6种中药对60株泛耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用

吴贤丽　　庞载元　　敖茂程　　苏德永　　李靖　　华毅（攀枝花市中心医院，四川 攀枝花 617067）

6种中药对60株泛耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用

吴贤丽庞载元敖茂程苏德永李靖华毅
（攀枝花市中心医院，四川 攀枝花 617067）

目的：通过研究黄芩等6种中药对泛耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用，为临床治疗泛耐药菌感染寻找新的出路。方法：采用中药抗菌试验试管倍比稀释法测定药物的最低抑菌浓度（MIC）。结果：黄芩、连翘、黄连、金银花、五味子、乌梅对60株泛耐药鲍曼不动杆菌有不同程度的体外抑菌作用，MIC均值分别为46.22，234.37，56.01，103.13，63.54，58.85 mg/mL。本地与外地收集的菌株，抑菌作用无显著性差异（P＞0.05）。结论：6种中药对60株泛耐药鲍曼不动杆菌均有不同程度的体外抑菌作用。

黄芩；连翘；黄连；金银花；五味子；乌梅；泛耐药鲍曼不动杆菌；体外抑菌试验

鲍曼不动杆菌是目前医院感染的主要病原菌之一，广泛存在于自然界、医院环境及人体皮肤等部位。近年来，随着抗菌药物的广泛使用，鲍曼不动杆菌耐药率及泛耐药菌株均呈上升趋势［1]。泛耐药鲍曼不动杆菌是指对临床常用的五类抗菌药耐药，仅对1～ 2种潜在有抗不动杆菌活性的药物（主要指替加环素或多黏菌素）敏感的菌株［2]。多黏菌素E由于静脉使用时有严重的肾脏毒性和神经毒性，基本上未在临床使用［3]；替加环素虽然对泛耐药鲍曼不动杆菌有较好的抗菌活性，但血药浓度、脑脊液浓度低且价格过于昂贵，常需与其他抗菌药物联合应用［4]。开发新的抗菌药物是克服该菌耐药性的有效途径，但新药开发周期长、投资大，医药经费负担重。

中药治疗感染性疾病有悠久的历史，常用的抗菌中草药有近百种［5]，经文献检索，有关中药抑菌的研究较多，但未见中药对泛耐药鲍曼不动杆菌抑菌、杀菌的研究报道，因此，研究中药对泛耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性具有重大的现实意义。

本实验采用中药抗菌试验试管倍比稀释法，参考了有关文献［6]，并做了相应的改进。现报告如下。

1材料与方法

1.1材料

孵箱，1 000 μL无菌吸头，1 000 μL加样枪，带帽无菌试管若干，比浊仪，API 0.85%3 mL无菌盐水管，梅里埃的非苛养革兰阴性杆菌药敏试验专用肉汤，试管架若干。

1.2菌株的选择

收集近期（2010年4月 -2014年3月）来自本院和外地（浙江大学医学院附属第一医院）的泛耐药鲍曼不动杆菌60株，选择标准菌株ATCC27853、ATCC25922、ATCC25923作对比分析。

1.3中药的选择

通过查阅文献，选择有抗菌活性的6种中药配方颗粒：黄芩、连翘、黄连、金银花、五味子、乌梅（由四川新绿色药业科技发展股份有限公司生产，产品批号分别为：1502063，1502004，1410073，1306071，1410063，1401008）。

1.4中药药液的制备

取50 mL的无菌烧杯，用无菌蒸馏水溶解中药配方颗粒，使其药液相当于生药的质量浓度为1 000 mg/mL。

1.5细菌的培养与稀释

将选定的实验菌株，接种血平板培养基37℃孵育 24 h。取API 0.85%3 mL无菌盐水管，挑取菌落配制成0.5麦氏比浊单位，使其含菌量为1.5×108cfu/L。

1.6最小抑菌浓度（MIC）的测定

按临床标准化协会（CLSI）推荐的液体稀释法测定实验菌株的MIC。应用倍比稀释法对药物进行稀释，稀释液为梅里埃的非苛养革兰阴性杆菌药敏专用肉汤。

1.7操作步骤

在10支无菌试管中各加入1 mL肉汤，于第1管加 1 mL中药（1 000 mg/mL），充分混匀后取出1 mL加入第2管，混匀后取出1 mL加入第3管，反复操作至第9管，混匀后第9管取出1 mL液体丢弃，第10管不加药液做阳性对照，在每个试管中加入0.5麦氏单位的菌液20 μL，第9管不加菌液做阴性对照，充分混匀后放置37℃孵箱中培养，24 h后观察细菌生长情况。在阳性对照管细菌生长正常，阴性对照管无菌生长的条件下，判断无浑浊的试管的最小浓度即为MIC。以上所有无菌操作均需在生物安全柜中进行。

2结果

见表1。黄芩、连翘、黄连、金银花、五味子、乌梅对60株泛耐药鲍曼不动杆菌有不同程度的体外抑菌作用，MIC均值分别为46.22，234.37，56.01，103.13，63.54，58.85 mg/mL。

