卵巢癌组织中肺癌抑癌基因1基因启动子甲基化状态及其临床意义

游颜杰　刘佳佳　苑　艺　高凤兰

(漯河医学高等专科学校药学系，河南　漯河　462000)



卵巢癌组织中肺癌抑癌基因1基因启动子甲基化状态及其临床意义

游颜杰刘佳佳苑艺高凤兰

(漯河医学高等专科学校药学系，河南漯河462000)

〔摘要〕目的探讨肺癌抑癌基因1(TSLC1)在卵巢癌中基因启动子甲基化状态及临床意义。方法应用甲基化特异性PCR检测TSLC1基因启动子在50例卵巢癌组织和10例正常卵巢组织中的甲基化状态并结合临床病理资料进行分析。 结果在卵巢癌组织中TSLC1甲基化阳性率(36%，18/50)，正常卵巢组织未出现TSLC1甲基化。TSLC1甲基化与肿瘤淋巴结转移与Silverberg分期密切相关(P<0.05)。结论TSLC1甲基化可能是参与卵巢癌发展的重要分子事件。

〔关键词〕肺癌抑癌基因1；卵巢癌；DNA甲基化

肺癌抑癌基因1(TSLC1)介导细胞间相互黏附、胞内信号传导及膜蛋白与细胞骨架之间的交联，其表达下调是恶性肿瘤发生侵袭和转移的重要因素之一〔1〕。已有研究证实，基因启动子区域异常甲基化是导致其TSLC1基因表达降低或沉默的重要机制〔2～4〕。本实验旨在深入探讨TSLC1基因在卵巢癌组织中甲基化状态及其临床意义。

1材料与方法

1.1一般资料收集汕头大学医学院附属肿瘤医院在2004～2010年间手术切除50例原发卵巢癌组织标本。患者年龄22～71岁，中位年龄50.2岁，患者均在入院后经病理确诊，术前未接受放化疗。依据国际妇产科联盟(FIGO，2000)分期。收集正常卵巢组织27例为实验对照。

1.2主要试剂GTpureTM石蜡组织DNA提取试剂盒购自基因科技公司，EpiTect Kit与HotStar Taq热启动酶购自Qiagen公司；dNTP与合成引物购自大连Takara公司，其他常规化学试剂均为进口或国产分析纯。

1.3基因组DNA提取与亚硫氢酸盐修饰石蜡组织标本基因组DNA提取使用GTpureTM组织DNA提取试剂盒，以EpiTect Kit进行上述样本亚硫酸氢盐修饰与纯化，各项操作按说明书进行。

1.4甲基化特异性PCR(MSP)检测TSLC1基因启动子甲基化状态反应条件：95℃预变性5 min；94℃变性60 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s，35个循环。引物序列见表1。甲基化状态判定标准如下，仅非甲基化引物扩增出相应片段为甲基化阴性；仅有甲基化引物扩增出相应片段即为完全甲基化，甲基化引物与非甲基化引物均扩增出相应片段为不完全甲基化，完全甲基化和不完全甲基化均计为甲基化检测阳性。

表1　MSP引物序列

1.4统计学分析采用SPSS11.0统计软件行t及χ2检验。

2结果

2.1卵巢癌中TSLC1基因启动子甲基化状态MSP分析显示，50例食管癌组织中18例检测TSLC1甲基化阳性(18/50，36%)，而在27例正常对照卵巢组织中未出现TSLC1甲基化(图1)。

图1　MSP检测TSLC1基因在卵巢癌组织与正常卵巢中的甲基化状态

2.2TSLC1甲基化与临床病理参数的关系表2可见，结合临床病例资料统计分析，TSLC1甲基化阳性在淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P=0.002)，在Silverberg分期G3期高于G1+G2期(P<0.001)，而与患者年龄、绝经情况、FIGO分期、病理分型、雌激素受体(ER)表达、孕激素受体(PR)表达及Ki-67表达等因素无关。

3讨论

TSLC1属于免疫球蛋白超家族成员，其基因定位于人染色体11q23.2，全长约300 kb，编码由442个氨基酸残基组成的跨膜糖蛋白，通过介导细胞间相互黏附、胞内信号传导及膜蛋白与细胞骨架之间的交联〔5〕。TSLC1的亚细胞定位结构特征与上皮细胞钙黏蛋白、连接素等经典的黏附分子相似，此外TSLC1还是诱导细胞周期的停滞及细胞凋亡过程中的关键分子〔6〕。启动子甲基化引起的TSLC1表达下调或缺失与食管癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤侵袭和转移发生发展的密切相关〔2～4,7,8〕。然而，对于TSLC1基因甲基化在卵巢肿瘤中的研究目尚未有相关报道。本研究结果表明TSLC1甲基化可能在卵巢癌发展过程中的特异发生的重要分子事件之一，是潜在的卵巢癌诊治的分子标志物。明确TSLC1甲基化与卵巢癌临床病理的关系可以指导临床医生对患者制定更加完善的个体化治疗方案，从而提高卵巢癌的整体治疗水平。

4参考文献

1Murakami Y.Involvement of a cell adhesion molecule,TSLC1/IGSF4,in human oncogenesis〔J〕.Cancer Sci,2005;96(9):543-52.

2Ito T,Shimada Y,Hashimoto Y,etal.Involvement of TSLC1 in progression of esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Cancer Res,2003;63(19):6320-6.

3Xu PW,Xu HY,Liu XN,etal.Aberrant promoter methylation of cell adhesion-related genes associated with clinicopathologic features in non-small cell lung cancer in China〔J〕.Cancer Biomark,2013;13(2):115-22.

4Liang QL,Chen GQ,Li ZY,etal.Function and histopathology of a cell adhesion molecule TSLC1 in cancer〔J〕.Cancer Invest,2011;29(2):107-12.

5Wakayama T,Iseki S.Role of the spermatogenic-Sertoli cell interaction through cell adhesion molecule-1 (CADM1) in spermatogenesis〔J〕.Anat Sci Int,2009;84(3):112-21.

6Ito A,Hagiyama M,Oonuma J.Nerve-mast cell and smooth muscle-mast cell interaction mediated by cell adhesion molecule-1,CADM1〔J〕.J Smooth Muscle Res,2008;44(2):83-93.

7Heller G,Geradts J,Ziegler B,etal.Downregulation of TSLC1 and DAL-1 expression occurs frequently in breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res Treat,2007;103(3):283-91.

8Chen K,Wang G,Peng L,etal.CADM1/TSLC1 inactivation by promoter hypermethylation is a frequent event in colorectal carcinogenesis and correlates with late stages of the disease〔J〕.Int J Cancer,2011;128(2):266-73.

〔2015-02-18修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)

基金项目：河南省科技攻关计划项目(142102310464)；漯河医学高等专科学校自然科学项目(2013，Y-J You)

通讯作者：高凤兰(1966-)，女，教授，硕士，主要从事肿瘤病理学研究。

〔中图分类号〕R73

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)13-3200-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.13.051

第一作者：游颜杰(1977-)，男，博士后，讲师，主要从事肿瘤分子病理与转化医学研究。