HPLC法同时测定补正片中虎杖苷、补骨脂素及异补骨脂素的含量

谢健鸣　隆颖

[摘要] 目的 建立补正片中虎杖苷、补骨脂素及异补骨脂素的液相色谱测定方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱为Venusil XBP C18（250mm×4.6mm，5μm），采用甲醇-水作为流动相进行梯度洗脱；流速为0.8mL/min，检测波长为240nm。结果 虎杖苷、补骨脂素、异补骨脂素在0.0627～1.881μg、0.01904～0.5712μg、0.0312～0.936μg范围内分别呈良好的线性关系（r=1），平均回收率（n=6）分别为102.3%、99.6%和103.6%，RSD分别为0.7%、1.5%和0.7%。 结论 本方法分析操作易行、结果可靠、重复性好，可用于补正片的质量控制。

[关键词] 补正片；HPLC；虎杖苷；补骨脂素；异补骨脂素

[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2016）09-32-04

[Abstract] Objective To establish a HPLC method for the simultaneous determination of polydatin， psoralen and isopsoralen in Buzheng tablets by HPLC. Methods HPLC was performed on a Venusil XBP C18 column（250mm×4.6mm， 5m）.The mobile phase was Methanol-water at the flow rate of 0.8mL/min，The detection wave length was 240nm. Results There was a good linearity at the range of 0.0627～1.881μg for polydatin， 0.01904～0.5712μg for Psoralen， and 0.0312～0.936μg for isopsoralen. The average recoveries（n=6） were 102.3%， 99.6% and 103.6%， respectively. And RSDs were 0.7%、1.5% and 0.7%， respectively. Conclusion The method is for the determination of easy operation， reliable results， and reproducible. It can be used for the quality control of polydatin， psoralen and isopsoralen in Buzheng tablets.

[Key words] Buzheng tablets； HPLC； Polydatin； Psoralen； Isopsoralen

补正片是由补骨脂、生地黄、虎杖、酒黄精、赤芝、女贞子等十二味药制成的医疗机构中药复方制剂，具有补益气血，养阴填精，活血的功效。原质量标准仅有薄层鉴别和检查项，标准的可控性差。为提高标准的可控性，研究建立了高效液相法对补正片中虎杖和补骨脂的有效成分虎杖苷（Psoralen）和补骨脂素（psoralen）、异补骨脂素（isopsoralen）的含量进行测定，此方法专属性强、灵敏度高、重现性好，可用于补正片的质量控制。

1 实验材料

1.1 仪器和设备

Agilent Technologies1260 Infinity高效液相色谱仪，Sartorius 224S、225D电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）。

1.2 试药与试剂

虎杖苷、补骨脂素、异补骨脂素对照品，均购于中国食品药品检定研究院，批号分别为：111575-200502、110739-201202（含量99.3%）、110738-201012；甲醇为色谱纯（由Honeywell提供）；水为超纯水（由本所自制）；其他试剂均为分析纯（均由广州化学试剂厂提供）。补正片由广州中医药大学第一附属医院提供，规格：0.25g/片，批号为：131201、130601、140301。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Venusil XBP C18（L，250mm× 4.6mm， 5μm）；以甲醇（A）：水（B）为流动相进行梯度洗脱；洗脱过程见表1。流速：0.8mL/min，检测波长：240nm，进样体积：10μL。理论塔板数按虎杖苷峰、补骨脂素峰、异补骨脂素峰计算均应不低于3000；待测峰与相邻杂质峰的分离度均应>1.5。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 取虎杖苷对照品0.01045g，置于10mL量瓶中，加入50%甲醇溶解后定容至刻度，摇匀，即得每毫升含1.045ng的虎杖苷储备液；取补骨脂素对照品0.00952g，置于10mL量瓶中加入50%甲醇溶解后定容至刻度，摇匀，即得每毫升含0.9453ng的补骨脂素储备液；取异补骨脂素对照品0.01040g，置于10mL量瓶中加入50%甲醇溶解后定容至刻度，摇匀，即得每毫升含1.040ng的异补骨脂素储备液。精密移取虎杖苷、补骨脂素、异补骨脂素对照品储备液各3.0、1.0、1.5mL置于50mL量瓶，加50%甲醇稀释至刻度，即得虎杖苷、补骨脂素、异补骨脂素对照品混合液。

2.2.2 供试品溶液制备 取本品20片，研细，精密称取1.0g，置锥形瓶中，精密量取50%甲醇20mL，称定重量，加热回流30min，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，混匀，滤过，取续滤液，即得。