3讨论

近年来在临床分离的致病菌中鲍曼不动杆菌逐年增多，多重耐药鲍曼不动杆菌已经在全球各地广泛流行，甚至造成医院感染的爆发流行［7-9]，有关世界各地泛耐药菌株感染的报道也频频出现［10]。由于耐药性增强，患者感染鲍曼不动杆菌后死亡率逐年增高，在ICU患者中的死亡率达10% ～43%［11]。由于可供选择的抗菌药药物少、疗效差、不良反应严重、价格昂贵，临床治疗面临极大考验。

由表1可见，黄芩、连翘、黄连、金银花、五味子、乌梅对60株泛耐药鲍曼不动杆菌有不同程度的体外抑菌作用。五味子抑菌浓度比冷会勇等［12]报道的多重耐药鲍曼不动杆菌的抑菌浓度高，黄芩、连翘、黄连、金银花的抑菌浓度比庞载元等［13]报道的泛耐药铜绿假单胞菌抑菌浓度低，6种中药对本地与外地收集的菌株，抑菌作用无显著性差异（P＞0.05）。

表1　6种中药对60株泛耐药鲍曼不动杆菌的抑菌作用　（mg/mL）

临床常用的抗菌中药有近百种，其抑菌浓度远远高于抗菌药［14]，按常规剂量口服，血药浓度远远达不到抑菌浓度。以本实验为例：黄芩MIC均值为46.22 mg/mL，按成人4 000 mL体液算，需要一次口服185 g生药才可能在体内达到抑菌浓度，而黄芩的常规剂量为5～ 15 g［15]，远远达不到治疗的血药浓度；黄连MIC均值为56.01 mg/mL，按成人4 000 mL体液算，需要一次口服224 g生药才可能在体内达到抑菌浓度，而黄连的常规剂量为2～ 10 g［15]，也远远达不到治疗的血药浓度；彭乙华等［16]研究报道中药单体注射制剂棓丙酯对多重耐药鲍曼不动杆菌有较高的抑菌活性，体外最低抑菌浓度范围64～128 μg/mL，按成人4 000 mL体液算，需要药物256～ 512 mg，而棓丙酯静脉滴注 1次的允许用量，不超过180 mg，在人体内也很难达到有效抑菌浓度。

中药治疗呼吸道感染，吸入给药是不错的选择。由于呼吸道面积大，毛细血管丰富、致密，药物吸收快，吸收速率仅次于静脉给药［17]，药物用量少，可以克服口服血药浓度过低的瓶颈，通过雾化吸入，药物可直达病所。中药雾化吸入治疗肺炎［18-20]和上呼吸道感染［21-23]的报道较多，疗效肯定。

除了吸入治疗外还可以选择中药贴敷治疗。贴敷疗法是一种中药外治法，药物贴敷于体表穴，可由局部的皮肤直接吸收，中药贴敷治疗可减少药物代谢过程，用药安全有效［17]，有关治疗肺炎的文献报道也较多［24-26]，疗效肯定。

本研究资料显示6种中药对泛耐药鲍曼不动杆菌有不同的体外抗菌活性，按传统口服给药模式难以发挥中药的抗菌作用。中药雾化吸入或中药贴敷治疗泛耐药鲍曼不动杆菌引起的肺炎是值得一试的方法。

在中药抗菌研究的过程中，前人的研究结果提示中药在抗菌作用方面蕴藏着巨大潜力。中药的给药途径较多，在应用研究上需要打破常规，不断创新与开拓，才能使中药更好地造福于人类。

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Bacteriostatic Effects of Six Kinds of Traditional Chinese Herbal Medicines on Sixty Strains of Pan-resistant Acinetobacter baumannii

Wu Xianli，Pang Zaiyuan，Ao Maocheng，Su Deyong，Li Jing，Hua Yi（Center Hospital of Panzhihua City，Sichuan Panzhihua 617067，China）

Objective：To investigate the bacteriostatic effects of six kinds of traditional Chinese herbal medicine on pan-resistant Acinetobacter baumannii and provide a novel route to the clinical treatment of infection. Methods：The minimum inhibiting concentrations（MICs）of drugs were determined by antibacterial test with doubling dilution in tube.Results：Scutellaria，Forsythia，Coptis，Honeysuckle，Schisandra and Jaume showed bacteriostatic effect in vitro at different degrees on 60 strains of pan-resistant Acinetobacter baumannii，of which the mean MICs were 46.22，234.37，56.01，103.13，63.54 and 58.85 mg/mL respectively，which showed no difference in local and foreign isolates（P＞0.05）.Conclusion：Each of the six kinds of Chinese herbal medicines showed a certain inhibitory effect in vitro on 60 strains of pan-resistant Acinetobacter baumannii.

Scutellaria；Forsythia；Coptis；Honeysuckle；Scutellaria；Jaume；Pan-resistant Acinetobacter baumannii；In Vitro Antibacterial Test

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.05.004

攀枝花市2015年度市级财政科技专项资金项目（2015cy-s-25）

吴贤丽，女，检验技师。研究方向：临床微生物检验。E-mail：12252935@qq.com庞载元，男，副主任技师。研究方向：临床微生物检验。通讯作者E-mail：yangfan621225@qq.com

2016-02-01）