/%29.2638.8318.626.916.38100

表2TCT异常者宫颈活检病理检测结果

项目正常或炎症CIN-ⅠCIN-ⅡCIN-Ⅲ浸润癌合计例数341665465比率/%52.3124.629.237.696.15100

表3DNA异倍体1～2个与≥3个患者宫颈活检病理检测结果比较

项目正常或炎症CIN-ICIN-ⅡCIN-Ⅲ浸润癌合计异倍体1～2个46371152101比率/%45.5436.6310.894.951.98100异倍体≥3个9421881087比率/%10.3448.2820.699.2011.49100

2.4TCT将ASCUS以上病变均列为阳性，DNA倍体定量分析将1个异倍体以上列为阳性,两种方法结果比较，后者检出率高于前者，有统计学差异(P<0.05)，见表4。以宫颈活检病理结果为标准，228例活检病例中，发现28例CIN-Ⅲ及以上级别的宫颈疾病，16例为CIN-Ⅲ，12例为浸润性宫颈癌。若将ASCUS定为筛查后需活检的标准，TCT检测宫颈病变(CIN-Ⅲ及以上)的灵敏度为32.1%，特异度为72%，阳性预测值为13.8%，阴性预测值为88.3%。若将DNA异倍体≥1个以上定为筛查后需活检的标准，细胞DNA定量分析检测宫颈病变(CIN-Ⅲ及以上)的灵敏度为89.3%，特异度为18.5%，阳性预测值为13.3%，阴性预测值为92.5%。若将DNA异倍体≥3个定为筛查后需活检的标准，检测宫颈病变(CIN-Ⅲ及以上)的灵敏度为64.3%，特异度为65.5%，阳性预测值为20.7%，阴性预测值为92.9%，比较结果分析见表5、6。

表4TCT与细胞DNA定量分析比较

项目阳性阴性阳性率/%χ2PTCT659356.568.460.00DNA定量细胞学检测18881218.8

表5TCT与DNA异倍体≥1个以上检测宫颈病变(CIN-Ⅲ及以上)的统计学数据分析

%

表6TCT与DNA异倍体≥3个检测宫颈病变(CIN-Ⅲ及以上)的统计学数据分析

%

比较数据可得出，细胞DNA定量分析灵敏度明显高于TCT，有统计学差异(P<0.05)，若将异倍体≥1个以上定为筛查后需做活检的标准时，特异度低于TCT(P<0.05)，而将异倍体≥3个定为筛查后需做活检的标准则特异度升高，与TCT相比无统计学意义。阳性预测值、阴性预测值均无统计学意义。由此，更多宫颈癌早期患者可被发现，得到确诊和治疗，同时因筛查阳性而需做活检的病例数也会有所上升。我们会继续扩大样本采集并进行数据分析。

3讨论

宫颈癌是严重影响妇女生活质量的常见妇科癌症[3-4]，宫颈细胞从感染到病变直至发展为宫颈癌需3至15年[5-6]，因此早期筛查、诊断及治疗，将其阻断在癌前病变阶段，在防治宫颈癌工作中起着极其重要的作用[7]。宫颈细胞DNA定量分析即通过液基制片、Feulgen染色，最后经扫描系统进行细胞DNA定量分析。正常细胞DNA指数大多为1，肿瘤细胞常≥2.5，通过对细胞核内DNA含量或倍体的测定即可判断细胞的生理状态或病理改变，因此，测定细胞核DNA含量，可作为判断宫颈癌前病变及宫颈癌的客观依据。宫颈癌早期筛查使用DNA定量分析技术，国外早已有大量报道[8]，在北美及欧洲已作为常规检查之一[9]。

我们通过TCT、宫颈细胞DNA定量分析两种方法在宫颈癌筛查中的应用价值比较，结果显示：细胞DNA定量分析灵敏度高于TCT，而将细胞DNA异倍体≥3个定为活检标准则特异度也会明显升高，由此筛查出宫颈癌高危人群做进一步确诊，并提示该群体是重点随访对象，我们应该继续进行跟踪与诊治，预防宫颈癌的发生、发展。

综上所述，在宫颈细胞恶变过程中，DNA含量的改变较形态学变化要早，故此，DNA定量分析是早期筛查宫颈癌前病变及宫颈癌的有力手段，相对宫颈活检而言，具有取样简单、无损伤、操作简便[10]等优点，同时采用该项技术进行宫颈癌筛查也有效解决了在基层开展大规模普查往往缺乏应有的技术和有经验的细胞学医生的问题，成本效益合理，可考虑作为适合基层大规模妇女普查宫颈癌一种筛查方法予以推广。

【参考文献】

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文章编号：1002-0217(2016)04-0371-04

基金项目：卫生部医药卫生科技发展研究中心基金项目(W2013GJ44)

收稿日期：2015-09-24

作者简介：闻明(1975-)，女，副主任医师，(电话)15357882072，(电子信箱)1948497833@qq.com；

【文献标识码】【中图号】R 737.33A

Application value of cell DNA quantitative analysis to cervical cancer screening

WEN Ming，TIAN Deming，YANG Xiaomiao，HUAI Jianguo

Department of Obstetrics & Gynecology,Wuhu No.1 People′s Hospital,Wuhu 241001,China

【Abstract】Objective：To investigate the clinical significance of applying cell DNA quantitative analysis to early screening of cervical cancer in married women.Methods:Both automated quantitative image cytometry and thinprep cytology test (TCT) were randomLy performed to screen for early cervical cancer in the married women.Patients with positive findings were undergone cervical biopsy under the colposcope for following pathological verification.Results:In 1000 women received cervical cell DNA quantitative measurements,abnormal DNA ploid was detected in 188(18.8%),in whom the heteroploid occurred between one and two in 101,and equal to or greater than three in 87.Pathological examination of the cervical biopsies in cases with heteroploidy cells indicated that 121 were cervical intraepithelial neoplasia (CIN) Ⅰ-Ⅲ,and 12 were cervical cancer.Cervical cell DNA quantitative analysis screening cervical lesion(CIN III and above) indicated that the sensitivity,specificity,positive predictive value(PPV) and negative predictive value (NPV) was 89.3%,18.5%,13.3% and 92.5%,respectively.TCT was also applied to 1000 women and revealed abnormal cell in 65 cases(6.5%).Following pathology verified that 27 cases were CIN Ⅰ-Ⅲ and 4 cervical cancer.The sensitivity,specificity,PPV and NPV in screening cervical lesion(CIN III and above)by TCT 32.1%,72%,13.8% and 88.3%,respectively.Conclusion:Cervical cell DNA quantitative analysis may reveal higher sensitivity than TCT.The findings suggest that this technique can be more competent in early detection of cervical cancer and precancerous lesions in married women.

【Key words】cervical cancer；cell DNA quantitative analysis;Thinprep cytology test；biopsy

怀建国，男，副主任医师，(电子信箱)478205286@qq.com，通信作者.